Plataforma de Tecnologia de Hibridoma
A Alpha Lifetech possui vasta experiência na área de desenvolvimento de anticorpos. Ao longo dos anos, a Alpha Lifetech estabeleceu uma plataforma abrangente para o desenvolvimento de anticorpos (incluindo o desenvolvimento de anticorpos monoclonais, anticorpos policlonais, anticorpos monoclonais recombinantes e outros serviços de preparação e desenvolvimento de anticorpos).
A Alpha Lifetech fornece aos clientes anticorpos e anticorpos recombinantes com garantia de qualidade, além de serviços especializados. Os anticorpos preparados apresentam alta especificidade e boa estabilidade. Dispomos de diversos instrumentos e equipamentos para purificação de anticorpos, permitindo a obtenção de anticorpos de várias fontes, como anticorpos monoclonais de coelho, ovelha, galinha e camundongo, bem como serviços de purificação por afinidade com proteína A/G e separação de anticorpos.
Com base em diversas técnicas de preparação de anticorpos, como a tecnologia de células de hibridoma, a Alpha Lifetech oferece serviços personalizados para anticorpos monoclonais e policlonais de diferentes espécies. Além disso, disponibilizamos uma gama de serviços que vão desde sequenciamento de alto rendimento, preparação e purificação de anticorpos até validação de anticorpos. Selecionamos o método de purificação de acordo com a necessidade específica do cliente. Utilizando plataformas abrangentes, como a plataforma de desenvolvimento de anticorpos e a plataforma de proteínas, a Alpha Lifetech cobre todas as etapas da produção de anticorpos, incluindo purificação, sequenciamento de alto rendimento, validação e outros serviços técnicos.
Tecnologia de hibridoma
A tecnologia de hibridoma pode ser usada para preparar anticorpos monoclonais. Através da fusão de células esplênicas de camundongos imunizados com células de mieloma de humanos ou camundongos, formam-se células de hibridoma que secretam anticorpos específicos. Os anticorpos monoclonais derivados de camundongos gerados podem ser usados em pesquisas científicas, como ensaio imunoenzimático (ELISA), radioimunoensaio (RI), imuno-histoquímica, citometria de fluxo, purificação de proteínas, etc. As amostras de anticorpos monoclonais incluem ascite, sobrenadante de hibridoma, etc. A amostra obtida pela injeção de células de hibridoma na cavidade abdominal de animais e pela utilização do ambiente fisiológico da cavidade abdominal do animal para produzir anticorpos é chamada de amostra de ascite. As células de hibridoma injetadas na cavidade abdominal dos animais podem proliferar e secretar anticorpos monoclonais, que podem se acumular na ascite. Devido à possibilidade de impurezas (proteínas animais, hormônios, etc.) nesses anticorpos, a purificação é necessária. Com base na função secretora dos linfócitos B, os anticorpos monoclonais são frequentemente secretados no meio de cultura durante o cultivo de células de hibridoma. O líquido contendo anticorpos monoclonais no meio de cultura é chamado de sobrenadante do hibridoma. A pureza dos anticorpos monoclonais no sobrenadante é relativamente alta, mas uma purificação adicional é necessária para a preparação em larga escala, visto que são obtidos por meio de cultura in vitro.
A purificação de anticorpos permite isolar anticorpos de alta pureza a partir de complexos. Atualmente, a purificação por afinidade e a separação e purificação de anticorpos são métodos comuns de purificação, incluindo principalmente a purificação por proteína A/G, cromatografia de troca iônica, filtração em gel, precipitação e cromatografia de interação hidrofóbica. Dentre esses métodos, a purificação por afinidade à proteína A/G é amplamente utilizada em diversas aplicações de purificação de anticorpos. O processo de preparação de anticorpos monoclonais pela Alpha Lifetech, baseado na tecnologia de hibridoma, é ilustrado na Figura 1.
Figura 1. Diagrama do processo de preparação de anticorpos monoclonais com base na tecnologia de hibridoma.
Tecnologia de conjugados anticorpo-fármaco e hibridomas
O conjugado anticorpo-fármaco (ADC) é um novo agente biológico que acopla quimicamente anticorpos a fármacos citotóxicos. O ADC combina a capacidade de reconhecimento específico dos anticorpos com o potente efeito citotóxico dos fármacos, permitindo a entrega precisa desses fármacos às células tumorais por meio dos anticorpos, possibilitando um tratamento preciso. A porção de anticorpo nos fármacos ADC é frequentemente preparada por meio da tecnologia de hibridoma ou outras técnicas de produção de anticorpos, como a tecnologia de anticorpos geneticamente modificados. A tecnologia de hibridoma fornece matéria-prima de anticorpos de alta qualidade para fármacos ADC. Os fármacos ADC e os anticorpos monoclonais preparados por meio da tecnologia de hibridoma desempenham papéis importantes em áreas como o tratamento do câncer. Eles podem ser usados isoladamente ou em combinação para aumentar a eficácia terapêutica.
Os anticorpos monoclonais preparados por meio da tecnologia de hibridoma apresentam alta especificidade, ligando-se e reconhecendo antígenos específicos com precisão, e podem ser produzidos em larga escala. Através da tecnologia de sequenciamento de hibridoma, os genes dos anticorpos presentes nas células do hibridoma podem ser extraídos e sequenciados para a obtenção das sequências correspondentes, o que é benéfico para a expressão subsequente dos anticorpos. Os anticorpos monoclonais preparados por meio da tecnologia de hibridoma podem ser utilizados para detectar marcadores específicos de doenças, como marcadores tumorais, antígenos virais, etc., fornecendo um forte suporte para o diagnóstico precoce de doenças. Além disso, também podem ser utilizados em experimentos como immunoblotting e imuno-histoquímica para estudar a expressão, localização, estrutura e função de proteínas.
Tecnologia de hibridoma Produção de anticorpos Fluxo de trabalho do serviço
| Passos | Conteúdo do serviço | Linha do tempo |
| Etapa 1: Imunização animal | (1) Imunização do animal 4 vezes, imunização de reforço 1 dose, total de 5 doses imunizadas. (2) O soro negativo foi coletado antes da imunização e o ELISA foi realizado na quarta dose para detectar o título do soro. (3) Se o título de anticorpos séricos da quarta dose atender aos requisitos, uma dose adicional de imunização será administrada 7 dias antes da coleta de sangue. Se não atender aos requisitos, a imunização de rotina continuará. (4) Potência qualificada, células do baço são isoladas para fusão celular. | 10 a 12 semanas |
| Etapa 2: Fusão e Triagem | (1) Fusão: Após a imunização, as células do baço do camundongo foram coletadas e fundidas com células de mieloma. (2) Proliferação e triagem: As células de hibridoma obtidas foram submetidas à proliferação e triagem ELISA para obter clones altamente eficientes. | 6 semanas |
| Etapa 3: Subclonar | Subclonagem de 15 a 25 células-mãe positivas usando o método de diluição limitada e, finalmente, determinação de 10 a 15 clones positivos. | 3-4 semanas |
| Etapa 4: Produção de Ascite e Purificação de Anticorpos | (1) Produção de ascite: 10-15 linhagens de hibridomas são usadas para a produção de ascite em camundongos (se um grande número de linhagens de hibridomas for obtido, elas serão enviadas na forma celular) (2) Identificação de ascite: Detecção de ascite por ELISA, potência (proteína/vírus > 10^5, molécula pequena/peptídeo > 10^4) para purificação subsequente. (3) Purificação da proteína A/G: Purificação do líquido ascítico | 3-4 semanas |
| Etapa 5: Entrega | (1) Fornecer 3-5 cepas de hibridoma de anticorpo monoclonal. (2) Cada célula de hibridoma fornece 1 mg de anticorpo purificado (purificação de ascite). (3) Relatório do Processo Experimental | 1 semana |