Serviço de Maturação de Afinidade de Anticorpos

Alpha Lifetech Inc.Oferecemos serviços de maturação de afinidade de anticorpos utilizando tecnologias de mutação e seleção. Normalmente, utilizamos scFv como formato de anticorpo nos processos de maturação de afinidade e um sistema de fagemídeo monovalente, que tem sido usado para reduzir os efeitos da avidez durante a triagem de ligação ao antígeno. Nossa equipe especializada também pode fornecer serviços de maturação de afinidade para anticorpos de domínio único.

Alpha Lifetech Inc.Temos orgulho de oferecer serviços abrangentes para atender às diversas necessidades de clientes globais. Nosso objetivo é compreender e atender às demandas de diferentes clientes e auxiliar na resolução de quaisquer problemas emergentes em trabalhos de pesquisa.

O que é maturação de afinidade?

A maturação de afinidade é o processo pelo qual os anticorpos sofrem mutações e seleção repetidas para aumentar sua afinidade por antígenos específicos. Ocorrendo principalmente no centro germinativo dos órgãos linfoides secundários, as células B sofrem hipermutação somática e seleção sob a influência das células T e das células dendríticas foliculares.
Durante o processo de maturação de afinidade, as células B com receptores de imunoglobulina de baixa afinidade na superfície são ativadas pelo encontro com o antígeno e sofrem proliferação e diferenciação. Através da maturação de afinidade por hipermutação somática, ocorrem substituições aleatórias de nucleotídeos na região variável dos genes de imunoglobulina, levando à produção de diversas variantes de anticorpos. Após a hipermutação somática, a seleção dirigida pelo antígeno é realizada nas células B com receptores de imunoglobulina mutados. As células B que produzem anticorpos com maior afinidade antigênica são preferencialmente retidas e podem proliferar, enquanto as células B com afinidade diminuída ou inalterada sofrem apoptose. Esse processo iterativo de mutação e seleção leva à produção de clones de células B, que produzem anticorpos com afinidade progressivamente maior pelo antígeno.

Serviço de Maturação de Afinidade de Anticorpos

As principais vantagens dos métodos baseados em PCR são que as mutações são direcionadas com precisão ao fragmento amplificado; a taxa de erro é fácil de controlar; o método é rápido e fácil de implementar e não utiliza produtos químicos perigosos. É sabido que a Taq DNA polimerase duplica o DNA com baixa fidelidade, principalmente devido à ausência de atividade de revisão na direção 3' para 5'.Alpha LifetechA plataforma de engenharia de anticorpos aplica uma abordagem de PCR propensa a erros para mutar principalmente as regiões CDR durante a construção da sub-biblioteca. Frequentemente, criamos mutações em posições completamente aleatórias ao longo de todos os fragmentos VH e VL, a fim de aumentar a diversidade genética da sub-biblioteca. Após a construção de uma biblioteca de genes de anticorpos mutados por PCR propensa a erros, a seleção de variantes de alta afinidade (a afinidade dos anticorpos scFv pode atingir 10^8 - 10^10 M) é realizada por panning em solução ou em antígeno imobilizado com condições de lavagem otimizadas para seleção dependente da taxa de dissociação.
  
Cientistas emAlpha Lifetech Inc.Utilizamos cepas mutadoras de Escherichia coli mutAD5TM como uma das várias estratégias de mutação para introduzir mutações aleatórias e, assim, modificar a afinidade e a expressão de fragmentos de anticorpos recombinantes. As condições de seleção podem ser modificadas para fragmentos de anticorpos com níveis de produção aumentados. As condições de crescimento em células mutadoras de Escherichia coli podem ser ajustadas para introduzir uma única mutação pontual aleatória por quilobase de DNA, o que é quase equivalente a uma alteração de códon por fragmento scFv. Após vários ciclos de mutação, apresentação e seleção, podemos melhorar a constante de afinidade de 10⁵ - 10⁶ M para 10⁸ - 10¹⁰ M.

Aprimorar as estratégias de maturação de afinidade

Determinadas posições de anticorpos podem ser randomizadas com uma diversidade definida (como randomização completa com todos os 20 aminoácidos ou randomização enviesada com aminoácidos selecionados em porcentagens fixas) para melhorar a afinidade. Temos duas estratégias para melhorar a afinidade do anticorpo: primeiro, mutações são introduzidas em posições restritas nas regiões determinantes de complementaridade (CDRs) por meio de mutagênese sítio-dirigida; segundo, mutações são introduzidas em toda a região codificadora de V por meio de mutagênese aleatória. Ao utilizar esses dois métodos, as sequências de aminoácidos conservadas ou toda a região estrutural do anticorpo serão substituídas por outros aminoácidos, o que, combinado com nossas tecnologias de varredura de biblioteca de peptídeos, pode aumentar consideravelmente a afinidade dos anticorpos de interesse.

Apresentação em fago - afinidade de anticorpos

Uma vez construída a biblioteca de mutantes scFv, duas estratégias de triagem estão disponíveis: biopanning e triagem de antígenos em fase sólida. Na primeira, utiliza-se uma concentração subtrativa de substrato para isolar o anticorpo de alta afinidade, uma vez que os mutantes de baixa afinidade seriam removidos por lavagem, restando apenas as partículas de fago de alta avidez. A segunda estratégia utiliza um antígeno marcado em solução, com seleção baseada na constante de equilíbrio (Kd) e na cinética de ligação. Essa abordagem de seleção identifica variantes de anticorpos com Kd aprimorado.

Caso tenha alguma dúvida, não hesite em nos contatar a qualquer momento.