Plataforma de Desenvolvimento Aptamer

Aptâmeros são oligonucleotídeos de fita simples (DNA, RNA ou XNA) com a propriedade de alta afinidade e alta especificidade que se ligam especificamente a moléculas-alvo, como anticorpos, e são amplamente utilizados para o desenvolvimento de biossensores, diagnósticos e terapêuticas.

A plataforma de aptâmeros fornecida pela Alpha Lifetech inclui duas categorias: plataforma de síntese de aptâmeros, que envolve principalmente o serviço de síntese de biblioteca de aptâmeros SELEX e o serviço de desenvolvimento de aptâmeros (DNA, RNA ou XNA), e plataforma de triagem de aptâmeros, incluindo serviços de triagem baseados na tecnologia SELEX para proteínas, peptídeos, células, pequenas moléculas, íons metálicos e outras moléculas-alvo, bem como serviços de otimização de aptâmeros e análise de identificação downstream.

Plataforma de Síntese Aptamer

Serviço de síntese de biblioteca de aptâmeros SELEX

O serviço de síntese de bibliotecas de aptâmeros SELEX envolve principalmente a construção de uma biblioteca contendo um grande número de sequências aleatórias de oligonucleotídeos de fita simples por síntese química in vitro, de acordo com as moléculas-alvo. A construção da biblioteca é o ponto de partida da tecnologia SELEX, que fornece sequências candidatas abundantes para o processo de triagem subsequente, construindo enormes bibliotecas aleatórias e aumentando a possibilidade de triagem de aptâmeros de alta afinidade.

A síntese da biblioteca é dividida principalmente nas seguintes etapas:

Passos	Detalhes da tecnologia
Identificar moléculas-alvo	Identifique as moléculas-alvo que precisam ser rastreadas quanto a aptâmeros, que podem ser proteínas, ácidos nucleicos, moléculas pequenas, íons metálicos, etc.
Projeto de Sequência Aleatória	O comprimento da sequência aleatória, a composição de bases e outros parâmetros foram projetados de acordo com as características das moléculas-alvo e os requisitos de triagem. Normalmente, as sequências aleatórias têm entre dezenas e centenas de bases de comprimento.
Síntese de Sequências Fixas	Fragmentos de oligonucleotídeos com sequências fixas (como sequências de primers de PCR) em ambas as extremidades são projetados e sintetizados, os quais serão usados no processo subsequente de amplificação e triagem.

A biblioteca sintetizada ainda precisa ser processada para controle de qualidade. A concentração da biblioteca foi determinada para garantir sua aplicabilidade no processo de triagem subsequente. A diversidade e a precisão das sequências aleatórias na biblioteca foram verificadas por sequenciamento e outros métodos para garantir que a qualidade da biblioteca atendesse aos requisitos de triagem.

Por meio das etapas acima, uma biblioteca de aptâmeros SELEX de alta qualidade e altamente diversificada pode ser sintetizada, o que pode fornecer sequências candidatas abundantes para o processo de triagem subsequente.

Serviços de desenvolvimento de aptâmeros (DNA, RNA ou XNA)

Aptâmeros geralmente se referem a aptâmeros de ácido nucleico. Aptâmeros de ácido nucleico incluem aptâmeros de DNA, aptâmeros de RNA e aptâmeros de XNA, que são aptâmeros de ácido nucleico quimicamente modificados. A técnica SELEX é amplamente utilizada para o desenvolvimento de aptâmeros. O fluxo de trabalho básico dos serviços de desenvolvimento de aptâmeros inclui construção de bibliotecas, ligação a alvos, isolamento e purificação, amplificação, múltiplas rodadas de triagem e identificação de sequências. Há muitos anos, nos concentramos na construção de bibliotecas e possuímos vasta experiência no desenvolvimento de aptâmeros. Estamos comprometidos em fornecer os melhores serviços aos nossos clientes.

Processo de Tecnologia SELEX

O processo SELEX consiste em várias rodadas, cada uma das quais consiste nas seguintes etapas principais:

Ligação de biblioteca e destino

A biblioteca de ácidos nucleicos construída é misturada com moléculas-alvo específicas (como proteínas, compostos de moléculas pequenas, etc.), para que as sequências de ácidos nucleicos na biblioteca tenham a oportunidade de se ligar às moléculas-alvo.

Isolamento de moléculas não ligadas

Sequências de ácido nucleico que não estão ligadas à molécula alvo são separadas da mistura por métodos específicos, como cromatografia de afinidade, separação magnética de esferas, etc.

Amplificação de moléculas de ligação

A sequência de ácido nucleico ligada a uma molécula-alvo é amplificada, geralmente por meio da tecnologia de reação em cadeia da polimerase (PCR). Para a fase de triagem subsequente, as sequências amplificadas serão usadas como biblioteca inicial.

Fig 1: Processo de triagem SELEX

Plataforma de Triagem Aptamer

Serviço de triagem Aptamer

A Alpha Lifetech oferece uma gama diversificada de serviços especializados de triagem de aptâmeros, aplicando diversas metodologias SELEX para diferentes tipos de moléculas:

Tipos de alvos	Detalhes técnicos
Triagem de aptâmeros de proteínas por SELEX	O principal objetivo da triagem de aptâmeros de proteínas é rastrear aptâmeros que podem se ligar especificamente a moléculas de proteína alvo. Esses aptâmeros são mais simples de sintetizar, mais estáveis e menos suscetíveis a fatores ambientais.
Triagem de aptâmeros de peptídeos por SELEX	Aptâmeros peptídicos são uma classe de sequências peptídicas curtas com alta especificidade e afinidade, que podem se ligar especificamente a substâncias-alvo e apresentam um amplo potencial de aplicação na área biomédica. Por meio de um processo de triagem específico, aptâmeros peptídicos que podem se ligar especificamente a moléculas-alvo são selecionados a partir de um grande número de bibliotecas de sequências peptídicas aleatórias.
Triagem de aptâmeros específicos de células (Cell-SELEX)	Células-alvo ou moléculas específicas na superfície celular são preparadas como alvos. Os alvos podem ser células inteiras, receptores na membrana celular, proteínas ou outras moléculas pequenas.
Triagem de aptâmeros de pequenas moléculas por Capture SELEX	A técnica de captura SELEX é uma técnica de triagem in vitro para a triagem de aptâmeros de pequenas moléculas, uma variante da SELEX. A técnica de captura SELEX é particularmente adequada para a triagem de aptâmeros de alvos de pequenas moléculas, que normalmente possuem menos grupos funcionais e são difíceis de imobilizar diretamente em suportes de fase sólida.
Serviços SELEX baseados em animais vivos	O serviço de triagem com animais vivos é uma técnica experimental amplamente utilizada nas áreas de biociências, medicina e biotecnologia, que utiliza animais vivos como modelos experimentais para triagem e avaliação de moléculas, medicamentos, terapêuticas ou processos biológicos específicos. Os serviços são projetados para simular o ambiente fisiológico do corpo humano, a fim de prever e avaliar com maior precisão a eficácia e a segurança dos resultados experimentais no corpo humano.

Serviço de otimização Aptamer

A hidrofilicidade, a alta perda de afinidade durante a produção e a rápida excreção dos aptâmeros limitam sua aplicação. Atualmente, diversos métodos de otimização têm sido explorados para aprimorar o desempenho dos aptâmeros.

Também temos uma variedade de maneiras de otimizar o aptâmero, consistindo em truncamento, modificações, conjugação ao grupo apropriado (tiol, carboxila, amina, fluoróforo, etc.).

Serviço de análise de caracterização de aptâmeros

O serviço de análise de caracterização de aptâmeros refere-se ao serviço profissional de resolução estrutural de avaliação de desempenho e verificação funcional do aptâmero obtido, a fim de garantir que o aptâmero atenda aos requisitos de capacidade de ligação específica, estabilidade e especificidade. Inclui principalmente análise de afinidade e especificidade, avaliação de estabilidade e verificação da função biológica.