Serviço de Análise e Caracterização de Aptâmeros

A Alpha Lifetech oferece serviços relacionados a aptâmeros há muitos anos e atualmente fornece soluções completas para o desenvolvimento de aptâmeros, incluindo síntese, triagem SELEX, sequenciamento de alto rendimento, otimização e caracterização. Com base nas vantagens do método SELEX para triagem de aptâmeros, a Alpha Lifetech expandiu seu leque de métodos para essa finalidade.

Introdução à Análise de Caracterização de Aptâmeros

Verificação de afinidade

A afinidade otimizada do aptâmero foi verificada por técnicas relevantes, como o ensaio de ligação do aptâmero. Exemplos incluem Calorimetria de Titulação Isotérmica (ITC), Citometria de Fluxo (FCM), Ressonância de Plásmon de Superfície (SPR), Microfluídica, etc. A afinidade do aptâmero é geralmente expressa pela constante de dissociação (KD), uma grandeza física usada para quantificar o grau de dissociação molecular em uma reação reversível. Quanto menor o valor de KD, mais estável o complexo, ou seja, mais forte a afinidade; inversamente, quanto maior o valor de KD, mais instável o complexo e mais fraca a afinidade. Esta etapa é fundamental para identificar o desempenho do aptâmero, garantindo a maturação da sua afinidade e permitindo que ele se ligue à molécula-alvo com alta afinidade e seletividade em aplicações práticas.

Figura 1. Processo de maturação da afinidade do aptâmero. Fonte de referência:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Verificação de função

Além da verificação de afinidade, a função do aptâmero precisa ser verificada. Isso inclui verificar a estabilidade, a especificidade e as interações do aptâmero com outras moléculas em um ambiente específico. Os resultados da verificação funcional afetarão diretamente o valor dos aptâmeros em pesquisas científicas e aplicações industriais.

Verificação específica

Experimento competitivo: A capacidade do aptâmero de se ligar a um alvo específico é avaliada na presença de outros alvos semelhantes. Se o aptâmero conseguir se ligar especificamente à molécula-alvo sem interferência de outras moléculas, isso indica que ele possui alta especificidade.

Experimento de reação cruzada: O aptâmero é ligado a uma série de alvos relacionados ou não relacionados para verificar se ele se liga apenas a um alvo específico, de forma a comprovar sua especificidade.

Verificação de estabilidade

Experimento de degradação por nucleases: Os aptâmeros foram expostos a diferentes concentrações de nucleases e sua degradação foi observada. Comparando o grau de degradação em diferentes momentos, a capacidade de resistência à degradação por nucleases do aptâmero pode ser avaliada.

Experimento de estabilidade à temperatura e ao tempo: O aptâmero foi submetido a diferentes condições de temperatura e tempo para observar sua estabilidade estrutural e funcional. Isso auxilia na determinação das condições ideais de armazenamento e uso dos aptâmeros.

Identificação de atividade biológica

O método apropriado geralmente é selecionado de acordo com o objetivo específico da aplicação do aptâmero de ácido nucleico.

(1) Teste em nível molecular: Utilizando técnicas de biologia molecular, como eletroforese em gel, Western blot, etc., para detectar os complexos formados após o aptâmero se combinar com a molécula alvo, ou detectar as mudanças no nível de expressão da molécula alvo causadas pelo aptâmero.

(2) Testes em nível celular: Utilizando tecnologia de cultura celular, os aptâmeros são incubados com células-alvo para observar alterações biológicas, como morfologia celular, proliferação e apoptose, e avaliar a atividade biológica dos aptâmeros.

(3) Testes em modelos animais: Em modelos animais apropriados, os aptâmeros de ácido nucleico são administrados por injeção ou administração de drogas, e os indicadores fisiológicos e as alterações patológicas dos animais são observados para avaliar a atividade biológica e a segurança dos aptâmeros in vivo.