Platforma rozwoju przeciwciał bispecyficznych
Alpha Lifetech oferuje klientom wysokiej jakości produkty i usługi w zakresie odkrywania przeciwciał i rekombinowanych białek. Potrafimy przygotować przeciwciała o wysokiej skuteczności, wysokiej specyficzności i dobrej stabilności. Alpha Lifetech dysponuje szeroką gamą urządzeń i sprzętu do oczyszczania przeciwciał, które mogą świadczyć usługi oczyszczania przeciwciał z różnych źródeł, takich jak przeciwciała monoklonalne królicze, owcze, kurze i mysie, a także usługi oczyszczania powinowactwa białek A/G oraz separacji i oczyszczania przeciwciał. Bazując na kompleksowej platformie platformowej do odkrywania przeciwciał, platform białkowych itp., oferujemy usługi upstream i downstream w zakresie produkcji przeciwciał, a także oferujemy usługi techniczne, takie jak przygotowanie przeciwciał, oczyszczanie, separacja i oczyszczanie przeciwciał bispecyficznych, sekwencjonowanie przeciwciał, walidacja przeciwciał itp., które mogą być wykorzystane w terapii przeciwciałami bispecyficznymi.
Przeciwciała monoklonalne odnoszą się do immunoglobulin wytwarzanych przez pojedynczą komórkę B, które charakteryzują się wysoką swoistością wobec antygenów lub epitopów. Produkcja przeciwciał monoklonalnych była początkowo przygotowywana z wykorzystaniem technologii hybrydomowej w celu wytwarzania przeciwciał mysich. Dokładniej, poprzez fuzję komórek śledziony immunizowanych myszy z komórkami szpiczaka pobranymi od ludzi lub myszy, powstają komórki hybrydomowe, które wydzielają specyficzne przeciwciała. Wytworzone mysie przeciwciała monoklonalne są wykorzystywane głównie w badaniach na zwierzętach i diagnostyce chorób po oczyszczeniu. Jednak organizm ludzki wytwarza odpowiedź immunologiczną na obce białka myszy, dlatego istnieją istotne ograniczenia w klinicznym zastosowaniu produkcji mysich przeciwciał monoklonalnych. Później, ludzie stosowali „humanizację” do wytwarzania przeciwciał monoklonalnych od myszy, a także technologię inżynierii genetycznej do modyfikacji mysich przeciwciał tak, aby zawierały stały region ludzkiej immunoglobuliny w celu zmniejszenia ich immunogenności. Ten rodzaj przeciwciał jest również znany jako humanizowane przeciwciało monoklonalne. Ponadto, wykorzystanie komórek ludzkich do produkcji przeciwciał monoklonalnych nazywa się przygotowaniem całych ludzkich przeciwciał monoklonalnych. Przeciwciała monoklonalne są szeroko stosowane w zastosowaniach biomedycznych i klinicznych. W badaniach medycznych przeciwciała monoklonalne mogą być stosowane jako immunomodulatory, terapeutyczne przeciwciała monoklonalne mogą być stosowane w chemioterapii nowotworów i leczeniu infekcji wirusowych, a opracowywanie koniugatów przeciwciał monoklonalnych jest wykorzystywane głównie w leczeniu nowotworów.
Wprowadzenie do przeciwciał bispecyficznych
W 1960 roku zaproponowano koncepcję przeciwciał bispecyficznych. Przeciwciała bispecyficzne, znane również jako bispecyficzne przeciwciała monoklonalne, to przeciwciała syntetyzowane sztucznie z wykorzystaniem technologii inżynierii genetycznej. Jako sztuczne przeciwciało, przeciwciała bispecyficzne zazwyczaj należą do podklasy IgG i zawierają fragment wiążący antygen, ukierunkowany na podjednostkę CD3. Przeciwciała bispecyficzne posiadają dwa specyficzne miejsca wiązania antygenu, które mogą jednocześnie wiązać i rozpoznawać dwa różne antygeny lub dwa różne epitopy antygenu. W porównaniu z przeciwciałami monoklonalnymi, przeciwciała bispecyficzne posiadają dodatkowe specyficzne miejsce wiązania antygenu, dzięki czemu charakteryzują się większą swoistością i zdolnością do celowania, co pozwala na precyzyjniejsze namierzanie komórek nowotworowych i zmniejszenie toksyczności poza miejscem docelowym. Przeciwciała bispecyficzne mogą jednocześnie pełnić wiele funkcji biologicznych, takich jak rekrutacja komórek układu odpornościowego, blokowanie szlaków sygnałowych i bezpośrednie zabijanie komórek nowotworowych. Wczesne przeciwciała bispecyficzne otrzymywano głównie poprzez koniugację chemiczną lub fuzję komórek, ale ta metoda mogła być powoli rozwijana ze względu na losową kombinację i trudności w wyizolowaniu kombinacji docelowej. Dzięki ciągłemu rozwojowi technologii inżynierii genetycznej opracowano wiele nowych platform technologicznych, takich jak „węzły w otworach” (KIH), CrossMab, DVD Ig itp. Platformy te skutecznie rozwiązują problemy, takie jak niedopasowania łańcuchów ciężkich i lekkich, a także poprawiają jednorodność i wydajność przeciwciał bispecyficznych.

Rys. 1 Uproszczony schematyczny przegląd proponowanych mechanizmów działania przeciwciał bispecyficznych (bsAbs) w badaniach klinicznych w onkologii.(Źródło rysunku: Przegląd bispecyficznych przeciwciał i konstrukcji przeciwciał w onkologii i wyzwaniach klinicznych – ScienceDirect)
Technologia produkcji przeciwciał bispecyficznych
Główne metody produkcji przeciwciał bispecyficznych obejmują sprzęganie chemiczne, hybrydomę z czterema źródłami oraz genetyczną inżynierię wytwarzania przeciwciał. Wśród nich, metoda sprzęgania chemicznego polega na połączeniu dwóch nienaruszonych IgG lub dwóch fragmentów przeciwciała F(ab')2 w przeciwciała bispecyficzne za pomocą chemicznych czynników sprzęgających, takich jak ftalimid i kwas ditioacylobenzoesowy. Metoda ta jest prosta i łatwa w obsłudze, ale może uszkodzić miejsce wiązania antygenu, zmniejszyć aktywność przeciwciała, a sam czynnik sprzęgający ma również pewien stopień rakotwórczości. Metoda hybrydomy z czterema źródłami opiera się na fuzji komórek somatycznych z dwóch różnych linii komórkowych hybrydomy w celu ekspresji odpowiadającej im mysiej IgG. Dzięki inżynierii genetycznej przeciwciała można modyfikować genetycznie, tworząc przeciwciała bispecyficzne. Skonstruowano dwa różne przeciwciała monoklonalne, a fragmenty Fab, czyli regiony zmienne łańcucha ciężkiego i lekkiego obu przeciwciał, rozszczepiono oddzielnie. Poprzez reakcję sieciowania lub technologię rekombinacji łańcucha, oba fragmenty połączono, tworząc przeciwciało bispecyficzne. Chociaż technologia inżynierii genetycznej jest stosunkowo złożona, jest to obecnie najczęściej stosowana metoda produkcji przeciwciał bispecyficznych, pozwalająca na modyfikację ich struktury i funkcji. Podczas projektowania przeciwciał bispecyficznych można wykorzystać zasadę reaktywności krzyżowej przeciwciał, jednak reaktywność krzyżowa przeciwciał może powodować reakcje niespecyficzne, dlatego należy ją starannie rozważyć w praktycznym zastosowaniu projektowania przeciwciał bispecyficznych, takim jak terapia przeciwciałami bispecyficznymi.
Oczyszczanie przeciwciał bispecyficznych
Oczyszczanie przeciwciał bispecyficznych to proces izolacji i oczyszczania docelowych przeciwciał o wysokiej czystości. Do usunięcia niektórych rozpuszczalnych zanieczyszczeń stosuje się dwie metody – wirowanie i głęboką filtrację. Docelowe przeciwciało bispecyficzne jest początkowo wychwytywane za pomocą chromatografii powinowactwa. W przypadku przeciwciał bispecyficznych typu IgG stosuje się chromatografię powinowactwa z białkiem A, natomiast w przypadku przeciwciał bispecyficznych innych niż IgG – chromatografię powinowactwa z łańcuchem lekkim. Następnie przeciwciało jest inkubowane w warunkach niskiego pH przez określony czas, co powoduje zaburzenie struktury białkowej na powierzchni otoczki wirusa, a tym samym utratę zdolności do infekowania komórek. Pośrednia głęboka filtracja jest przeprowadzana w celu dalszego usunięcia zanieczyszczeń, takich jak białka komórek gospodarza (HCP). Czystość przeciwciał jest poprawiana za pomocą metod takich jak chromatografia jonowymienna, a wszelkie pozostałości wirusów są usuwane za pomocą technik nanofiltracji lub ultrafiltracji. Na koniec próbka jest zagęszczana i zastępowana odpowiednim buforem formulacyjnym.
Przepływ pracy usługi produkcji przeciwciał bispecyficznych
| Kroki | Treść usługi | Oś czasu |
|---|---|---|
| Synteza genów | Generowanie do 3 różnych schematów projektowania sekwencji, generowanie de novo rekombinowanych plazmidów DNA przeciwciał | 2-3 tygodnie |
| Test na małą skalę | Produkcja przeciwciał bispecyficznych → Ekspresja na małą skalę w liniach komórkowych ssaków → Walidacja metodą SDS-PAGE → Analiza wiązania z antygenami białkowymi rekombinowanymi metodą ELISA → Porównanie klonów z przeciwciałami rodzicielskimi | 5-6 tygodni |
| Zidentyfikować | Ekspresja pierwszych dwóch pełnowymiarowych przeciwciał bispecyficznych → Analiza wiązania metodą ELISA → Ocena metodą ELISA przeciwciał rozpoznawanych przez przeciwciała anty-mysie | 1 tydzień |
| Produkcja przeciwciał | Produkcja przeciwciał na dużą skalę | 3-4 tygodnie |
Jeżeli mają Państwo jakiekolwiek pytania, prosimy o kontakt z nami w każdej chwili.
Leave Your Message
0102






2018-07-16 

