Plataforma de desenvolvimento de anticorpos por phage display

A Alpha Lifetech, com sua vasta experiência em projetos de descoberta de anticorpos, oferece serviços personalizados de anticorpos monoclonais e policlonais para diversas espécies, além de serviços de construção e triagem de bibliotecas de anticorpos. A Alpha Lifetech fornece aos clientes anticorpos e anticorpos recombinantes com garantia de qualidade, bem como serviços correlatos, para a preparação de anticorpos eficientes, altamente específicos e estáveis. Utilizando plataformas abrangentes de anticorpos e engenharia de anticorpos, oferecemos serviços que cobrem as etapas iniciais e finais da produção de anticorpos, incluindo serviços técnicos como preparação, purificação, sequenciamento e validação de anticorpos.

A Alpha Lifetech possui uma plataforma consolidada para descoberta de anticorpos, oferecendo aos clientes uma gama de serviços que inclui imunidade animal, construção e triagem de bibliotecas de anticorpos por phage display, sequenciamento, expressão, purificação, validação e marcação de anticorpos, com base em tecnologias como hibridoma, célula B única e phage display, entre outras. A Alpha Lifetech conta com uma linha de produção padrão e, além dos serviços de preparação de anticorpos, oferece serviços de suporte como humanização, maturação de afinidade, design e desenvolvimento de fármacos ADC e sequenciamento subsequente de CAR-T. A empresa também construiu uma biblioteca de anticorpos baseada nas plataformas de phage display M13, T4 e T7, com capacidade de armazenamento de até 10⁸-10⁹ anticorpos. As taxas de positividade, inserção e diversidade da biblioteca podem ultrapassar 90%.

Tecnologia de phage display

A produção de anticorpos monoclonais foi inicialmente preparada utilizando a tecnologia de anticorpos monoclonais de hibridoma para produzir anticorpos monoclonais de hibridoma de camundongo. Especificamente, pela fusão de células esplênicas de camundongos imunizados com células de mieloma de humanos ou camundongos, formam-se células de hibridoma que secretam anticorpos monoclonais de hibridoma específicos. Através da humanização de anticorpos monoclonais de camundongo e da modificação por engenharia genética dos anticorpos para lhes conferir uma região de imunoglobulina humana constante, sua imunogenicidade pode ser reduzida. A engenharia de anticorpos monoclonais é amplamente utilizada em aplicações biomédicas e clínicas.

A Alpha Lifetech oferece serviços completos de engenharia de anticorpos, desde o desenvolvimento de protocolos de pesquisa pré-clínica até a descoberta e validação em animais de conjugados anticorpo-fármaco (ADCs). Os conjugados anticorpo-fármaco (ADCs) podem direcionar quimioterápicos às células cancerígenas. Após se ligarem a alvos específicos expressos nas células cancerígenas, os ADCs liberam os fármacos citotóxicos no interior dessas células. A Alpha Lifetech também oferece serviços abrangentes de maturação de afinidade de anticorpos. Com otimização avançada de mutações e tecnologia de triagem de alto rendimento por phage display, anticorpos com determinada afinidade são inicialmente selecionados e, em seguida, mutações de aminoácidos são introduzidas para gerar diversas variantes. Posteriormente, os anticorpos de alta afinidade são avaliados e triados utilizando técnicas de triagem. Após múltiplas rodadas de otimização e análise estrutural, obtêm-se anticorpos com maior afinidade e especificidade.

A Alpha Lifetech pode construir diversos tipos de bibliotecas de anticorpos por phage display, incluindo bibliotecas imunes, nativas, semissintéticas e sintéticas. Graças à alta capacidade das bibliotecas de anticorpos, é possível obter anticorpos altamente específicos. Múltiplos vetores fagemídicos, como pMECS, pComb3X e pCANTAB 5E, podem ser fornecidos, assim como cepas como TG1 E. coli, XL1 Blue e ER2738. Além da capacidade da biblioteca, que chega a 10^9, a taxa de inserção do fragmento alvo também é alta, criando condições ideais para a triagem de anticorpos que atendam às necessidades dos clientes. O fluxograma do serviço de preparação de anticorpos da Alpha Lifetech, baseado na tecnologia phage display, é apresentado na Figura 1.

Figura 1. Diagrama do processo de preparação de anticorpos monoclonais com base na tecnologia de phage display.

Fluxograma de produção de anticorpos por phage display

Passos	Conteúdo do serviço	Linha do tempo
Etapa 1: Imunização animal	(1) Imunização do animal 4 vezes, imunização de reforço 1 dose, total de 5 doses imunizadas. (2) O soro negativo foi coletado antes da imunização e o ELISA foi realizado na quarta dose para detectar o título do soro. (3) Se o título de anticorpos séricos da quarta dose atender aos requisitos, uma dose adicional de imunização será administrada 7 dias antes da coleta de sangue. Se não atender aos requisitos, a imunização de rotina continuará. (4) Potência qualificada, coleta de sangue e separação de monócitos	10 semanas
Etapa 2: Preparação do cDNA	(1) Extração de RNA total de PBMC (Kit de extração de RNA) (2) Preparação de RT-PCR de alta fidelidade de cDNA (kit de transcrição reversa)	1 dia
Etapa 3: Construção da Biblioteca de Anticorpos	(1) Usando cDNA como molde, os genes foram amplificados por duas rodadas de PCR. (2) Construção e transformação de fagos: vetor de fagêmide de splicing de genes, transformação por eletroporação de bactérias hospedeiras TG1, construção de biblioteca de anticorpos. (3) Identificação: Selecionar aleatoriamente 24 clones, taxa de identificação positiva por PCR + taxa de inserção. (4) Preparação assistida de fagos: amplificação e purificação do fago M13. (5) Resgate de biblioteca de phage display	3-4 semanas
Etapa 4: Triagem da Biblioteca de Anticorpos (3 rodadas)	(1) Triagem padrão de 3 rodadas (triagem em fase sólida): triagem por pressão para remover anticorpos não específicos na maior extensão possível. (2) Amplificação de clone único selecionado por bacteriófago + expressão induzida por IPTG + detecção de clones positivos por ELISA. (3) Todos os clones positivos foram selecionados para sequenciamento genético.	4-5 semanas

Vantagens da tecnologia de phage display

A Alpha Lifetech possui vasta experiência na área de desenvolvimento de anticorpos. Ao longo dos anos, a Alpha Lifetech estabeleceu uma plataforma abrangente para o desenvolvimento de anticorpos.

Serviços de suporte

Podemos fornecer diferentes serviços de construção de bibliotecas imunes baseadas em animais e serviços de triagem de bibliotecas de anticorpos naturais, de acordo com as necessidades do cliente.

Alvo múltiplo

Estão disponíveis serviços de descoberta de anticorpos para múltiplos alvos: proteínas, peptídeos, pequenas moléculas, vírus, proteínas de membrana, mRNA, etc.

Vetores múltiplos

Serviço personalizado de construção de bibliotecas; podemos fornecer diversos vetores de bacteriófagos, incluindo PMECS, pComb3X e pCANTAB 5E, e modificá-los de acordo com as necessidades do cliente.

Plataforma madura

A capacidade de armazenamento pode atingir 10^8-10^9, as taxas de inserção são todas superiores a 90% e a afinidade dos anticorpos obtidos por triagem geralmente está na faixa de nM a pM.

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Serviço de Desenvolvimento de Anticorpos Monoclonais

Podemos fornecer serviços de desenvolvimento de anticorpos monoclonais de alta qualidade, pureza e especificidade, incluindo a produção de anticorpos monoclonais de camundongo e de coelho.

Plataforma de Tecnologia de Hibridoma

Incluindo programa de imunização, serviços de preparação de anticorpos, purificação de anticorpos, sequenciamento de alto rendimento de anticorpos, validação de anticorpos, etc.

Plataforma de triagem de células B individuais

A Alpha Lifetech possui vantagens em termos de tempo de triagem e obtenção de anticorpos de alta qualidade. Ela oferece serviços de design, síntese e modificação de antígenos, imunidade animal, triagem de enriquecimento de células B individuais e sequenciamento de células individuais.