Platforma de dezvoltare Aptamer

Aptamerii sunt oligonucleotide monocatenar (ADN, ARN sau XNA) cu proprietatea de afinitate ridicată și specificitate ridicată care se leagă în mod specific la moleculele țintă, cum ar fi anticorpii, și sunt utilizate pe scară largă pentru dezvoltarea biosenzorilor, diagnostic și terapii.

Platforma aptamer furnizată de Alpha Lifetech include două categorii: platformă de sinteză aptamer, care implică în principal serviciul de sinteză a bibliotecii de aptamer SELEX și serviciul de dezvoltare a aptamerului (ADN, ARN sau XNA), și platforma de screening aptamer care include servicii de screening bazate pe tehnologia SELEX pentru proteine, peptide, celule, molecule mici, ioni metalici, precum și alte servicii de optimizare și optimizare a aptamerului în aval.

Platforma de sinteză Aptamer

Serviciul de sinteză a bibliotecii de aptameri SELEX

Serviciul de sinteză a bibliotecii de aptameri SELEX implică în principal construirea unei biblioteci care conține un număr mare de secvențe aleatoare de oligonucleotide monocatenar prin sinteză chimică in vitro în funcție de molecularele țintă. Construcția bibliotecii este punctul de plecare al tehnologiei SELEX, care oferă secvențe candidate abundente pentru procesul de screening ulterior prin construirea de biblioteci aleatoare uriașe și crește posibilitatea de screening a aptamerilor de mare afinitate.

Sinteza bibliotecii este împărțită în principal în următorii pași:

Pași	Detalii de tehnologie
Identificați moleculele țintă	Identificați moleculele țintă care trebuie analizate pentru aptameri, care pot fi proteine, acizi nucleici, ioni moleculari mici, metali etc.
Proiectarea secvenței aleatoare	Lungimea secvenței aleatoare, compoziția bazei și alți parametri au fost proiectați în funcție de caracteristicile moleculelor țintă și de cerințele de screening. De obicei, secvențele aleatoare au lungime între zeci și sute de baze.
Sinteza secvențelor fixe	Fragmentele de oligonucleotide cu secvențe fixe (cum ar fi secvențele primerului PCR) la ambele capete sunt proiectate și sintetizate, care vor fi utilizate în procesul de amplificare și screening ulterior.

Biblioteca sintetizată trebuie încă procesată în continuare pentru controlul calității. Concentrația bibliotecii a fost determinată pentru a asigura aplicabilitatea acesteia în procesul de screening ulterior. Diversitatea și acuratețea secvențelor aleatoare din bibliotecă au fost verificate prin secvențiere și alte metode pentru a se asigura că calitatea bibliotecii îndeplinește cerințele de screening.

Prin pașii de mai sus, poate fi sintetizată o bibliotecă de aptameri SELEX de înaltă calitate și foarte diversă, care poate oferi secvențe candidate abundente pentru procesul de screening ulterior.

Servicii de dezvoltare aptamer (ADN, ARN sau XNA)

Aptamerii se referă de obicei la aptameri ai acidului nucleic. Aptamerii acidului nucleic includ aptamerii ADN, aptamerii ARN și aptamerii XNA care sunt aptameri ai acidului nucleic modificați chimic. Tehnica SELEX este utilizată pe scară largă pentru dezvoltarea aptamerilor. Fluxul de lucru de bază al serviciilor de dezvoltare a aptamerului include construcția bibliotecii, legarea țintei, izolarea și purificarea, amplificarea, mai multe runde de screening și identificarea secvenței. De mulți ani, ne-am concentrat pe construcția de biblioteci și pe o experiență bogată în dezvoltarea aptamerului. Ne angajăm să oferim clienților servicii mai bune.

Procesul tehnologic SELEX

Procesul SELEX constă din mai multe runde, fiecare dintre ele constând din următorii pași cheie:

Bibliotecă și legare țintă

Biblioteca de acid nucleic construită este amestecată cu molecule țintă specifice (cum ar fi proteine, compuși cu molecule mici etc.), astfel încât secvențele de acid nucleic din bibliotecă au posibilitatea de a se lega la moleculele țintă.

Izolarea moleculelor nelegate

Secvențele de acid nucleic care nu sunt legate de molecula țintă sunt separate de amestec prin metode specifice, cum ar fi cromatografia de afinitate, separarea bilelor magnetice etc.

Amplificarea moleculelor de legare

Secvența de acid nucleic legată de o moleculă țintă este amplificată, de obicei folosind tehnologia reacției în lanț a polimerazei (PCR). Pentru faza de screening ulterioară, secvențele amplificate vor fi folosite ca bibliotecă de pornire.

Fig 1: Procesul de screening SELEX

Platformă de screening Aptamer

Serviciu de screening Aptamer

Alpha Lifetech oferă o gamă diversă de servicii specializate de screening aptamer care aplică diverse metodologii SELEX pentru diferite tipuri de molecule:

Tipuri de țintă	Detalii tehnice
Screeningul Aptamerului Proteic de către SELEX	Scopul principal al screening-ului aptamerului proteic este de a analiza aptamerii care se pot lega în mod specific la moleculele proteice țintă. Acești aptameri sunt mai simplu de sintetizat, mai stabili și mai puțin sensibili la factorii de mediu.
Screeningul aptamerului peptidic de către SELEX	Aptamerii peptidici sunt o clasă de secvențe scurte de peptide cu specificitate și afinitate ridicate, care se pot lega în mod specific la substanțele țintă și prezintă o gamă largă de potențial de aplicare în domeniul biomedical. Printr-un proces de screening specific, aptamerii peptidici care se pot lega în mod specific la moleculele țintă sunt selectați dintr-un număr mare de biblioteci aleatorii de secvențe peptidice.
Screening-ul aptamer specific celulei (Cell-SELEX)	Celulele țintă sau moleculele specifice de pe suprafața celulei sunt preparate ca ținte. Țintele pot fi celule întregi, receptori de pe membrana celulară, proteine sau alte molecule mici.
Screening de aptamer de molecule mici prin Capture SELEX	Capture SELEX este o tehnică de screening in vitro pentru screening-ul aptamerilor cu molecule mici, care este o variantă a SELEX. Capture SELEX este deosebit de potrivit pentru screeningul aptamer al țintelor cu molecule mici, care de obicei au mai puține grupuri funcționale și sunt dificil de imobilizat direct pe suporturi în fază solidă.
Servicii SELEX pe bază de animale vii	Serviciul de screening pe bază de animale vii este o tehnică experimentală utilizată pe scară largă în domeniile bioștiinței, medicinei și biotehnologiei, care folosește animale vii ca modele experimentale pentru screening-ul și evaluarea unor molecule specifice, medicină, terapeutice sau procese biologice. Serviciile sunt concepute pentru a simula mediul fiziologic din corpul uman pentru a prezice și evalua cu mai multă acuratețe eficacitatea și siguranța rezultatelor experimentale în corpul uman.

Serviciu de optimizare Aptamer

Hidrofilitatea, pierderea mare a afinității în timpul producției și excreția rapidă a aptamerilor limitează aplicarea acestora. În prezent, au fost explorate o varietate de metode de optimizare pentru a îmbunătăți performanța aptamerilor.

Avem, de asemenea, o varietate de modalități de optimizare a aptamerului constând în trunchiere, modificări, conjugare la grupul corespunzător (tiol, carboxi, amină, fluorofor etc.).

Serviciu analiză de caracterizare a aptamerului

Serviciul de analiză de caracterizare a aptamerului se referă la serviciul profesional de rezoluție a structurii de evaluare a performanței și de verificare funcțională a aptamerului obținut pentru a se asigura că aptamerul îndeplinește cerințele specifice de capacitate de legare, stabilitate și specificitate. Include în principal analiza afinității și specificității, evaluarea stabilității și verificarea funcției biologice.