Платформа для разработки биспецифических антител

Компания Alpha Lifetech может предоставить своим клиентам продукцию и услуги, гарантирующие высокое качество в области разработки антител и рекомбинантных белков.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Платформа для разработки биспецифических антител

Компания Alpha Lifetech предоставляет клиентам высококачественные продукты и услуги по разработке антител и рекомбинантных белков. Мы можем производить антитела с высокой эффективностью, сильной специфичностью и хорошей стабильностью. Alpha Lifetech располагает разнообразным оборудованием и приборами для очистки антител, что позволяет предоставлять услуги по очистке антител из различных источников, таких как моноклональные антитела кролика, овцы, курицы и мыши, а также услуги по аффинной очистке с использованием белков A/G и услуги по разделению и очистке антител. На основе комплексной платформенной системы, включающей платформу для разработки антител, белковую платформу и т.д., мы охватываем все этапы производства антител и предоставляем технические услуги, начиная с подготовки антител, очистки биспецифических антител и разделения и очистки антител, секвенирования антител, валидации антител и т.д., что может быть использовано для биспецифической терапии.

Моноклональные антитела — это иммуноглобулины, продуцируемые одной B-клеткой, обладающие высокой специфичностью к антигенам или эпитопам. Первоначально производство моноклональных антител осуществлялось с использованием гибридомной технологии для получения мышиных антител. В частности, путем слияния клеток селезенки иммунизированных мышей с миеломными клетками человека или мыши образуются гибридомные клетки, которые секретируют специфические антитела. Полученные мышиные моноклональные антитела в основном используются в исследованиях на животных и для диагностики заболеваний после очистки. Однако человеческий организм вырабатывает иммунный ответ на чужеродные мышиные белки, поэтому существуют значительные ограничения в клиническом применении производства мышиных моноклональных антител. Позже для получения моноклональных антител из мышей стали использовать «гуманизацию», а также технологию генной инженерии для модификации мышиных антител с целью получения константной области человеческого иммуноглобулина для снижения их иммуногенности. Этот тип антител также известен как гуманизированные моноклональные антитела. Кроме того, использование человеческих клеток для производства моноклональных антител называется получением цельных человеческих моноклональных антител. Моноклональные антитела широко используются в биомедицинских и клинических приложениях. В медицинских исследованиях моноклональные антитела могут использоваться в качестве иммуномодуляторов, терапевтические моноклональные антитела могут применяться для химиотерапии рака и лечения вирусных инфекций, а разработка конъюгатов моноклональных антител в основном используется для лечения рака.

Введение в биспецифические антитела

В 1960 году была предложена концепция биспецифических антител. Биспецифические антитела, также известные как биспецифические моноклональные антитела, представляют собой искусственно синтезированные антитела с использованием технологии генной инженерии. Как искусственно созданные антитела, биспецифические антитела обычно относятся к подклассу IgG и содержат фрагмент, связывающий антиген, нацеленный на субъединицу CD3. Биспецифические антитела имеют два специфических участка связывания антигена, которые могут одновременно связывать и распознавать два разных антигена или два разных эпитопа одного антигена. По сравнению с моноклональными антителами, биспецифические антитела имеют дополнительный специфический участок связывания антигена, что обеспечивает более высокую специфичность и способность к нацеливанию, позволяя более точно воздействовать на опухолевые клетки и снижать нецелевую токсичность. Биспецифические антитела могут одновременно выполнять множество биологических функций, таких как привлечение иммунных клеток, блокирование сигнальных путей и прямое уничтожение опухолевых клеток. Ранние биспецифические антитела в основном получали путем химической конъюгации или слияния клеток, но этот метод, возможно, развивался медленно из-за случайного сочетания и сложности выделения целевой комбинации. Благодаря непрерывному развитию технологий генной инженерии было разработано множество новых технологических платформ, таких как «узлы в отверстиях» (KIH), CrossMab, DVD Ig и др. Эти платформы эффективно решают такие проблемы, как несоответствие тяжелых и легких цепей, и повышают однородность и выход биспецифических антител.

Рис. 1. Упрощенная схематическая иллюстрация предлагаемых механизмов действия биспецифических антител (бСАБ) в клинических испытаниях в онкологии.(Источник рисунка: Обзор биспецифических антител и конструкций антител в онкологии и клинических проблемах - ScienceDirect)

Технология производства биспецифических антител

Основные методы получения биспецифических антител включают химическое связывание, гибридомы из четырех источников и генную инженерию для получения антител. Среди них метод химического связывания предполагает соединение двух интактных IgG или двух фрагментов F(ab')2 антител в биспецифические антитела с использованием химических связующих агентов, таких как фталимид и дитиоацилбензойная кислота. Этот метод прост и удобен в применении, но может повредить сайт связывания антигена, снизить активность антител, а сам связующий агент обладает определенной степенью канцерогенности. Метод гибридом из четырех источников основан на слиянии соматических клеток из двух разных линий гибридомных клеток для экспрессии соответствующего мышиного IgG. С помощью генной инженерии антитела могут быть генетически модифицированы для образования биспецифических антител. Были сконструированы два разных моноклональных антитела, и фрагменты Fab или вариабельные области тяжелой и легкой цепей двух антител были расщеплены отдельно. С помощью реакции сшивания или технологии рекомбинации цепей два фрагмента были объединены для образования биспецифического антитела. Несмотря на относительную сложность технологии генной инженерии, в настоящее время это наиболее распространенный метод получения биспецифических антител для корректировки их структуры и функций. При разработке биспецифических антител может использоваться принцип перекрестной реактивности антител, однако перекрестная реактивность антител может вызывать неспецифические реакции, поэтому этот аспект следует тщательно учитывать при практическом применении биспецифических антител, например, в биспецифической терапии.

Очистка биспецифических антител

Очистка биспецифических антител — это процесс выделения и очистки высокочистых целевых антител. Для удаления некоторых растворимых примесей используются два метода: центрифугирование и глубокая фильтрация. Целевое биспецифическое антитело первоначально захватывается с помощью аффинной хроматографии. Для биспецифических антител типа IgG используется аффинная хроматография на белке А, тогда как для биспецифических антител, не относящихся к типу IgG, может использоваться аффинная хроматография на основе легких цепей. Затем антитело инкубируют в условиях низкого pH в течение определенного периода времени, что приводит к разрушению белковой структуры на поверхности вирусной оболочки, в результате чего вирус теряет способность инфицировать клетки. Промежуточная глубокая фильтрация проводится для дальнейшего удаления примесей, таких как белки клеток-хозяев (HCP). Чистота антител повышается с помощью таких методов, как ионообменная хроматография, а любые остаточные вирусы удаляются с помощью нанофильтрации или ультрафильтрации. Наконец, образец концентрируют и заменяют подходящим буферным раствором.

Рабочий процесс производства биспецифических антител

Шаги	Содержание сервиса	Хронология
Синтез генов	Создание до 3 различных вариантов последовательности ДНК, разработка рекомбинантных плазмид антител с нуля.	2-3 недели
Тест в малом масштабе	Производство биспецифических антител → Экспрессия в малых масштабах в линиях клеток млекопитающих → Валидация методом SDS-PAGE → Анализ связывания с рекомбинантными белковыми антигенами методом ELISA → Сравнение клонов с родительскими антителами	5-6 недель
Идентифицировать	Экспрессия первых двух полноразмерных биспецифических антител → Анализ связывания методом ИФА → Оценка антител, распознаваемых антителами против мышей, методом ИФА	1 неделя
Производство антител	Крупномасштабное производство антител	3-4 недели

Наши преимущества

Мы предоставляем полный спектр услуг на всех этапах производства антител, от подготовки и очистки биспецифических антител до их разделения и очистки, секвенирования, валидации и т.д., что может быть использовано для биспецифической терапии.

Высокая экспрессия

Высокий уровень экспрессии белка в клетках CHO.
Стабильное хранение

>2 недель в сыворотке при 37 °C.
Проблем с растворимостью нет.

>30 мг/мл
Стабильные клеточные линии

Для проверки эффективности многих биспецифических антител было разработано множество стабильных клеточных линий с опухолевыми антигенами.