Plataforma de Desenvolvimento de Aptâmeros

Os aptâmeros são oligonucleotídeos de cadeia simples (DNA, RNA ou XNA) com a propriedade de alta afinidade e alta especificidade, que se ligam especificamente a moléculas-alvo como anticorpos, e são amplamente utilizados no desenvolvimento de biossensores, diagnósticos e terapias.

A plataforma de aptâmeros oferecida pela Alpha Lifetech inclui duas categorias: plataforma de síntese de aptâmeros, que envolve principalmente o serviço de síntese de biblioteca de aptâmeros SELEX e o serviço de desenvolvimento de aptâmeros (DNA, RNA ou XNA), e plataforma de triagem de aptâmeros, que inclui serviços de triagem baseados na tecnologia SELEX para proteínas, peptídeos, células, pequenas moléculas, íons metálicos e outras moléculas-alvo, bem como serviços subsequentes de otimização e análise de identificação de aptâmeros.

Plataforma de síntese de aptâmeros

Serviço de síntese de biblioteca de aptâmeros SELEX

O serviço de síntese de bibliotecas de aptâmeros SELEX consiste principalmente na construção de uma biblioteca contendo um grande número de sequências aleatórias de oligonucleotídeos de fita simples por síntese química in vitro, de acordo com as moléculas-alvo. A construção da biblioteca é o ponto de partida da tecnologia SELEX, que fornece abundantes sequências candidatas para o processo de triagem subsequente, através da construção de grandes bibliotecas aleatórias, aumentando a possibilidade de triagem de aptâmeros de alta afinidade.

A síntese de bibliotecas é dividida principalmente nas seguintes etapas:

Passos	Detalhes da tecnologia
Identificar moléculas-alvo	Identificar as moléculas-alvo que precisam ser analisadas quanto à presença de aptâmeros, que podem ser proteínas, ácidos nucleicos, pequenas moléculas, íons metálicos, etc.
Projeto de Sequência Aleatória	O comprimento da sequência aleatória, a composição de bases e outros parâmetros foram definidos de acordo com as características das moléculas-alvo e os requisitos de triagem. Normalmente, as sequências aleatórias têm entre dezenas e centenas de bases de comprimento.
Síntese de Sequências Fixas	Fragmentos de oligonucleotídeos com sequências fixas (como sequências de primers de PCR) em ambas as extremidades são projetados e sintetizados, os quais serão utilizados no processo subsequente de amplificação e triagem.

A biblioteca sintetizada ainda precisa ser processada para controle de qualidade. A concentração da biblioteca foi determinada para garantir sua aplicabilidade no processo de triagem subsequente. A diversidade e a precisão das sequências aleatórias na biblioteca foram verificadas por sequenciamento e outros métodos para garantir que a qualidade da biblioteca atendesse aos requisitos de triagem.

Por meio das etapas acima, é possível sintetizar uma biblioteca de aptâmeros SELEX de alta qualidade e grande diversidade, que pode fornecer sequências candidatas abundantes para o processo de triagem subsequente.

Serviços de desenvolvimento de aptâmeros (DNA, RNA ou XNA)

Aptâmeros geralmente se referem a aptâmeros de ácidos nucleicos. Os aptâmeros de ácidos nucleicos incluem aptâmeros de DNA, aptâmeros de RNA e aptâmeros XNA, que são aptâmeros de ácidos nucleicos quimicamente modificados. A técnica SELEX é amplamente utilizada para o desenvolvimento de aptâmeros. O fluxo de trabalho básico dos serviços de desenvolvimento de aptâmeros inclui a construção de bibliotecas, ligação ao alvo, isolamento e purificação, amplificação, múltiplas rodadas de triagem e identificação de sequências. Há muitos anos, nos dedicamos à construção de bibliotecas e acumulamos vasta experiência no desenvolvimento de aptâmeros. Nosso compromisso é fornecer aos nossos clientes serviços de excelência.

Processo de Tecnologia SELEX

O processo SELEX consiste em várias rodadas, cada uma das quais consiste nas seguintes etapas principais:

Vinculação de biblioteca e destino

A biblioteca de ácidos nucleicos construída é misturada com moléculas-alvo específicas (como proteínas, compostos de pequenas moléculas, etc.), de modo que as sequências de ácidos nucleicos na biblioteca tenham a oportunidade de se ligar às moléculas-alvo.

Isolamento de moléculas não ligadas

Sequências de ácidos nucleicos que não estão ligadas à molécula alvo são separadas da mistura por métodos específicos, como cromatografia de afinidade, separação por esferas magnéticas, etc.

Amplificação de moléculas de ligação

A sequência de ácido nucleico ligada a uma molécula alvo é amplificada, geralmente utilizando a tecnologia de reação em cadeia da polimerase (PCR). Para a fase de triagem subsequente, as sequências amplificadas serão utilizadas como biblioteca inicial.

Figura 1: Processo de triagem SELEX

Plataforma de triagem de aptâmeros

Serviço de triagem de aptâmeros

A Alpha Lifetech oferece uma ampla gama de serviços especializados de triagem de aptâmeros, aplicando diversas metodologias SELEX para diferentes tipos de moléculas:

Tipos de alvos	Detalhes técnicos
Triagem de aptâmeros de proteínas por SELEX	O principal objetivo da triagem de aptâmeros de proteínas é selecionar aptâmeros que possam se ligar especificamente a moléculas de proteínas-alvo. Esses aptâmeros são mais simples de sintetizar, mais estáveis e menos suscetíveis a fatores ambientais.
Triagem de aptâmeros peptídicos por SELEX	Os aptâmeros peptídicos são uma classe de sequências peptídicas curtas com alta especificidade e afinidade, capazes de se ligar especificamente a substâncias-alvo e apresentar um amplo potencial de aplicação na área biomédica. Através de um processo de triagem específico, aptâmeros peptídicos que se ligam especificamente a moléculas-alvo são selecionados a partir de um grande número de bibliotecas de sequências peptídicas aleatórias.
Triagem de aptâmeros específicos para células (Cell-SELEX)	Células-alvo ou moléculas específicas na superfície celular são preparadas como alvos. Os alvos podem ser células inteiras, receptores na membrana celular, proteínas ou outras moléculas pequenas.
Triagem de aptâmeros de pequenas moléculas por SELEX de captura	O Capture SELEX é uma técnica de triagem in vitro para a seleção de aptâmeros de pequenas moléculas, sendo uma variante do SELEX. O Capture SELEX é particularmente adequado para a triagem de aptâmeros de pequenas moléculas-alvo, que tipicamente possuem poucos grupos funcionais e são difíceis de imobilizar diretamente em suportes de fase sólida.
Serviços SELEX baseados em animais vivos	O serviço de triagem com animais vivos é uma técnica experimental amplamente utilizada nas áreas de biociência, medicina e biotecnologia, que utiliza animais vivos como modelos experimentais para triar e avaliar moléculas específicas, medicamentos, terapias ou processos biológicos. Os serviços são projetados para simular o ambiente fisiológico do corpo humano, a fim de prever e avaliar com maior precisão a eficácia e a segurança dos resultados experimentais no organismo humano.

Serviço de otimização de aptâmeros

A hidrofilicidade, a alta perda de afinidade durante a produção e a rápida excreção dos aptâmeros limitam sua aplicação. Atualmente, diversos métodos de otimização têm sido explorados para melhorar o desempenho dos aptâmeros.

Também dispomos de diversas maneiras de otimizar o aptâmero, incluindo truncamento, modificações e conjugação ao grupo apropriado (tiol, carboxila, amina, fluoróforo, etc.).

Serviço de análise de caracterização de aptâmeros

O serviço de análise de caracterização de aptâmeros refere-se ao serviço profissional de avaliação de desempenho, resolução estrutural e verificação funcional do aptâmero obtido, para garantir que este atenda aos requisitos de capacidade de ligação específica, estabilidade e especificidade. Inclui principalmente análises de afinidade e especificidade, avaliação de estabilidade e verificação da função biológica.