Услуги по разработке моноклональных антител

Alpha Lifetech Inc.Может обеспечивать прогнозирование эпитопов, синтез пептидов, экспрессию белков, производство поликлональных или моноклональных антител, а также очистку антител из клеточных культур, асцитической жидкости или цельной сыворотки.

Alpha Lifetech Inc.Наша компания имеет опыт предоставления клиентам различных услуг по созданию стабильных клеточных линий, включая гибридомные клетки, клеточные линии для редактирования генома, клеточные линии с подавлением экспрессии генов и клеточные линии с гиперэкспрессией. Мы стремимся предлагать каждому клиенту передовые услуги по созданию клеточных линий на заказ, и наши услуги проверены и заслуживают доверия.

Стратегия разработки антител

1. Разработка и подготовка антигенов
Эти антигены могут быть белками, пептидами или другими молекулами. Разработка иммуногенов требует комплексного подхода, объединяющего знания о структуре антигенов, иммунологии и системах доставки. Компания Alpha Lifetech обладает технологией разработки антигенов, позволяющей создавать иммуногены для нуждающихся в этом клиентов.
Компания Alpha Lifetech предлагает клиентам широкий выбор рекомбинантных белковых продуктов. Мы используем различные системы экспрессии белков, такие как система экспрессии в кишечной палочке (E. coli), дрожжах, бакуловирусах (насекомых), млекопитающих и др., для производства необходимых вам рекомбинантных белков для исследований.

2. Иммунизация животных
Компания Alpha Lifetech может поставлять иммуногены своим клиентам, и вы можете выбрать для себя иммунизированных животных, таких как мыши, кролики, овцы, альпаки, морские свинки, хомяки и т.д.

3. Методы получения моноклональных антител

●Производство моноклональных антител с использованием гибридомной технологии.
Гибридома — это гибридная клетка, полученная путем слияния двух типов клеток: линии клеток мышиной миеломы и плазматических клеток (В-лимфоцитов), в которой гетерозиготная клетка способна продуцировать непрерывные антитела против интересующего антигена in vitro. Получение линии гибридомных клеток состоит из трех этапов: разработка антигена (гаптены, малые молекулы и пептиды), иммунизация животных, слияние клеток и скрининг положительных клонов. Используя уникальные методики иммунизации, мы достигаем исключительно высокой эффективности слияния клеток (1-10 гибридом на тысячу В-клеток) и высоких титров антител, что максимизирует наши шансы на успех в последующих аналитических тестах, включая биохимический скрининг, клеточные анализы in vitro и исследования на животных.

●Производство моноклональных антител с помощью технологии фагового дисплея
Фаговый дисплей предлагает еще один метод получения моноклональных антител. В-лимфоциты выделяют из крови животных, и из них извлекают мРНК. С помощью ПЦР эту мРНК преобразуют в кДНК, которая амплифицирует все сегменты VH и VL. Затем эти сегменты клонируют в вектор, обычно в виде одноцепочечных вариабельных фрагментов (scFv), вместе с белком PIII бактериофага. Впоследствии эта конструкция используется для заражения E. coli, в результате чего создается библиотека, содержащая приблизительно 10^10 клеток, путем инокуляции вспомогательным фагом. Затем E. coli способна секретировать бактериофаг, содержащий сегменты VH и VL, в качестве части своей оболочки. После этого можно отобрать специфические сегменты VH и VL, нацеленные на интересующий антиген, и использовать их для повторной инокуляции E. coli бактериофагом. Затем клетки, содержащие плазмиду, выделяют и секвенируют.

4. Скрининг методом слияния изображений

●Слияние и отбор клеток
Затем выделенные B-клетки сливаются с миеломными клетками, которые являются раковыми клетками, способными неограниченно размножаться в культуре. Слияние обычно достигается с помощью таких методов, как слияние с полиэтиленгликолем (ПЭГ).
После слияния гибридомные клетки культивируют в селективной среде, которая позволяет выживать только гибридомам. Эта среда обычно содержит аминоптерин, который предотвращает рост несросшихся миеломных клеток.

●Скрининг и клонирование
Полученные гибридомные клетки проверяются на выработку антител, специфичных к целевому антигену. Обычно это делается с использованием таких методов, как иммуноферментный анализ (ELISA), вестерн-блоттинг, иммунопреципитация и проточная цитометрия.

После идентификации гибридомных клеток, продуцирующих антитело, их клонируют для получения популяции идентичных клеток. Это гарантирует идентичность антитела, продуцируемого каждой гибридомной клеткой.

5. Функциональная проверка антител
Компания Alpha Lifetech предоставляет услуги по функциональной валидации антител, такие как вестерн-блоттинг, иммуногистохимия или функциональные анализы, для характеристики моноклональных антител и подтверждения их специфичности, аффинности и функциональности.

6. Оптимизация антител
Очистка антител из культуральной среды с использованием таких методов, как аффинная хроматография с белком А или белком G, а также возможность использования компанией Alpha Lifetech методов модификации антител для повышения их аффинности.

7. Производство антител
Компания Alpha Lifetech может проводить оценку антител-кандидатов для высокопроизводительного скрининга и крупномасштабного производства.