Услуги по анализу характеристик аптамеров

Компания Alpha Lifetech уже много лет предоставляет услуги, связанные с адаптерами, предлагая комплексные услуги по разработке и анализу адаптеров.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Услуги по анализу характеристик аптамеров

Компания Alpha Lifetech много лет предоставляет услуги, связанные с аптамерами, и в настоящее время может предложить комплексные схемы разработки аптамеров, включая синтез аптамеров, SELEX-скрининг, высокопроизводительное секвенирование, а также оптимизацию и характеристику аптамеров. Основываясь на преимуществах метода SELEX для скрининга аптамеров, Alpha Lifetech расширила спектр методов скрининга аптамеров.

Введение в анализ характеристик аптамеров

Проверка родства

Оптимизированное сродство аптамера было подтверждено соответствующими методами анализа связывания аптамера. Примерами являются изотермическая титрационная калориметрия (ИТК), проточная цитометрия (ПЦ), поверхностный плазмонный резонанс (СПР), микрофлюидика и др. Сродство аптамера обычно выражается константой диссоциации (КД), физической величиной, используемой для количественной оценки степени молекулярной диссоциации в обратимой реакции. Чем меньше значение КД, тем стабильнее комплекс, то есть тем сильнее сродство; и наоборот, чем больше значение КД, тем нестабильнее комплекс и тем слабее сродство. Этот этап является ключевым для определения эффективности аптамера, обеспечения созревания сродства аптамера и возможности связывания с целевой молекулой с высокой аффинностью и селективностью в практических приложениях.

Рис. 1. Процесс созревания аффинности аптамера. Источник:Кингхорн А.Б., Фрейзер Л.А., 2017.

Проверка функций

Помимо проверки аффинности, необходимо проверить и функциональность аптамера. Это включает в себя проверку стабильности, специфичности и взаимодействия аптамера с другими молекулами в конкретной среде. Результаты функциональной проверки напрямую повлияют на ценность аптамеров в научных исследованиях и промышленном применении.

Специальная проверка

Конкурентный эксперимент: оценивается способность аптамера связываться со специфической мишенью в присутствии других подобных мишеней. Если аптамер может специфически связываться с целевой молекулой без помех со стороны других молекул, это указывает на его высокую специфичность.

Эксперимент по перекрестной реакции: аптамер связывается с рядом родственных или неродственных мишеней, чтобы проверить, связывается ли он только с определенной мишенью, и таким образом подтвердить его специфичность.

Проверка стабильности

Эксперимент по деградации под действием нуклеаз: Аптамеры подвергали воздействию нуклеаз различной концентрации, после чего наблюдали их деградацию. Сравнивая степень деградации в разные моменты времени, можно оценить способность аптамера противостоять деградации под действием нуклеаз.

Эксперимент по изучению стабильности при различных температурах и временных условиях: аптамер помещали в различные температурные и временные условия для наблюдения за его структурной и функциональной стабильностью. Это помогает определить оптимальные условия хранения и использования аптамеров.

Идентификация биологической активности

Подходящий метод обычно выбирается в зависимости от конкретной цели применения аптамера на основе нуклеиновой кислоты.

(1) Тестирование на молекулярном уровне: Использование методов молекулярной биологии, таких как гель-электрофорез, вестерн-блоттинг и т. д., для обнаружения комплексов, образующихся после связывания аптамера с целевой молекулой, или обнаружения изменений уровня экспрессии целевой молекулы, вызванных аптамером.

(2) Тестирование на клеточном уровне: с помощью технологии клеточных культур аптамеры инкубируют с целевыми клетками для наблюдения за биологическими изменениями, такими как морфология клеток, пролиферация и апоптоз, и оценки биологической активности аптамеров.

(3) Тестирование на животных моделях: В соответствующих моделях животных нуклеиновые кислоты аптамеры вводятся инъекционно или путем введения лекарственного препарата, а физиологические показатели и патологические изменения животных наблюдаются для оценки биологической активности и безопасности аптамеров in vivo.