Platforma de dezvoltare Aptamer

Aptamerii sunt oligonucleotide monocatenare (ADN, ARN sau XNA) cu proprietatea de afinitate ridicată și specificitate ridicată care se leagă specific de molecule țintă precum anticorpii și sunt utilizați pe scară largă pentru dezvoltarea de biosenzori, diagnostic și terapie.

Platforma aptamerilor furnizată de Alpha Lifetech include două categorii: platforma de sinteză a aptamerilor, care implică în principal serviciul de sinteză a bibliotecii de aptameri SELEX și serviciul de dezvoltare a aptamerilor (ADN, ARN sau XNA), și platforma de screening a aptamerilor, inclusiv servicii de screening bazate pe tehnologia SELEX pentru proteine, peptide, celule, molecule mici, ioni metalici și alte molecule țintă, precum și servicii ulterioare de optimizare și analiză a identificării aptamerilor.

Platformă de sinteză a aptamerelor

Serviciul de sinteză a bibliotecii de aptameri SELEX

Serviciul de sinteză a bibliotecilor de aptameri SELEX implică în principal construirea unei biblioteci care conține un număr mare de secvențe oligonucleotidice monocatenare aleatorii prin sinteză chimică in vitro, în funcție de moleculele țintă. Construcția bibliotecilor este punctul de plecare al tehnologiei SELEX, care oferă secvențe candidate abundente pentru procesul ulterior de screening prin construirea unor biblioteci aleatorii uriașe și crește posibilitatea de screening a aptamerilor cu afinitate ridicată.

Sinteza bibliotecii este în principal împărțită în următoarele etape:

Pași	Detalii despre tehnologie
Identificați moleculele țintă	Identificați moleculele țintă care trebuie testate pentru aptameri, care pot fi proteine, acizi nucleici, molecule mici, ioni metalici etc.
Proiectarea secvențelor aleatorii	Lungimea secvenței aleatorii, compoziția bazelor și alți parametri au fost concepuți în funcție de caracteristicile moleculelor țintă și de cerințele de screening. De obicei, secvențele aleatorii au o lungime cuprinsă între zeci și sute de baze.
Sinteza secvențelor fixe	Fragmente de oligonucleotide cu secvențe fixe (cum ar fi secvențele de primeri PCR) la ambele capete sunt proiectate și sintetizate, acestea urmând să fie utilizate în procesul ulterior de amplificare și screening.

Biblioteca sintetizată trebuie încă procesată pentru controlul calității. Concentrația bibliotecii a fost determinată pentru a asigura aplicabilitatea acesteia în procesul ulterior de screening. Diversitatea și acuratețea secvențelor aleatorii din bibliotecă au fost verificate prin secvențiere și alte metode pentru a se asigura că biblioteca îndeplinește cerințele de screening.

Prin etapele de mai sus, poate fi sintetizată o bibliotecă de aptameri SELEX de înaltă calitate și extrem de diversă, care poate oferi secvențe candidate abundente pentru procesul de screening ulterior.

Servicii de dezvoltare a aptamerilor (ADN, ARN sau XNA)

Aptamerii se referă de obicei la aptameri de acid nucleic. Aptamerii de acid nucleic includ aptameri de ADN, aptameri de ARN și aptameri XNA, care sunt aptameri de acid nucleic modificați chimic. Tehnica SELEX este utilizată pe scară largă pentru dezvoltarea aptamerilor. Fluxul de lucru de bază al serviciilor de dezvoltare a aptamerilor include construirea bibliotecilor, legarea țintelor, izolarea și purificarea, amplificarea, runde multiple de screening și identificarea secvențelor. De mulți ani, ne-am concentrat pe construirea bibliotecilor și pe o vastă experiență în dezvoltarea aptamerilor. Ne-am angajat să oferim clienților servicii mai bune.

Procesul tehnologic SELEX

Procesul SELEX constă în mai multe runde, fiecare dintre acestea constând în următorii pași cheie:

Bibliotecă și legare țintă

Biblioteca de acizi nucleici construită este amestecată cu molecule țintă specifice (cum ar fi proteine, compuși cu molecule mici etc.), astfel încât secvențele de acid nucleic din bibliotecă să aibă oportunitatea de a se lega de moleculele țintă.

Izolarea moleculelor nelegate

Secvențele de acid nucleic care nu sunt legate de molecula țintă sunt separate din amestec prin metode specifice, cum ar fi cromatografia de afinitate, separarea cu sfere magnetice etc.

Amplificarea moleculelor de legare

Secvența de acid nucleic legată de o moleculă țintă este amplificată, de obicei folosind tehnologia reacției în lanț a polimerazei (PCR). Pentru faza ulterioară de screening, secvențele amplificate vor fi utilizate ca bibliotecă de pornire.

Fig. 1: Procesul de screening SELEX

Platformă de screening Aptamer

Serviciu de screening pentru aptameri

Alpha Lifetech oferă o gamă diversă de servicii specializate de screening al aptamerilor, aplicând diverse metodologii SELEX pentru diferite tipuri de molecule:

Tipuri de ținte	Detalii tehnice
Screeningul aptamerilor proteici prin SELEX	Scopul principal al screening-ului aptamerilor proteici este de a selecta aptamerii care se pot lega specific de moleculele proteice țintă. Acești aptameri sunt mai ușor de sintetizat, mai stabili și mai puțin susceptibili la factorii de mediu.
Screeningul aptamerului peptidic prin SELEX	Aptamerii peptidici sunt o clasă de secvențe peptidice scurte cu specificitate și afinitate ridicate, care se pot lega specific de substanțele țintă și prezintă o gamă largă de potențial de aplicare în domeniul biomedical. Printr-un proces specific de screening, aptamerii peptidici care se pot lega specific de moleculele țintă sunt selectați dintr-un număr mare de biblioteci de secvențe peptidice aleatorii.
Screeningul aptamer specific celulelor (Cell-SELEX)	Celulele țintă sau moleculele specifice de pe suprafața celulară sunt preparate ca ținte. Țintele pot fi celule întregi, receptori de pe membrana celulară, proteine sau alte molecule mici.
Screeningul aptamerilor cu molecule mici prin Capture SELEX	Captura SELEX este o tehnică de screening in vitro pentru screening-ul aptamerilor cu molecule mici, care este o variantă a SELEX. Captura SELEX este deosebit de potrivită pentru screening-ul aptamerilor cu molecule mici țintă, care au de obicei mai puține grupe funcționale și sunt dificil de imobilizat direct pe suporturi în fază solidă.
Servicii SELEX bazate pe animale vii	Serviciul de screening pe animale vii este o tehnică experimentală utilizată pe scară largă în domeniile bioștiințelor, medicinei și biotehnologiei, care utilizează animale vii ca modele experimentale pentru a examina și evalua molecule specifice, medicamente, terapii sau procese biologice. Serviciile sunt concepute pentru a simula mediul fiziologic din corpul uman pentru a prezice și evalua mai precis eficacitatea și siguranța rezultatelor experimentale în corpul uman.

Serviciu de optimizare Aptamer

Hidrofilicitatea, pierderea mare de afinitate în timpul producției și excreția rapidă a aptamerilor limitează aplicarea lor. În prezent, au fost explorate o varietate de metode de optimizare pentru a îmbunătăți performanța aptamerilor.

De asemenea, avem o varietate de modalități de a optimiza aptamerul, constând în trunchiere, modificări, conjugare cu gruparea corespunzătoare (tiol, carboxi, amină, fluorofor etc.).

Serviciu de analiză a caracterizării aptamerului

Serviciul de analiză a caracterizării aptamerului se referă la serviciul profesional de evaluare a performanței, rezoluție structurală și verificare funcțională a aptamerului obținut pentru a se asigura că aptamerul îndeplinește cerințele de capacitate specifică de legare, stabilitate și specificitate. Acesta include în principal analiza afinității și specificității, evaluarea stabilității și verificarea funcției biologice.