Platforma rozwoju przeciwciał eksponowanych przez fagi

Alpha Lifetech, dzięki bogatemu doświadczeniu w projektach odkrywania przeciwciał, oferuje spersonalizowane usługi w zakresie przeciwciał monoklonalnych i poliklonalnych dla wielu gatunków, a także usługi budowy bibliotek przeciwciał i ich przesiewu. Alpha Lifetech oferuje klientom wysokiej jakości produkty przeciwciałowe i rekombinowane, a także powiązane usługi w zakresie przygotowania wydajnych, wysoce specyficznych i stabilnych przeciwciał. Wykorzystując kompleksowe platformy przeciwciałowe i inżynierię przeciwciał, oferujemy usługi obejmujące zarówno wstępny, jak i końcowy etap produkcji przeciwciał, w tym usługi techniczne, takie jak przygotowanie przeciwciał, oczyszczanie, sekwencjonowanie przeciwciał i walidacja.

Alpha Lifetech dysponuje dopracowaną platformą do odkrywania przeciwciał, która oferuje klientom szereg usług, w tym badania odporności zwierząt, budowę i przesiew bibliotek przeciwciał z ekspozycją fagową, sekwencjonowanie przeciwciał, ekspresję przeciwciał, oczyszczanie przeciwciał, walidację przeciwciał oraz znakowanie przeciwciał w oparciu o technologię hybrydom, technologię pojedynczych komórek B, technologię ekspozycji fagowej i wiele innych. Alpha Lifetech posiada standardową linię produkcyjną, a oprócz usług przygotowania przeciwciał, oferuje również usługi pomocnicze, takie jak humanizacja przeciwciał, dojrzewanie powinowactwa przeciwciał, projektowanie i rozwój leków ADC oraz sekwencjonowanie CAR-T. Jednocześnie Alpha Lifetech zbudował bibliotekę przeciwciał opartą na platformach technologii ekspozycji fagowej M13, T4 i T7, o pojemności do 108-109. Współczynnik dodatni, współczynnik insercji i różnorodność biblioteki mogą sięgać ponad 90%.

Technologia wyświetlania fagów

Produkcja przeciwciał monoklonalnych została początkowo przygotowana z wykorzystaniem technologii hybrydowych przeciwciał monoklonalnych w celu wytworzenia mysich przeciwciał monoklonalnych hybrydom. Dokładniej, poprzez fuzję komórek śledziony immunizowanych myszy z komórkami szpiczaka pobranymi od ludzi lub myszy, powstają komórki hybrydom, które wydzielają specyficzne hybrydowe przeciwciała monoklonalne. Poprzez humanizowaną modyfikację mysich przeciwciał monoklonalnych i modyfikację genetyczną przeciwciał, polegającą na nadaniu im stałego regionu immunoglobuliny ludzkiej, można zmniejszyć ich immunogenność. Inżynieria przeciwciał monoklonalnych jest szeroko stosowana w zastosowaniach biomedycznych i klinicznych.

Alpha Lifetech oferuje kompleksowe usługi inżynierii przeciwciał, od projektowania protokołów badań przedklinicznych, przez odkrywanie koniugatów przeciwciało-lek (ADC), po walidację na zwierzętach. Koniugaty przeciwciało-lek (ADC) mogą dostarczać leki chemioterapeutyczne do komórek nowotworowych. Po związaniu się ze specyficznymi cząsteczkami docelowymi obecnymi na komórkach nowotworowych, ADC uwalnia leki cytotoksyczne do komórek nowotworowych. Alpha Lifetech oferuje również klientom kompleksowe usługi dojrzewania powinowactwa przeciwciał. Dzięki zaawansowanej optymalizacji mutacji i technologii wysokoprzepustowego przesiewu fagowego, przeciwciała o określonym powinowactwie są najpierw przesiewane, a następnie wprowadzane są mutacje aminokwasów w celu wygenerowania różnorodnych wariantów. Następnie przeciwciała o wysokim powinowactwie zostały ocenione i przesiane za pomocą technik przesiewowych. Po wielu rundach optymalizacji i analizy strukturalnej ostatecznie uzyskano przeciwciała o wyższym powinowactwie i silniejszej swoistości.

Alpha Lifetech może konstruować różnego rodzaju biblioteki przeciwciał do prezentacji fagowej, w tym biblioteki immunologiczne, biblioteki natywne, biblioteki półsyntetyczne i biblioteki syntetyczne. Dzięki dużej pojemności bibliotek przeciwciał możliwe jest uzyskanie wysoce swoistych przeciwciał. Dostępne są wektory wielofagemidowe, takie jak pMECS, pComb3X i pCANTAB 5E, a także szczepy takie jak TG1 E. coli, XL1 Blue i ER2738. Oprócz pojemności biblioteki do 10^9, biblioteka charakteryzuje się również wysoką szybkością insercji fragmentów docelowych, co stwarza wystarczające warunki do badania przesiewowego przeciwciał, satysfakcjonujące klientów. Schemat blokowy usługi przygotowywania przeciwciał w oparciu o technologię prezentacji fagowej firmy Alpha Lifetech przedstawiono na rysunku 1.

Rys.1 Schemat procesu przygotowywania przeciwciał monoklonalnych w oparciu o technologię prezentacji fagowej.

Przebieg pracy nad produkcją przeciwciał eksponowanych przez fagi

Kroki	Treść usługi	Oś czasu
Krok 1: Uodpornienie zwierząt	(1) Uodpornienie zwierząt 4 razy, szczepienie przypominające 1 dawka, łącznie podano 5 dawek. (2) Przed szczepieniem pobrano surowicę ujemną, a po czwartej dawce wykonano test ELISA w celu określenia miana surowicy. (3) Jeśli miano przeciwciał w surowicy po czwartej dawce spełni wymagania, 7 dni przed pobraniem krwi zostanie podana jedna dodatkowa dawka szczepionki. Jeśli nie spełni wymagań, szczepienia rutynowe będą kontynuowane. (4) Potencja kwalifikowana, pobieranie krwi i separacja monocytów	10 tygodni
Krok 2: Przygotowanie cDNA	(1) Ekstrakcja całkowitego RNA z PBMC (zestaw do ekstrakcji RNA) (2) Przygotowanie cDNA metodą RT-PCR o wysokiej wierności (zestaw do odwrotnej transkrypcji)	1 dzień
Krok 3: Konstrukcja biblioteki przeciwciał	(1) Używając cDNA jako matrycy, geny amplifikowano w dwóch rundach PCR. (2) Konstrukcja i transformacja fagów: wektor fagemidowy do składania genów, transformacja elektroporacyjna bakterii gospodarza TG1, konstrukcja biblioteki przeciwciał. (3) Identyfikacja: Losowy wybór 24 klonów, pozytywny wskaźnik identyfikacji PCR + wskaźnik insercji. (4) Wspomagane przygotowanie fagów: amplifikacja i oczyszczanie faga M13. (5) Ratowanie biblioteki ekspozycji fagowej	3-4 tygodnie
Krok 4: Przesiewanie biblioteki przeciwciał (3 rundy)	(1) Standardowe badanie przesiewowe obejmujące 3 rundy (badanie fazy stałej): badanie przesiewowe pod ciśnieniem mające na celu usunięcie w maksymalnym możliwym stopniu nieswoistych przeciwciał. (2) Amplifikacja pojedynczego klonu za pomocą wyselekcjonowanego bakteriofaga + ekspresja indukowana przez IPTG + wykrywanie klonów dodatnich za pomocą testu ELISA. (3) Wszystkie pozytywne klony wybrano do sekwencjonowania genów.	4-5 tygodni

Zaleta technologii wyświetlania fagów

Alpha Lifetech posiada bogate doświadczenie w dziedzinie rozwoju przeciwciał. Na przestrzeni lat Alpha Lifetech stworzył kompleksową platformę do rozwoju przeciwciał.

Usługi wsparcia

Możemy zapewnić różne usługi budowy bibliotek odpornościowych na bazie zwierząt oraz usługi przeszukiwania bibliotek przeciwciał naturalnych zgodnie z potrzebami klienta.

Wiele celów

Dostępne są usługi odkrywania wielu przeciwciał docelowych: białek, peptydów, małych cząsteczek, wirusów, białek błonowych, mRNA itp.

Wiele wektorów

Spersonalizowana usługa budowy biblioteki. Możemy dostarczyć różne wektory bakteriofagowe, w tym PMECS, pComb3X i pCANTAB 5E, i zmodyfikować je zgodnie z potrzebami klienta.

Dojrzała platforma

Pojemność pamięci może osiągnąć 10^8-10^9, współczynniki wprowadzania wynoszą powyżej 90%, a powinowactwo przeciwciał uzyskanych w wyniku przesiewu jest na ogół na poziomie nM pM

Powiązana USŁUGA

Strategie rozwoju wielu przeciwciał

Usługa rozwoju przeciwciał monoklonalnych

Platforma Technologii Hybrydowej

Pojedyncza platforma sortowania komórek B

Platforma rozwoju przeciwciał eksponowanych przez fagi

rozwój przeciwciał monoklonalnych – Alpha Lifetech

Usługa rozwoju przeciwciał monoklonalnych

Możemy zapewnić wysokiej jakości, wysoce czyste i wysoce specyficzne usługi rozwoju przeciwciał monoklonalnych, w tym produkcję przeciwciał monoklonalnych dla myszy i króliczych

Platforma Technologii Hybrydowej

W tym program szczepień, usługi przygotowywania przeciwciał, oczyszczanie przeciwciał, sekwencjonowanie przeciwciał o wysokiej przepustowości, walidacja przeciwciał itp.

badanie przesiewowe komórek B – Alpha Lifetech

Pojedyncza platforma sortowania komórek B

Alpha Lifetech oferuje przewagę w zakresie czasu przesiewu i pozyskiwania wysokiej jakości przeciwciał. Oferuje projektowanie, syntezę i modyfikację antygenów, badania odporności zwierząt, wzbogacanie pojedynczych limfocytów B oraz sekwencjonowanie pojedynczych komórek.