Tjeneste for utvikling av monoklonale antistoffer

Alpha Lifetech Inc.kan gi epitopprediksjon, peptidsyntese, proteinuttrykk, produksjon av polyklonale eller monoklonale antistoffer samt antistoffrensing fra cellekultur, ascitesvæske eller helserum.

Alpha Lifetech Inc.har erfaring med å tilby kunder ulike stabile cellelinjetjenester, inkludert hybridomceller, genomredigeringscellelinjer, knockdown-cellelinjer og overekspresjonscellelinjer. Vi prøver å tilby avanserte, tilpassede cellelinjetjenester til hver kunde, og tjenestene våre er velprøvde og pålitelige.

Strategi for antistoffutvikling

1. Antigendesign og -preparering
Disse antigenene kan være proteiner, peptider eller andre molekyler. Utforming av immunogener krever en omfattende tilnærming som integrerer kunnskap om antigenstruktur, immunologi og leveringssystemer. Alpha Lifetech har antigendesignteknologi som kan designe immunogener for kunder med behov.
Alpha Lifetech tilbyr rekombinante proteinprodukter som kundene kan velge mellom. Vi har en rekke proteinekspresjonssystemer, som E. coli-ekspresjonssystemer, gjærekspresjonssystemer, baculovirus-insektekspresjonssystemer, pattedyrekspresjonssystemer osv., for å produsere de rekombinante proteinene du trenger til forskning.

2. Dyreimmunisering
Alpha Lifetech kan tilby immunogener til kunder, og immune dyr som mus, kaniner, sauer, alpakkaer, marsvin, hamstere osv. er tilgjengelige for deg å velge mellom.

3. Metoder for produksjon av monoklonale antistoffer

●Mabs-produksjon med hybridomteknologi
Hybridom er en hybridcelle produsert ved fusjon av to typer celler, nemlig musemyelomcellelinje og plasmaceller (lymfocytt B), der den heterozygote cellen kan produsere kontinuerlige antistoffer mot antigenet av interesse in vitro. Produksjonen av en hybridomcellelinje består av tre deler: antigendesign (haptener, små molekyler og peptider), dyreimmunisering, cellefusjon og positiv klonscreening. Ved å bruke unike immuniseringsmetoder oppnår vi usedvanlig høy cellefusjonseffektivitet (1–10 hybridomer per tusen B-celler) og høye antistofftitre, noe som maksimerer suksessraten vår i påfølgende analytiske tester som inkluderer biokjemisk screening, in vitro cellebaserte analyser og dyrestudier.

●Mabs-produksjon ved hjelp av fagdisplayteknologi
Fagdisplay tilbyr en annen metode for å generere monoklonale antistoffer. B-lymfocytter isoleres fra dyreblod, og mRNA-en deres ekstraheres. Gjennom PCR omdannes dette mRNA-et til cDNA, som amplifiserer alle VH- og VL-segmentene. Disse segmentene klones deretter inn i en vektor, vanligvis som enkeltkjedede variable fragmenter (scFv), sammen med PIII-proteinet fra en bakteriofag. Deretter brukes denne konstruksjonen til å infisere E. coli, noe som resulterer i etableringen av et bibliotek som inneholder omtrent 10^10 celler gjennom inokulering med en hjelperfag. E. coli er deretter i stand til å utskille bakteriofagen som inneholder VH- og VL-segmentene som en del av kappen. Etter dette kan spesifikke VH- og VL-segmenter som er rettet mot antigenet av interesse, velges ut og brukes til å reinokulere E. coli med bakteriofagen. Celler som inneholder plasmidet isoleres og sekvenseres deretter.

4. Fusjonsscreening

●Cellefusjon og -seleksjon
De høstede B-cellene fusjoneres deretter med myelomceller, som er kreftceller som kan formere seg i det uendelige i kultur. Fusjonen oppnås vanligvis ved hjelp av en teknikk som polyetylenglykol (PEG)-fusjon.
Etter fusjon dyrkes hybridomcellene i et selektivt medium som bare lar hybridomene overleve. Mediet inneholder vanligvis aminopterin, som forhindrer vekst av ufusjonerte myelomceller.

●Screening og clogging
De resulterende hybridomcellene screenes for produksjon av antistoffer spesifikke mot målantigenet. Dette gjøres vanligvis ved hjelp av teknikker som enzymbundet immunosorbentanalyse (ELISA), Western blot, immunutfelling og flowcytometri.

Når hybridomcellene som produserer antistoffet er identifisert, klones de for å generere en populasjon av identiske celler. Dette sikrer at antistoffet som produseres av hver hybridomcelle er identisk.

5. Funksjonell verifisering av antistoffer
Alpha Lifetech tilbyr funksjonell validering av antistoffer, som Western blotting, immunhistokjemi eller funksjonelle analyser, for å karakterisere monoklonale antistoffer og bekrefte antistoffspesifisitet, affinitet og funksjonalitet.

6. Antistoffoptimalisering
Rensing av antistoffer fra kultursupernatant ved bruk av teknikker som protein A- eller protein G-affinitetskromatografi, og Alpha Lifetech kan også tilby antistoffmodifiseringsmetoder for å forbedre antistoffaffiniteten.

7. Antistoffproduksjon
Alpha Lifetech kan evaluere kandidatantistoffer for høykapasitets screeningapplikasjoner og storskala produksjon.