Платформа иммунизации животных

Платформа иммунизации животных в основном иммунизирует животных семейства Camelidae (альпака, лиама и верблюды), закладывая основу для производства нанотел.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Платформа иммунизации животных

Источники животных Alpha Lifetech прозрачны, имеют разрешения на инспекцию и карантин, чёткую генетическую информацию, чёткую частоту вакцинации и подробные данные о интервалах вакцинации, что обеспечивает удобный сервис для производства антител. Компания в основном иммунизирует животных семейства Camelidae (альпака-лиама и верблюды), закладывая основу для производства нанотел. Кроме того, Alpha Lifetech может иммунизировать обычных животных (например, новозеландских белых кроликов, мышей и других) в соответствии с требуемой заказчиком частотой вакцинации и требованиями к иммуногенности, выделять их и изолировать в моноклональные клетки периферической крови (МНПК) и использовать в последующих экспериментах (например, для получения моноклональных антител, поликлональных антител и т.д.). Клиенты могут предоставлять собственные иммуногены, и мы будем проводить строгий контроль их качества. Если клиенты предоставляют вирусные иммуногены, их необходимо инактивировать, и мы проведём испытания на инактивацию для обеспечения безопасности. Кроме того, мы можем разработать соответствующие иммуногены в соответствии с потребностями заказчика.

Введение в иммунизацию животных

При получении антител животного происхождения, таких как моноклональные антитела, поликлональные антитела и нанотела, первым шагом является иммунизация животных и получение соответствующих В-клеток, антител или мононуклеарных клеток периферической крови (МПК) для подготовки к дальнейшей продукции антител, содействия фундаментальным научным исследованиям, разработки клинических диагностических инструментов и содействия открытию и разработке новых лекарственных средств. Верблюды, альпаки, лиамы и другие верблюды семейства Camelidae могут производить библиотеки нанотел (однодоменных антител) путем сбора иммунной крови и выделения МПК. Кролики и другие животные могут быть иммунизированы, и из их организма могут быть выделены антитела. После очистки их можно использовать для получения поликлональных антител. Мыши, крысы и другие животные могут быть использованы для получения моноклональных антител путем слияния В-клеток, выделенных иммунной системой, с клетками миеломы. Перед иммунизацией следует обратить внимание на принципы 3R (замена, сокращение, уточнение), которые позволяют значительно сократить количество используемых животных до необходимого минимума, улучшить экспериментальные процедуры и минимизировать страдания животных. Также необходимо соблюдать надлежащий экспериментальный дизайн, выбор соответствующих антител и строгие процедуры проверки.

Классификация иммуногенов - производство нанотел

Типы иммуногенов	Пример	Приготовление иммуногена	Примечания
Белковые иммуногены	Ферменты, белки, бактериальные токсины и другие вещества	Выбирайте различные системы экспрессии белков: E. coli, дрожжи, клетки насекомых, клетки млекопитающих и бесклеточную систему.	Обратите внимание на такие факторы, как температура, время, pH и тельца включения, которые влияют на экспрессию белка.
Иммуногены нуклеиновых кислот	ДНК, РНК	ДНК-иммуноген: конструирование плазмидной ДНК, клонирование подходящих векторов экспрессии для целевых генов, культивирование клеток для амплификации плазмидной ДНК и извлечение высокоочищенной плазмидной ДНК. РНК-иммуноген: необходимо добавить структуру шляпы и полиА-хвост для предотвращения деградации	При приготовлении ДНК-иммуногенов следует обращать внимание на соответствующие клетки-хозяева, а при приготовлении РНК-иммуногенов следует уделять внимание предотвращению деградации РНК.
Вирусные иммуногены	Цельновирусная инактивированная вакцина, субъединичная вакцина, вирусная векторная вакцина (аденовирус, лентивирус и т. д.), mRAN-вакцина.	При приготовлении вакцины, инактивированной на основе цельного вируса, вирус сначала инактивируется для повышения безопасности. Для определения полноты инактивации используются испытания на токсичность. Для субъединичных вакцин в качестве антигенов требуются только поверхностные белки вируса, и необходимо учитывать их иммунологическую эффективность.	Для обеспечения иммунного эффекта необходимо добавлять адъюванты, следует уделять внимание вирусу, который необходимо инактивировать, для обеспечения иммунного эффекта необходимы соответствующие титры вируса, а безопасность процесса приготовления должна строго контролироваться.

Процесс или временная шкала иммунизации животных

Отбор животных и подготовка антигенов

Отбор животных: выберите альпак подходящего возраста и здорового телосложения из здоровых групп, проведите анализ крови и скрининг на заболевания, чтобы убедиться в отсутствии инфекционных заболеваний или других проблем со здоровьем.

Подготовка иммуногенов: Иммуногены играют ключевую роль в индукции иммунных реакций и требуют выбора соответствующих белков, пептидов или других подходящих веществ на основе требований целевого антитела.

Альпаку можно иммунизировать 1–3 антигенами одновременно, при этом общее количество антигена на одну иммунизацию составляет 1–2 мг, а объём — менее 2 мл. Перед иммунизацией антиген и адъювант эмульгируют в соотношении 1:1 до образования однородной смеси, которую хранят при температуре 4 °C.

Иммунологическая альпака

Запишите номер уха альпаки и начните эксперимент по иммунизации. Введите вакцину в лимфатические узлы около шеи альпаки с обеих сторон, по 2 точки с каждой стороны, вводя примерно 0,4 мл эмульгированного антигена в каждую точку. После иммунизации наблюдайте за альпакой в течение получаса, чтобы убедиться в отсутствии у неё симптомов дискомфорта. Иммунизацию следует проводить каждые 2 недели, не менее 4 прививок.

Сбор крови

После 4 иммунизаций в течение 5–7 дней соберите 50 мл крови из шейной вены альпаки.

Разделение сыворотки

Перед каждой иммунизацией антигеном берут образцы крови для оценки иммунного ответа, каждый раз забирая по 5 мл крови. В тот же день кровь центрифугируют при 400 g в течение 30 минут, используя предварительно охлажденную до 25 °C центрифугу. Верхний слой сыворотки отделяют и сохраняют для последующего определения титра антител.

Отдельные лимфоциты

Сначала добавьте 15 мл раствора для разделения клеток, затем медленно добавьте 15 мл крови в центрифужную пробирку объёмом 50 мл. Будьте осторожны и медленнее при добавлении крови, чтобы предотвратить смешивание крови и раствора для разделения. Предварительно охладите центрифугу до 25 °C, центрифугируйте при 400 g в течение 30 минут и сохраните верхний слой сыворотки в новой центрифужной пробирке при температуре -80 °C. Используйте пипетку для аспирации верхнего слоя иммунных клеток, напоминающего ватный тампон, в новую центрифужную пробирку объёмом 50 мл. Добавьте в каждую пробирку по 10 мл буфера PBS комнатной температуры, центрифугируйте при 25 °C и 400 g в течение 20 минут. Удалите супернатант, добавьте в каждую пробирку по 5 мл буфера PBS комнатной температуры, аккуратно перемешайте, подсчитайте количество клеток с помощью гемоцитометра и центрифугируйте при 25°C и 400 g в течение 20 минут. Удалите супернатант и растворите лимфоциты, полученные с помощью RNAiso Plus, исходя из количества клеток, чтобы получить клеточный лизат с концентрацией 10^7/мл, который хранят при температуре -80°C.

Рис. 1: Схематическое изображение различных стратегий поиска антител и соответствующих экспериментальных стадий. (Источник рисунка: Лаустсен, Андреас Х. и др.)

Клиенты предоставляют иммуногены - строгий контроль качества

Типы иммуногенов	Требование	Метод контроля качества
Образцы пептидов/малых молекул	Условия растворения (в основном в зависимости от того, будут ли они инактивировать фаги), молекулярная структура/пептидная последовательность, отчет о синтезе (ВЭЖХ/МС/ЯМР-Н)	ВЭЖХ/МС-детектирование
Образцы белка	SDS-PAGE/WB, условия восстановления, буфер, информация на этикетке, общее количество (20-50 мкг), концентрация, чистота и т. д.	SDS-PAGE/WB
Образцы клеток	Тип клеток (первичные клетки/клетки с отредактированным геном), форма клеток (свежие/замороженные-размороженные), тип роста (адгезивные/суспензированные), требования к питательной среде, количество предоставленных клеток, количество предоставленных клеток, клетки с отредактированным геном для обеспечения стабильной экспрессии целевых объектов скрининга (соответствующее первичное антитело заказчика), замороженные-размороженные клетки для определения скорости восстановления	В основном нацеливание на клетки с отредактированными генами с использованием первичных антител, предоставляемых заказчиком, для идентификации целевой экспрессии методом ИФА (наша компания предоставляет вторичные антитела HRP), детектирование методом проточной цитометрии (наша компания может предоставить флуоресцентные вторичные антитела).

Каковы области применения иммунитета животных?

+

Поликлональные антитела могут быть получены путем иммунизации животных, моноклональные антитела могут быть получены путем слияния В-клеток с клетками миеломы, а мононуклеарные клетки периферической крови могут быть извлечены из верблюжьих источников (альпака, верблюд, альпака и т. д.) для получения различных форм фрагментов антител, таких как нанотела, Fab-фрагменты, scFv-фрагменты антител и т. д.
Каковы меры предосторожности для обеспечения иммунитета у животных?

+

Для получения наноантител для животных, полученных от верблюдов, требуется 5–6 иммунизаций. Перед иммунизацией следует взять образцы крови для контроля с интервалом в 2 недели. После четвёртой иммунизации необходимо взять образцы крови положительных и отрицательных неиммунизированных животных для ИФА-анализа для определения титра. Если титр ниже 10^6, количество иммунизаций следует увеличить до достижения необходимого уровня. Для других иммунизаций животных, таких как иммунизация кроликов (оптимальный или общепринятый уровень белкового антигена для иммунизации кроликов составляет 50–1000 мкг), иммунизация мышей (оптимальный или общепринятый уровень белкового антигена для иммунизации мышей составляет 5–50 мкг, для чего требуется 10^6 клеток, если это клетка, и 10–50 мкг для нуклеиновой кислоты или углеводов), иммунизация коз (оптимальный или общепринятый уровень белкового антигена для иммунизации коз составляет 250–5000 мкг) и т. д., следует уделять внимание дозировке, безопасности и эффективности иммуногенов.
Как выбрать иммунных животных?

+

В зависимости от типа антител, необходимого заказчику, при необходимости получения нанотел или других фрагментов антител для иммунизации можно выбрать животных, полученных от верблюдов (альпаки). Для получения моноклональных или поликлональных антител необходимо выбрать соответствующий вид животного, исходя из количества сыворотки, антигена и источника антигена. Максимальный объем сыворотки для кроликов составляет 500 мл, что требует небольшого количества антигена и является основным вариантом для получения поликлональных антител. Максимальный объем сыворотки для мышей составляет 2 мл, а для крыс — 20 мл, что обычно является оптимальным вариантом для моноклональных антител. Антитела, полученные от коз, обладают высокой аффинностью, и Alpha Lifetech может разработать для вас индивидуальный план иммунизации в соответствии с вашими требованиями.
Нужно ли использовать антигены вместе с адъювантами? Как выбрать?

+

Существует два типа адъювантов: масляные и водные. Разумное использование адъювантов имеет решающее значение для индукции сильного гуморального иммунного ответа на растворимые антигены. Пролонгированное высвобождение адъювантов позволяет использовать меньшее количество антигенов, а гуморальный иммунный ответ более продолжительный. Первую инъекцию следует проводить в сочетании с адъювантом. При небольшом количестве иммуногена обычно рекомендуется использовать адъювант Фрейнда.
Меры предосторожности при вакцинации альпаки?

+

(1) Выбор альпаки и антигена иммунитета – ключ к успешной иммунизации. Выбор верблюда с хорошим телосложением не рекомендуется. Чистота и правильная структура иммунных антигенов имеют решающее значение для скрининга подходящих антител для последующего применения после иммунизации альпак. Чистота белковых антигенов обычно составляет не менее 90%.

(2) Разделение лимфоцитов: своевременное разделение клеток может эффективно предотвратить гемолиз после сбора крови и достичь наилучшего эффекта разделения.

(3) Иммунный цикл может влиять на иммунный ответ: иммунный интервал в 1-2 недели позволяет альпакам иметь хороший иммунный ответ на большинство антигенов.

независимо разработанный адъювант

Наша уникальная формула адъюванта оптимизирована для иммунной системы альпаки, обеспечивая более высокую эффективность и специфичность по сравнению с традиционными адъювантами.

Проведение иммунизации
стандартный

Мы обязуемся завершить иммунизацию в указанные сроки, предоставить сыворотку с высоким титром и зафиксировать каждый этап в подробных отчетах.

Контроль качества проекта

Каждый проект проходит строгий контроль качества, чтобы гарантировать поставку клиентам антител, соответствующих высоким стандартам.

четкоАльпакаФон

У нас здоровая популяция альпак, которая обеспечивает поддержку различных программ иммунизации.

Если у вас возникнут какие-либо вопросы, обращайтесь к нам в любое время.