Serviciu de analiză a caracterizării aptamerelor

Alpha Lifetech oferă servicii legate de aptameri de mulți ani și în prezent poate oferi scheme complete de dezvoltare a aptamerilor, cum ar fi sinteza aptamerilor, screening-ul SELEX, secvențierea de mare randament și optimizarea și caracterizarea aptamerilor. Pe baza avantajelor metodei SELEX pentru screening-ul aptamerilor, Alpha Lifetech a extins mai multe metode de screening pentru aptameri.

Introducere în analiza caracterizării aptamerului

Verificarea afinității

Afinitatea optimizată a aptamerului a fost verificată prin tehnici relevante ale testului de legare a aptamerului. Exemplele includ calorimetria izotermă de titrare (ITC), citometria în flux (FCM) și rezonanța plasmonică de suprafață (SPR), microfluidica etc. Afinitatea aptamerului este de obicei exprimată prin constanta de disociere (KD), o mărime fizică utilizată pentru a cuantifica gradul de disociere moleculară într-o reacție reversibilă. Cu cât valoarea KD este mai mică, cu atât complexul este mai stabil, adică cu atât afinitatea este mai puternică; În schimb, cu cât valoarea KD este mai mare, cu atât complexul este mai instabil și afinitatea este mai slabă. Această etapă este cheia pentru identificarea performanței aptamerului, asigurând maturarea afinității aptamerului și posibilitatea de a se lega de molecula țintă cu afinitate și selectivitate ridicate în aplicații practice.

Fig. 1 Procesul de maturare a afinității aptamerului. Sursă de referință:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Verificarea funcției

Pe lângă verificarea afinității, trebuie verificată și funcția aptamerului. Aceasta include verificarea stabilității, specificității și interacțiunilor aptamerului cu alte molecule într-un anumit mediu. Rezultatele verificării funcționale vor afecta direct valoarea aptamerilor în cercetarea științifică și aplicațiile industriale.

Verificare specifică

Experiment competitiv: Capacitatea aptamerului de a se lega de o țintă specifică este evaluată în prezența altor ținte similare. Dacă aptamerul se poate lega specific de molecula țintă fără interferențe din partea altor molecule, indică faptul că are o specificitate ridicată.

Experiment de reacție încrucișată: Aptamerul este legat de o serie de ținte înrudite sau neînrudite pentru a vedea dacă se leagă doar de o țintă specifică, astfel încât să se verifice specificitatea sa.

Verificarea stabilității

Experiment de degradare a nucleazelor: Aptamerii au fost expuși la diferite concentrații de nucleaze și s-a observat degradarea lor. Prin compararea gradului de degradare la diferite momente de timp, se poate evalua capacitatea aptamerului de degradare a antinucleazelor.

Experiment de stabilitate la temperatură și timp: Aptamerul a fost plasat în diferite condiții de temperatură și timp pentru a-i observa stabilitatea structurală și funcțională. Acest lucru ajută la determinarea condițiilor optime de depozitare și utilizare pentru aptameri.

Identificarea activității biologice

Metoda adecvată este de obicei selectată în funcție de scopul specific de aplicare al aptamerului de acid nucleic.

(1) Testarea la nivel molecular: Utilizarea tehnicilor de biologie moleculară, cum ar fi electroforeza în gel, Western blot etc., pentru a detecta complexele formate după combinarea aptamerului cu molecula țintă sau pentru a detecta modificările nivelului de expresie al moleculei țintă cauzate de aptamer.

(2) Testarea la nivel celular: Prin utilizarea tehnologiei de cultură celulară, aptamerii sunt incubați cu celule țintă pentru a observa modificări biologice, cum ar fi morfologia celulară, proliferarea și apoptoza, și pentru a evalua activitatea biologică a aptamerilor.

(3) Testarea pe modele animale: În modele animale adecvate, aptamerii de acid nucleic sunt administrați prin injectare sau prin administrare de medicamente, iar indicatorii fiziologici și modificările patologice ale animalelor sunt observați pentru a evalua activitatea biologică și siguranța aptamerilor in vivo.