Serviço de Construção de Linhagens Celulares Estáveis

A Alpha Lifetech atua há muitos anos no desenvolvimento de processos para a construção de linhagens celulares estáveis. Construiu uma plataforma completa para esse fim, com mais de 300 tipos de células tumorais e primárias, capaz de gerar linhagens celulares estáveis, otimizando o tempo dedicado à pesquisa científica e a projetos, além de facilitar a produção subsequente. A Alpha Lifetech também oferece serviços como desenvolvimento de linhagens, seleção de linhagens, construção de linhagens, produção de proteínas recombinantes e anticorpos, fornecendo uma base sólida para o desenvolvimento de novos medicamentos.

A Alpha Lifetech possui uma plataforma de células infectadas por lentivírus, que permite personalizar o processo experimental para diferentes tipos de linhagens celulares transmutadas estáveis. Utilizamos a tecnologia de nocaute gênico para construir linhagens celulares com deleção do gene por CRISPR/Cas9. Técnicas de superexpressão e silenciamento gênico foram empregadas para estabilizar as linhagens transmutadas. A integração gênica sítio-específica completa os serviços de construção de linhagens celulares com integração em vértice.

Introdução à construção de linhagens celulares estáveis

Uma linhagem celular estável refere-se à linhagem celular que integra genes exógenos no genoma da célula hospedeira, permitindo que esses genes sejam expressos de forma estável na célula hospedeira por um longo período. O princípio consiste em reduzir o gene exógeno a um vetor com certa resistência, transfectar as células hospedeiras, integrar o gene exógeno no cromossomo da hospedeira e selecionar os genes de resistência contidos no vetor para obter linhagens celulares estáveis com alta expressão da proteína alvo ou silenciamento estável do gene alvo, atendendo aos requisitos do experimento.

A Alpha Lifetech possui um laboratório de armazenamento independente, um sistema perfeito de congelamento e gerenciamento de armazenamento de células e mais de 300 tipos de células tumorais e células primárias à sua escolha, dedicadas à sua pesquisa científica.

Processo de construção de linhagem celular estável

Método de construção de linhagem celular estável

Os métodos de construção de linhagens celulares estáveis incluem os métodos mediados por lentivírus, por transposon, por CRISPR/Cas9 e por triagem de plasmídeos.

A transcrição mediada por lentivírus é um dos métodos mais utilizados para construir linhagens celulares estáveis. Essa abordagem tem a vantagem de infectar quase todos os tipos de células e integrar o material genético ao genoma da célula hospedeira para expressão estável por um longo período. No entanto, esse sistema apresenta certas limitações, e o lentivírus tem uma capacidade de empacotamento limitada, portanto, não é adequado para a transcrição de genes com longas regiões de transcrição.

Em comparação com a transfecção mediada por lentivírus, a transfecção mediada por transposons não apresenta restrições quanto ao tamanho do gene e, com a otimização contínua da tecnologia, a eficiência da inserção de transposons foi aprimorada diversas vezes. A desvantagem reside em certas restrições quanto às células primárias e à dificuldade de transfecção celular.

A tecnologia CRISPR/Cas9 inclui o nocaute e a inserção de genes CRISPR. O nocaute consiste na introdução de quebras de fita dupla de DNA, resultando na perda da função do gene alvo. Já a inserção de genes CRISPR refere-se à inserção de fragmentos de DNA exógenos em genes específicos, podendo ser utilizada para reparar genes defeituosos ou introduzir novos genes funcionais.

A triagem de plasmídeos é o método mais primitivo de construção de linhagens celulares, que consiste apenas em transfectar com sucesso o plasmídeo alvo na célula e utilizar a resistência correspondente em triagens de longo prazo. Dessa forma, existe uma certa probabilidade de se obter linhagens celulares estáveis.

Métodos de construção de diferentes linhagens celulares estáveis

Método de Mediação	Sistema de lentivírus	Sistema de transposon	Mediado por CRISPR/Cas9	Triagem de plasmídeos
Capacidade de suporte	5 kb	10 kb	5 kb	10 kb
Eficiência Mediada	Alto	Normal	Normal	Baixo
Linha do tempo	1 a 2 semanas	3-4 semanas	3-4 semanas	4 a 6 semanas
Vantagem	Rápido e eficiente	Segurança e estabilidade	Integração de ponto fixo	Custo mais baixo
Deficiência	Risco de biossegurança	Abundância de expressão normal	A transdução CAS9 é difícil e dispendiosa.	Baixa eficiência e instabilidade

Dificuldades técnicas na construção de linhagens celulares estáveis

Antes de ampliar o processo, um pequeno biorreator é utilizado para determinar parâmetros como gás, sistema de fluido de cultura, estresse hidrodinâmico mínimo aplicado às células, etc., para garantir a viabilidade do cultivo em diferentes escalas. No entanto, mesmo com os parâmetros de processo adequados definidos, o ambiente dos grandes biorreatores na fábrica será instável, aumentando a probabilidade de falhas. A Alpha Lifetech possui muitos anos de experiência em ampliação de processos de cultivo, o que permite evitar erros, reduzir riscos e aumentar significativamente a taxa de sucesso. Além disso, a Alpha Lifetech garante a consistência das matérias-primas e dos lotes de meio de cultura utilizados, reduzindo a taxa de falhas na ampliação do processo de cultivo celular.

A Alpha Lifetech possui uma plataforma abrangente para o desenvolvimento de linhagens celulares estáveis, garantindo a estabilidade das linhagens durante a produção. Também podemos fornecer serviços personalizados para atender às suas necessidades.

Conteúdo do serviço de construção de linhagens celulares estáveis

Contente	Linha do tempo
Cultive a linhagem celular HEK293 fornecida pelo cliente.	3-5 meses
Construção do plasmídeo sgRNA-Cas9 (com o gene de triagem G418).
O sgRNA-Cas9 e o molde de DNA de reparo foram co-transferidos para a linhagem celular HEK293.
Triagem de linhagens celulares monoclonais (gene GFP) clone positivo knockin).
Entrega: Vetor, linhagem com gene GFP inserido, resultados do sequenciamento, todos os dados brutos, relatório de laboratório.

As células podem ser rastreadas.

As células são adquiridas de organizações profissionais como a ATCC e podem fornecer comprovante para atender às suas necessidades de registro.

Vantagem de produção

A Alpha Lifetech possui muitos anos de experiência para atender às diversas necessidades de desenvolvimento; contamos com uma variedade de células, uma oficina de armazenamento independente, congelamento celular perfeito e um sistema de gerenciamento de armazenamento.

Controle de qualidade do projeto

Cada projeto passa por rigorosos processos de controle de qualidade para garantir a entrega de linhagens celulares que atendam aos altos padrões exigidos dos clientes.

Vantagem técnica

Além de engenheiros com vasta experiência em células, contamos com algoritmos evolutivos de tecnologia avançada para melhorar as condições do reator e modificar os parâmetros do processo.

Caso tenha alguma dúvida, não hesite em nos contatar a qualquer momento.

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