Служба анализа характеристик аптамеров

Alpha Lifetech на протяжении многих лет предоставляет услуги, связанные с адаптерами, предлагая комплексные услуги по разработке и анализу адаптеров.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Служба анализа характеристик аптамеров

Alpha Lifetech предоставляет услуги, связанные с аптамерами, уже много лет и в настоящее время может предоставить комплексные схемы разработки аптамеров, такие как синтез аптамеров, скрининг SELEX, высокопроизводительное секвенирование, оптимизация и характеристика аптамеров. Основываясь на преимуществах метода SELEX для скрининга аптамеров, Alpha Lifetech расширила больше методов для скрининга аптамеров.

Введение в анализ характеристик аптамеров

Проверка соответствия

Оптимизированное сродство аптамера было проверено соответствующими методами анализа связывания аптамера. Примерами являются изотермическая титрационная калориметрия (ITC), проточная цитометрия (FCM) и поверхностный плазмонный резонанс (SPR), микрофлюидика и т. д. Сродство аптамера обычно выражается константой диссоциации (KD), физической величиной, используемой для количественной оценки степени молекулярной диссоциации в обратимой реакции. Чем меньше значение KD, тем стабильнее комплекс, то есть тем сильнее сродство; И наоборот, чем больше значение KD, тем нестабильнее комплекс и слабее сродство. Этот шаг является ключом к определению производительности аптамера, гарантируя созревание сродства аптамера и может связываться с целевой молекулой с высоким сродством и селективностью в практических приложениях.

Рис.1 Процесс созревания аффинности аптамера. Источник ссылки:Кингхорн AB, Фрейзер LA, 2017.

Проверка функции

В дополнение к проверке сродства необходимо проверить функцию аптамера. Это включает проверку стабильности аптамера, его специфичности и взаимодействия с другими молекулами в определенной среде. Результаты функциональной проверки напрямую повлияют на ценность аптамеров в научных исследованиях и промышленных приложениях.

Конкретная проверка

Конкурентный эксперимент: Способность аптамера связываться с определенной мишенью оценивается в присутствии других подобных мишеней. Если аптамер может специфически связываться с целевой молекулой без помех со стороны других молекул, это указывает на то, что он обладает высокой специфичностью.

Эксперимент по перекрестной реакции: аптамер связывается с рядом родственных или неродственных мишеней, чтобы увидеть, связывается ли он только с определенной мишенью, и таким образом проверить его специфичность.

Проверка стабильности

Эксперимент по деградации нуклеазы: Аптамеры подвергались воздействию различных концентраций нуклеаз и наблюдалась их деградация. Сравнивая степень деградации в различные моменты времени, можно оценить способность аптамера к деградации антинуклеазы.

Эксперимент по стабильности температуры и времени: Аптамер помещали в различные температурные и временные условия для наблюдения за его структурной и функциональной стабильностью. Это помогает определить оптимальные условия хранения и использования аптамеров.

Определение биологической активности

Соответствующий метод обычно выбирается в соответствии с конкретной целью применения аптамера нуклеиновой кислоты.

(1) Тестирование на молекулярном уровне: использование методов молекулярной биологии, таких как гель-электрофорез, вестерн-блоттинг и т. д., для обнаружения комплексов, образующихся после соединения аптамера с целевой молекулой, или для обнаружения изменений в уровне экспрессии целевой молекулы, вызванных аптамером.

(2) Тестирование на клеточном уровне: с помощью технологии культивирования клеток аптамеры инкубируют с целевыми клетками для наблюдения за биологическими изменениями, такими как морфология клеток, пролиферация и апоптоз, а также для оценки биологической активности аптамеров.

(3) Тестирование на животных моделях: в соответствующих животных моделях аптамеры нуклеиновых кислот вводятся путем инъекции или введения лекарственных средств, а также наблюдаются физиологические показатели и патологические изменения у животных для оценки биологической активности и безопасности аптамеров in vivo.