Plataforma de desenvolvimento Aptamer

Aptâmeros são oligonucleotídeos de fita simples (DNA, RNA ou XNA) com a propriedade de alta afinidade e alta especificidade que se ligam especificamente a moléculas alvo, como anticorpos, e são amplamente utilizados para o desenvolvimento de biossensores, diagnósticos e terapêuticas.

A plataforma de aptâmeros fornecida pela Alpha Lifetech inclui duas categorias: plataforma de síntese de aptâmeros, que envolve principalmente o serviço de síntese de biblioteca de aptâmeros SELEX e o serviço de desenvolvimento de aptâmeros (DNA, RNA ou XNA), e plataforma de triagem de aptâmeros, incluindo serviços de triagem baseados na tecnologia SELEX para proteínas, peptídeos, células, pequenas moléculas, íons metálicos e outras moléculas-alvo, bem como serviços de otimização de aptâmeros e análise de identificação downstream.

Plataforma de síntese de aptâmeros

Serviço de síntese de biblioteca de aptâmeros SELEX

O serviço de síntese de biblioteca de aptâmeros SELEX envolve principalmente a construção de uma biblioteca contendo um grande número de sequências aleatórias de oligonucleotídeos de fita simples por síntese química in vitro de acordo com as moléculas alvo. A construção da biblioteca é o ponto de partida da tecnologia SELEX, que fornece sequências candidatas abundantes para o processo de triagem subsequente pela construção de enormes bibliotecas aleatórias e aumenta a possibilidade de triagem de aptâmeros de alta afinidade.

A síntese da biblioteca é dividida principalmente nas seguintes etapas:

Passos	Detalhes da tecnologia
Identificar moléculas alvo	Identifique as moléculas-alvo que precisam ser rastreadas quanto a aptâmeros, que podem ser proteínas, ácidos nucleicos, moléculas pequenas, íons metálicos, etc.
Projeto de sequência aleatória	Comprimento de sequência aleatória, composição de base e outros parâmetros foram projetados de acordo com as características das moléculas alvo e requisitos de triagem. Normalmente, sequências aleatórias têm entre dezenas e centenas de bases de comprimento.
Síntese de Sequências Fixas	Fragmentos de oligonucleotídeos com sequências fixas (como sequências de primers de PCR) em ambas as extremidades são projetados e sintetizados, os quais serão usados no processo subsequente de amplificação e triagem.

A biblioteca sintetizada ainda precisa ser processada para controle de qualidade. A concentração da biblioteca foi determinada para garantir sua aplicabilidade no processo de triagem subsequente. A diversidade e a precisão das sequências aleatórias na biblioteca foram verificadas por sequenciamento e outros métodos para garantir que a qualidade da biblioteca atendesse aos requisitos de triagem.

Por meio das etapas acima, uma biblioteca de aptâmeros SELEX de alta qualidade e altamente diversificada pode ser sintetizada, o que pode fornecer sequências candidatas abundantes para o processo de triagem subsequente.

Serviços de desenvolvimento de aptâmeros (DNA, RNA ou XNA)

Aptâmeros geralmente se referem a aptâmeros de ácido nucleico. Aptâmeros de ácido nucleico incluem aptâmeros de DNA, aptâmeros de RNA e aptâmeros de XNA, que são aptâmeros de ácido nucleico quimicamente modificados. A técnica SELEX é amplamente empregada para o desenvolvimento de aptâmeros. O fluxo de trabalho básico dos serviços de desenvolvimento de aptâmeros inclui construção de biblioteca, ligação de alvo, isolamento e purificação, amplificação, múltiplas rodadas de triagem e identificação de sequência. Por muitos anos, nos concentramos na construção de bibliotecas e rica experiência em desenvolvimento de aptâmeros. Estamos comprometidos em fornecer aos clientes melhores serviços.

Processo de Tecnologia SELEX

O processo SELEX consiste em várias rodadas, cada uma das quais consiste nas seguintes etapas principais:

Ligação de biblioteca e destino

A biblioteca de ácidos nucleicos construída é misturada com moléculas-alvo específicas (como proteínas, compostos de moléculas pequenas, etc.), para que as sequências de ácidos nucleicos na biblioteca tenham a oportunidade de se ligar às moléculas-alvo.

Isolamento de moléculas não ligadas

As sequências de ácidos nucleicos que não estão ligadas à molécula alvo são separadas da mistura por métodos específicos, como cromatografia de afinidade, separação magnética de esferas, etc.

Amplificação de moléculas de ligação

A sequência de ácido nucleico ligada a uma molécula alvo é amplificada, geralmente usando tecnologia de reação em cadeia da polimerase (PCR). Para a fase de triagem subsequente, as sequências amplificadas serão usadas como biblioteca inicial.

Fig 1: Processo de triagem SELEX

Plataforma de triagem Aptamer

Serviço de triagem Aptamer

A Alpha Lifetech oferece uma gama diversificada de serviços especializados de triagem de aptâmeros, aplicando diversas metodologias SELEX para diferentes tipos de moléculas:

Tipos de alvos	Detalhes técnicos
Triagem de aptâmeros de proteínas por SELEX	O principal propósito da triagem de aptâmeros de proteína é rastrear aptâmeros que podem se ligar especificamente a moléculas de proteína alvo. Esses aptâmeros são mais simples de sintetizar, mais estáveis e menos suscetíveis a fatores ambientais.
Triagem de aptâmeros de peptídeos por SELEX	Aptâmeros de peptídeos são uma classe de sequências curtas de peptídeos com alta especificidade e afinidade, que podem se ligar especificamente a substâncias alvo e mostram uma ampla gama de potencial de aplicação no campo biomédico. Por meio de um processo de triagem específico, aptâmeros de peptídeos que podem se ligar especificamente a moléculas alvo são triados de um grande número de bibliotecas de sequências de peptídeos aleatórios.
Triagem de aptâmeros específicos de células (Cell-SELEX)	Células-alvo ou moléculas específicas na superfície celular são preparadas como alvos. Os alvos podem ser células inteiras, receptores na membrana celular, proteínas ou outras moléculas pequenas.
Triagem de aptâmeros de moléculas pequenas por Capture SELEX	Capture SELEX é uma técnica de triagem in vitro para triagem de aptâmeros de moléculas pequenas, que é uma variante do SELEX. Capture SELEX é particularmente bem adequado para triagem de aptâmeros de alvos de moléculas pequenas, que normalmente têm menos grupos funcionais e são difíceis de imobilizar diretamente em suportes de fase sólida.
Serviços SELEX baseados em animais vivos	O serviço de triagem baseado em animais vivos é uma técnica experimental amplamente usada nos campos da biociência, medicina e biotecnologia, que usa animais vivos como modelos experimentais para triagem e avaliação de moléculas específicas, medicamentos, terapêuticas ou processos biológicos. Os serviços são projetados para simular o ambiente fisiológico no corpo humano para prever e avaliar com mais precisão a eficácia e a segurança dos resultados experimentais no corpo humano.

Serviço de otimização Aptamer

A hidrofilicidade, alta perda de afinidade durante a produção e rápida excreção de aptâmeros limitam sua aplicação. Atualmente, uma variedade de métodos de otimização foram explorados para melhorar o desempenho de aptâmeros.

Também temos uma variedade de maneiras de otimizar o aptâmero, consistindo em truncamento, modificações, conjugação ao grupo apropriado (tiol, carboxila, amina, fluoróforo, etc.).

Serviço de análise de caracterização de aptâmeros

O serviço de análise de caracterização de aptâmero se refere ao serviço profissional de resolução de estrutura de avaliação de desempenho e verificação funcional do aptâmero obtido para garantir que o aptâmero atenda aos requisitos de capacidade de ligação específica, estabilidade e especificidade. Inclui principalmente análise de afinidade e especificidade, avaliação de estabilidade e verificação de função biológica.