Платформа иммунизации животных

Платформа иммунизации животных в основном иммунизирует животных семейства верблюдовых (альпака, лиама и верблюды), закладывая основу для производства нанотел.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Платформа иммунизации животных

Источники животных Alpha Lifetech прозрачны, с разрешениями на инспекцию и карантин, ясным генетическим фоном, ясной частотой иммунизации и подробными записями интервалов иммунизации, что обеспечивает удобные услуги для производства антител. В основном компания иммунизирует животных семейства Camelidae (альпака лиама и верблюды), закладывая основу для производства нанотел. Кроме того, она также может иммунизировать обычных животных (таких как новозеландские белые кролики, мыши и другие животные) в соответствии с требуемой частотой иммунизации и требованиями к иммуногенности клиентов, извлекать и изолировать их в PBMC и использовать для последующих экспериментов (таких как разработка моноклональных антител, поликлональных антител и т. д.). Клиенты могут предоставлять свои собственные иммуногены, и мы будем проводить строгий контроль их качества. Если клиенты предоставляют вирусные иммуногены, их необходимо инактивировать, и мы проведем тестирование инактивации для обеспечения безопасности. В то же время мы также можем настраивать соответствующие иммуногены в соответствии с потребностями клиентов.

Введение в иммунизацию животных

При производстве животных антител, таких как моноклональные антитела, поликлональные антитела и нанотела, первым шагом является иммунизация животных и получение соответствующих В-клеток, антител или PBMC для подготовки к дальнейшему производству антител, содействия фундаментальным научным исследованиям, разработки клинических диагностических инструментов и содействия открытию и разработке новых лекарств. Верблюды, альпаки, лиамы и другие верблюды в Camelidae могут производить библиотеки нанотел (однодоменных антител) путем сбора иммунной крови и извлечения PBMC. Кролики и другие животные могут быть иммунизированы, и антитела могут быть извлечены из их тел. После очистки их можно использовать для получения поликлональных антител. Мыши, крысы и т. д. могут быть использованы для получения моноклональных антител путем слияния иммунных извлеченных В-клеток с клетками миеломы. Перед иммунизацией следует обратить внимание на принципы 3R (замена, сокращение, уточнение), которые могут значительно сократить количество используемых животных до необходимого минимума, улучшить экспериментальные процедуры и свести к минимуму страдания животных. Также необходимо соблюдать надлежащий экспериментальный дизайн, выбор соответствующих антител и строгие процедуры проверки.

Классификация иммуногенов - производство нанотел

Типы иммуногенов	Пример	Приготовление иммуногена	Примечания
Белковые иммуногены	Ферменты, белки, бактериальные токсины и другие вещества	Выбирайте различные системы экспрессии белка: E. coli, дрожжи, клетки насекомых, клетки млекопитающих и бесклеточную систему.	Обратите внимание на такие факторы, как температура, время, pH и тельца включения, которые влияют на экспрессию белка.
Иммуногены нуклеиновых кислот	ДНК, РНК	ДНК-иммуноген: конструирование плазмидной ДНК, клонирование подходящих векторов экспрессии для целевых генов, культивирование клеток для амплификации плазмидной ДНК и извлечение высокоочищенной плазмидной ДНК. Иммуноген РНК: необходимо добавить структуру шляпы и полиА-хвост для предотвращения деградации	При приготовлении ДНК-иммуногенов следует обращать внимание на соответствующие клетки-хозяева, а при приготовлении РНК-иммуногенов следует уделять внимание предотвращению деградации РНК.
Вирусные иммуногены	Цельновирусная инактивированная вакцина, субъединичная вакцина, вирусная векторная вакцина (аденовирус, лентивирус и т. д.), вакцина mRAN.	При подготовке вакцины, инактивированной целым вирусом, вирус сначала инактивируется для повышения безопасности. Тестирование на токсичность используется для определения того, завершена ли инактивация. Субъединичные вакцины требуют только поверхностных белков вируса в качестве антигенов и должны учитывать иммунную эффективность.	Для обеспечения иммунного эффекта необходимо добавлять адъюванты, следует уделять внимание вирусу, который необходимо инактивировать, для обеспечения иммунного эффекта требуются соответствующие титры вируса, а безопасность процесса приготовления должна строго контролироваться.

Процесс или временная шкала иммунизации животных

Отбор животных и подготовка антигенов

Отбор животных: отберите альпак подходящего возраста и здорового телосложения из здоровых групп, проведите анализ крови и скрининг на наличие заболеваний, чтобы убедиться в отсутствии инфекционных заболеваний или других проблем со здоровьем.

Подготовка иммуногенов: Иммуногены играют ключевую роль в индукции иммунных ответов и требуют выбора соответствующих белков, пептидов или других подходящих веществ на основе требований целевого антитела.

Альпаку можно иммунизировать 1-3 антигенами одновременно, с общим количеством антигена 1-2 мг на иммунизацию и объемом менее 2 мл. Перед иммунизацией антиген и адъювант эмульгируют в соотношении 1:1 для образования однородной смеси, которая хранится при температуре 4 ℃.

Иммунологический альпака

Запишите номер уха пустой альпаки и начните эксперимент по иммунизации. Сделайте инъекцию в лимфатические узлы около шеи альпаки с обеих сторон, по 2 точки с каждой стороны и примерно 0,4 мл эмульгированного антигена, введенного в каждую точку. После иммунизации наблюдайте в течение получаса, чтобы убедиться, что у альпаки нет симптомов дискомфорта. Иммунизацию следует проводить каждые 2 недели, по крайней мере, 4 иммунизации.

Сбор крови

После 4 прививок в течение 5–7 дней соберите 50 мл крови из шейной вены альпаки.

Разделение сыворотки

Образцы крови собирают для иммунной оценки перед каждой иммунизацией антигеном, каждый раз берут 5 мл крови; в тот же день кровь центрифугируют при 400 xg в течение 30 минут, используя предварительно охлажденную до 25 ℃ центрифугу. Верхний слой сыворотки отделяют и сохраняют для последующего тестирования титра антител.

Отдельные лимфоциты

Сначала добавьте 15 мл раствора для разделения клеток, затем медленно добавьте 15 мл крови в центрифужную пробирку объемом 50 мл. Будьте осторожны и медленны при добавлении крови, чтобы предотвратить смешивание крови и разделительного раствора. Предварительно охлажденная центрифуга при 25 ℃, центрифугируйте при 400 xg в течение 30 минут и храните верхнюю сыворотку в новой центрифужной пробирке при -80 ℃; Используйте пипетку для аспирации среднего хлопкового верхнего слоя иммунных клеток в новую центрифужную пробирку объемом 50 мл. Добавьте 10 мл буфера PBS при комнатной температуре в каждую пробирку, центрифугируйте при 25 ℃ и 400 xg в течение 20 минут. Удалите супернатант, добавьте в каждую пробирку 5 мл буфера PBS при комнатной температуре, аккуратно перемешайте, подсчитайте количество клеток с помощью гемоцитометра, а затем центрифугируйте при 25 ℃ и 400 xg в течение 20 минут. Удалите супернатант и растворите лимфоциты, полученные с помощью RNAiso Plus, на основе количества клеток, чтобы получить лизат клеток 10^7/мл, который хранится при -80 ℃.

Рис. 1: Схематическое изображение различных стратегий обнаружения антител и экспериментальных стадий, которые в них участвуют. (Источник рисунка:Лаустсен, Андреас Х. и др.)

Клиенты обеспечивают иммуногены - строгий контроль качества

Типы иммуногенов	Требование	Метод контроля качества
Образцы пептидов/малых молекул	Условия растворения (в основном в зависимости от того, будут ли они инактивировать фаги), молекулярная структура/пептидная последовательность, отчет о синтезе (ВЭЖХ/МС/ЯМР-спектроскопия Н)	ВЭЖХ/МС обнаружение
Образцы белка	SDS-PAGE/WB, условия восстановления, буфер, информация на этикетке, общее количество (20-50 мкг), концентрация, чистота и т. д.	SDS-ПААГ/WB
Образцы клеток	Тип клеток (первичные клетки/клетки с отредактированным геном), форма клеток (свежие/замороженные-размороженные), тип роста (адгезивные/суспензированные), требования к культуральной среде, количество предоставленных клеток, количество предоставленных клеток, клетки с отредактированным геном для обеспечения стабильной экспрессии целевых объектов скрининга (соответствующее первичное антитело заказчика), замороженные-размороженные клетки для определения скорости восстановления	В основном мы работаем с клетками с отредактированными генами, используя предоставленные заказчиком первичные антитела для идентификации целевой экспрессии методом ИФА (наша компания предоставляет вторичные антитела HRP), а также детектирование методом проточной цитометрии (наша компания может предоставить флуоресцентные вторичные антитела).

Каковы области применения иммунитета животных?

+

Поликлональные антитела могут быть получены путем иммунизации животных, моноклональные антитела могут быть получены путем слияния В-клеток с клетками миеломы, а мононуклеарные клетки периферической крови могут быть извлечены из верблюжьих источников (альпака, верблюд, альпака и т. д.) для получения различных форм фрагментов антител, таких как нанотела, Fab-фрагменты, фрагменты антител scFv и т. д.
Каковы меры предосторожности для иммунитета животных?

+

Для получения наноантител для животных, полученных от верблюдов, требуется 5-6 иммунизаций. Образцы крови следует собирать в качестве контроля перед иммунизацией с интервалом в 2 недели между каждой иммунизацией. После четвертой иммунизации следует собрать положительную кровь и неиммунизированную отрицательную кровь для ИФА для определения титра. Если титр ниже 10^6, количество иммунизаций следует увеличить до тех пор, пока титр не достигнет соответствующего уровня. Для других видов иммунизации животных, таких как иммунизация кроликов (оптимальный или общепринятый уровень белкового антигена для иммунизации кроликов составляет 50–1000 мкг), иммунизация мышей (оптимальный или общепринятый уровень белкового антигена для иммунизации мышей составляет 5–50 мкг, что требует 10^6 клеток, если это клетка, и 10–50 мкг для нуклеиновой кислоты или углеводов), иммунизация коз (оптимальный или общепринятый уровень белкового антигена для иммунизации коз составляет 250–5000 мкг) и т. д., следует уделять внимание дозировке, безопасности и эффективности иммуногенов.
Как выбрать иммунных животных?

+

В зависимости от типа антител, требуемых заказчиком, если вам необходимо произвести нанотела или другие фрагменты антител, вы можете выбрать животных, полученных от верблюдов (верблюды, альпаки, альпаки) для иммунизации. Если вам необходимо произвести моноклональные или поликлональные антитела, вам необходимо выбрать соответствующий вид на основе количества сыворотки, антигена и источника антигена. Максимальный объем сыворотки для кроликов составляет 500 мл, что требует небольшого количества антигена и является основным выбором для производства поликлональных антител. Максимальный объем сыворотки для мышей составляет 2 мл, а максимальный объем сыворотки для крыс составляет 20 мл, что обычно является оптимальным выбором для моноклональных антител. Антитела, полученные от коз, обладают высокой аффинностью, и Alpha Lifetech может разработать для вас эксклюзивный план иммунизации в соответствии с вашими требованиями.
Нужно ли использовать антигены вместе с адъювантами? Как выбрать?

+

Существует два типа адъювантов: на масляной основе и на водной основе. Разумное использование адъювантов имеет решающее значение для индукции сильного ответа антител на растворимые антигены. Длительное высвобождение адъювантов означает, что можно использовать меньше доз антигенов, а ответы антител более продолжительны. Первую инъекцию следует использовать в сочетании с адъювантом. Обычно рекомендуется использовать адъювант Фрейнда, когда количество иммуногена невелико.
Меры предосторожности при вакцинации альпака?

+

(1) Выбор альпаки и антигена иммунитета являются ключом к успешной иммунизации. Выбор верблюда с хорошими пропорциями не рекомендуется. Чистота и правильная конформация иммунных антигенов имеют решающее значение для скрининга подходящих антител для последующих применений после иммунизации альпаками. Чистота белковых антигенов обычно не менее 90%.

(2) Разделение лимфоцитов: Своевременное разделение клеток может эффективно предотвратить гемолиз после взятия крови и достичь наилучшего эффекта разделения.

(3) Иммунный цикл может влиять на иммунный ответ: иммунный интервал в 1-2 недели позволяет альпакам иметь хороший иммунный ответ на большинство антигенов.

независимо разработанный адъювант

Наша уникальная формула адъюванта оптимизирована для иммунной системы альпаки, обеспечивая более высокую эффективность и специфичность по сравнению с традиционными адъювантами.

Доставка иммунизации
стандартный

Мы обязуемся завершить иммунизацию в указанные сроки, предоставить сыворотку с высоким титром и зафиксировать каждый шаг в подробных отчетах.

Контроль качества проекта

Каждый проект проходит строгий контроль качества, чтобы гарантировать поставку клиентам антител, соответствующих высоким стандартам.

четкоАльпакаФон

У нас есть здоровая популяция альпак, которая обеспечивает поддержку различных программ иммунизации.

Если у вас возникнут какие-либо вопросы, пожалуйста, обращайтесь к нам в любое время.