Платформа иммунизации животных

Платформа иммунизации животных в основном предназначена для иммунизации животных семейства верблюдовых (альпаки, лиамы и верблюды), что закладывает основу для производства наноантител.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Платформа иммунизации животных

Источники животных, используемые компанией Alpha Lifetech, прозрачны: имеются разрешения на инспекцию и карантин, четкая генетическая история, ясная частота иммунизации и подробные записи интервалов вакцинации, что обеспечивает удобные услуги по производству антител. В основном компания иммунизирует животных семейства верблюдовых (альпаки, лиамы и верблюды), закладывая основу для производства наноантител. Кроме того, она может также иммунизировать обычных животных (таких как новозеландские белые кролики, мыши и другие) в соответствии с требуемой частотой иммунизации и требованиями к иммуногенности, выделять и изолировать их в периферические мононуклеарные клетки крови (PBMC) и использовать их для последующих экспериментов (например, для разработки моноклональных антител, поликлональных антител и т. д.). Клиенты могут предоставлять свои собственные иммуногены, и мы будем проводить строгий контроль качества. Если клиенты предоставляют вирусные иммуногены, их необходимо инактивировать, и мы проведем тестирование на инактивацию для обеспечения безопасности. В то же время мы можем изготавливать соответствующие иммуногены по индивидуальному заказу клиента.

Введение в иммунизацию животных

При производстве антител животного происхождения, таких как моноклональные антитела, поликлональные антитела и наноантитела, первым шагом является иммунизация животных и получение соответствующих B-клеток, антител или периферических мононуклеарных клеток крови (ПМК) для подготовки к дальнейшему производству антител, проведения фундаментальных научных исследований, разработки клинических диагностических инструментов и содействия открытию и разработке новых лекарственных препаратов. Верблюды, альпаки, лиамы и другие верблюды семейства Camelidae могут производить библиотеки наноантител (однодоменных антител) путем сбора иммунизированной крови и экстракции ПМК. Кроликов и других животных можно иммунизировать, и из их тел можно извлечь антитела. После очистки их можно использовать для производства поликлональных антител. Мышей, крыс и др. можно использовать для производства моноклональных антител путем слияния экстрагированных иммунизированных B-клеток с миеломными клетками. Перед иммунизацией следует обратить внимание на принципы 3R (замена, сокращение, усовершенствование), которые позволяют значительно сократить количество используемых животных до необходимого минимума, улучшить экспериментальные процедуры и минимизировать страдания животных. Необходимо также соблюдать правила планирования эксперимента, выбирать подходящие антитела и строго следовать процедурам валидации.

Классификация иммуногенов - производство наноантител

Типы иммуногенов	Пример	Подготовка иммуногена	Примечания
Белковые иммуногены	Ферменты, белки, бактериальные токсины и другие вещества	Выберите различные системы экспрессии белка: кишечная палочка (E. coli), дрожжи, клетки насекомых, клетки млекопитающих и бесклеточная система.	Обратите внимание на такие факторы, как температура, время, pH и внутриклеточные включения, которые влияют на экспрессию белка.
Иммуногены нуклеиновых кислот	ДНК, РНК	ДНК-иммуноген: сконструировать плазмидную ДНК, клонировать подходящие экспрессионные векторы для целевых генов, культивировать клетки для амплификации плазмидной ДНК и выделить высокочистую плазмидную ДНК. РНК-иммуноген: необходимо добавить структуру "шляпки" и полиА-хвост для предотвращения деградации.	При приготовлении ДНК-иммуногенов следует обращать внимание на соответствующие клетки-хозяева, а при приготовлении РНК-иммуногенов необходимо предотвращать деградацию РНК.
Вирусные иммуногены	Инактивированная цельновирусная вакцина, субъединичная вакцина, вирусная векторная вакцина (аденовирус, лентивирус и др.), вакцина mRAN.	При приготовлении инактивированной цельновирусной вакцины вирус сначала инактивируют для повышения безопасности. Тестирование на токсичность используется для определения полноты инактивации. Субъединичные вакцины требуют в качестве антигенов только поверхностные белки вируса и должны учитывать иммунную эффективность.	Для обеспечения иммунного эффекта необходимо добавлять адъюванты, следует обращать внимание на вирус, который необходимо инактивировать, требуются соответствующие титры вируса для обеспечения иммунного эффекта, а также необходимо строго контролировать безопасность процесса приготовления.

Процесс или сроки иммунизации животных

Отбор животных и подготовка антигенов

Отбор животных: Отбирайте альпак подходящего возраста и здорового телосложения из здоровых групп, проводите анализ крови и скрининг на заболевания, чтобы убедиться в отсутствии инфекционных заболеваний или других проблем со здоровьем.

Подготовка иммуногенов: Иммуногены являются ключом к индукции иммунного ответа и требуют выбора соответствующих белков, пептидов или других подходящих веществ в зависимости от требований целевого антитела.

Альпаку можно иммунизировать одновременно 1-3 антигенами, при этом общее количество антигена на одну иммунизацию составляет 1-2 мг, а объем — менее 2 мл. Перед иммунизацией антиген и адъювант эмульгируют в соотношении 1:1 для образования однородной смеси, которую хранят при температуре 4 ℃.

Иммунологическая альпака

Запишите номер пустого уха альпаки и начните эксперимент по иммунизации. Введите препарат в лимфатические узлы возле шеи альпаки с обеих сторон, по 2 точки с каждой стороны, примерно по 0,4 мл эмульгированного антигена в каждую точку. После иммунизации понаблюдайте за альпакой в течение получаса, чтобы убедиться в отсутствии у нее симптомов дискомфорта. Иммунизацию следует проводить каждые 2 недели, всего не менее 4 прививок.

сбор крови

После 4 прививок в течение 5-7 дней соберите 50 мл крови из шейной вены альпаки.

Разделение сыворотки

Перед каждой иммунизацией антигеном берут образцы крови для оценки иммунитета, по 5 мл крови за раз; в тот же день кровь центрифугируют при 400 xg в течение 30 минут в предварительно охлажденной до 25 ℃ центрифуге. Верхний слой сыворотки отделяют и хранят для последующего определения титра антител.

Отдельные лимфоциты

Сначала добавьте 15 мл раствора для разделения клеток, затем медленно добавьте 15 мл крови в центрифужную пробирку объемом 50 мл. Будьте осторожны и добавляйте кровь медленно, чтобы предотвратить смешивание крови и раствора для разделения. Предварительно охладите центрифугирование при 25 ℃, центрифугируйте при 400 xg в течение 30 минут и храните верхний слой сыворотки в новой центрифужной пробирке при -80 ℃; с помощью пипетки отберите средний слой иммунных клеток, имеющий форму ваты, в новую центрифужную пробирку объемом 50 мл. Добавьте 10 мл PBS-буфера комнатной температуры в каждую пробирку, центрифугируйте при 25 ℃ и 400 xg в течение 20 минут. Удалите надосадочную жидкость, добавьте 5 мл PBS-буфера комнатной температуры в каждую пробирку, аккуратно перемешайте, подсчитайте количество клеток с помощью гемоцитометра, а затем центрифугируйте при 25 ℃ и 400 xg в течение 20 минут. Удалите надосадочную жидкость и растворите лимфоциты, полученные с помощью RNAiso Plus, в зависимости от количества клеток, чтобы получить клеточный лизат с концентрацией 10 ^ 7/мл, который хранится при -80 ℃.

Рис. 1: Схематическое представление различных стратегий поиска антител и соответствующих экспериментальных этапов. (Источник рисунка: Лаустсен, Андреас Х. и др.)

Клиенты обеспечивают строгий контроль качества иммуногенов.

Типы иммуногенов	Требование	Метод контроля качества
Образцы пептидов/малых молекул	Условия растворения (в основном зависят от того, будут ли они инактивировать фаги), молекулярная структура/последовательность пептида, отчет о синтезе (ВЭЖХ/МС/ЯМР).	Обнаружение методом ВЭЖХ/МС
Образцы белка	SDS-PAGE/WB, условия восстановления, буфер, информация на этикетке, общее количество (20-50 мкг), концентрация, чистота и т. д.	SDS-PAGE/WB
Образцы клеток	Тип клеток (первичные клетки/генно-модифицированные клетки), форма клеток (свежие/замороженные/размороженные), тип роста (адгезивные/суспендированные), требования к культуральной среде, количество предоставленных клеток, количество предоставленных клеток, генно-модифицированные клетки для обеспечения стабильной экспрессии целевых белков скрининга (соответствующие первичные антитела заказчика), замороженные/размороженные клетки для определения степени восстановления.	В основном, мы работаем с клетками, подвергнутыми генному редактированию, используя предоставленные заказчиком первичные антитела для идентификации экспрессии целевого гена методом ELISA (наша компания предоставляет вторичные антитела, меченные HRP), а также для детекции методом проточной цитометрии (наша компания может предоставить флуоресцентные вторичные антитела).

Каковы области применения иммунитета у животных?

+

Поликлональные антитела могут быть получены путем иммунизации животных, моноклональные антитела — путем слияния B-клеток с миеломными клетками, а периферические мононуклеарные клетки крови (ПМК) могут быть выделены из верблюжьих источников (альпака, верблюд, альпака и др.) для получения различных форм фрагментов антител, таких как наноантитела, Fab-фрагменты, scFv-фрагменты антител и др.
Какие меры предосторожности необходимо предпринять для обеспечения иммунитета у животных?

+

Для получения наноантител для животных, полученных от верблюдов, требуется 5-6 прививок. Перед иммунизацией следует собрать образцы крови в качестве контроля с интервалом в 2 недели между каждой прививкой. После четвертой прививки следует собрать положительную кровь и отрицательную кровь неиммунизированных животных для определения титра методом ИФА. Если титр ниже 10^6, количество прививок следует увеличить до достижения соответствующего уровня. При иммунизации других животных, таких как кролики (оптимальный или распространенный уровень белкового антигена для иммунизации кроликов составляет 50-1000 мкг), мыши (оптимальный или распространенный уровень белкового антигена для иммунизации мышей составляет 5-50 мкг, что требует 10^6 клеток, если это клетка, и 10-50 мкг для нуклеиновых кислот или углеводов), козы (оптимальный или распространенный уровень белкового антигена для иммунизации коз составляет 250-5000 мкг) и др., следует уделять внимание дозировке, безопасности и эффективности иммуногенов.
Как выбрать животных с иммунитетом?

+

В зависимости от типа антител, необходимых заказчику, если требуется производство наноантител или других фрагментов антител, для иммунизации можно выбрать животных, полученных от верблюдов (верблюдов, альпак). Если необходимо производство моноклональных или поликлональных антител, следует выбрать соответствующий вид животного, исходя из количества сыворотки, антигена и источника антигена. Максимальное количество сыворотки для кроликов составляет 500 мл, что требует небольшого количества антигена и является основным выбором для производства поликлональных антител. Максимальное количество сыворотки для мышей составляет 2 мл, а для крыс — 20 мл, что обычно является оптимальным выбором для моноклональных антител. Антитела, полученные от коз, обладают высокой аффинностью, и компания Alpha Lifetech может разработать для вас индивидуальный план иммунизации в соответствии с вашими требованиями.
Необходимо ли использовать антигены вместе с адъювантами? Как выбрать подходящие?

+

Существует два типа адъювантов: на масляной и на водной основе. Разумное использование адъювантов имеет решающее значение для индукции сильного антительного ответа на растворимые антигены. Длительное высвобождение адъювантов означает, что можно использовать меньшее количество доз антигенов, а антительный ответ более продолжительный. Первую инъекцию следует использовать в сочетании с адъювантом. Как правило, рекомендуется использовать адъювант Фрейнда, когда количество иммуногена невелико.
Какие меры предосторожности следует соблюдать при иммунизации альпак?

+

(1) Выбор альпаки и антигена иммунитета является ключом к успешной иммунизации. Выбор хорошо сложенного верблюда нецелесообразен. Чистота и правильная конформация иммунных антигенов имеют решающее значение для отбора подходящих антител для последующего применения после иммунизации альпаками. Чистота белковых антигенов обычно составляет не менее 90%.

(2) Разделение лимфоцитов: Своевременное разделение клеток позволяет эффективно предотвратить гемолиз после забора крови и достичь наилучшего эффекта разделения.

(3) Иммунный цикл может влиять на иммунный ответ: иммунный интервал в 1-2 недели позволяет альпакам иметь хороший иммунный ответ на большинство антигенов.

независимо разработанный адъювант

Наша уникальная формула адъюванта оптимизирована для иммунной системы альпаки, обеспечивая более высокую эффективность и специфичность, чем традиционные адъюванты.

Введение вакцины
стандарт

Мы гарантируем завершение иммунизации в указанные сроки, предоставление сыворотки с высоким титром антител и документирование каждого этапа в подробных отчетах.

контроль качества проекта

Каждый проект проходит строгие процессы контроля качества, чтобы гарантировать поставку клиентам антител, отвечающих высоким стандартам.

четкоАльпакаФон

У нас здоровая популяция альпак, которая обеспечивает поддержку различных программ иммунизации.

Если у вас возникнут какие-либо вопросы, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам в любое время.