Служба разработки моноклональных антител

Альфа Лайфтех Инк.может обеспечить прогнозирование эпитопов, синтез пептидов, экспрессию белков, производство поликлональных или моноклональных антител, а также очистку антител из клеточной культуры, асцитической жидкости или цельной сыворотки.

Альфа Лайфтех Инк.имеет опыт в предоставлении клиентам различных стабильных услуг по клеточным линиям, включая гибридомные клетки, линии клеток редактирования генома, линии клеток с нокдауном и линии клеток сверхэкспрессии. Мы стараемся предлагать передовые услуги по индивидуальным клеточным линиям каждому клиенту, и наши услуги проверены и надежны.

Стратегия разработки антител

1. Разработка и приготовление антигена
Эти антигены могут быть белками, пептидами или другими молекулами. Разработка иммуногенов требует комплексного подхода, который объединяет знания структуры антигена, иммунологии и систем доставки. Alpha Lifetech имеет технологию разработки антигенов, которая может разрабатывать иммуногены для нуждающихся клиентов.
Alpha Lifetech предоставляет клиентам рекомбинантные белковые продукты на выбор. У нас есть множество систем экспрессии белков, таких как система экспрессии E. coli, система экспрессии дрожжей, система экспрессии бакуловируса-насекомого, система экспрессии млекопитающих и т. д., для производства рекомбинантных белков, необходимых для исследований.

2. Иммунизация животных
Alpha Lifetech может предоставить клиентам иммуногены, а также иммунных животных, таких как мыши, кролики, овцы, альпаки, морские свинки, хомяки и т. д., на ваш выбор.

3.Методы производства моноклональных антител

●Производство MAB по технологии гибридом
Гибридома — это гибридная клетка, полученная путем слияния двух видов клеток, а именно линии клеток миеломы мыши и плазматических клеток (лимфоцитов B), в которой гетерозиготная клетка может производить непрерывные антитела против интересующего антигена in vitro. Производство линии клеток гибридомы состоит из трех частей: разработка антигена (гаптены, малые молекулы и пептиды), иммунизация животных, слияние клеток и скрининг положительных клонов. Используя уникальные методики иммунизации, мы получаем исключительно высокую эффективность слияния клеток (1-10 гибридом на тысячу B-клеток) и высокие титры антител, что максимально увеличивает наш показатель успеха в последующих аналитических тестах, которые включают биохимический скрининг, анализы на основе клеток in vitro и исследования на животных.

●Производство моноклональных антител с помощью технологии фагового дисплея
Фаговый дисплей предлагает другой метод получения моноклональных антител. B-лимфоциты выделяются из крови животных и извлекаются их мРНК. С помощью ПЦР эта мРНК преобразуется в кДНК, которая амплифицирует все сегменты VH и VL. Затем эти сегменты клонируются в вектор, как правило, как одноцепочечные вариабельные фрагменты (scFv), вместе с белком PIII бактериофага. Впоследствии эта конструкция используется для заражения E. coli, что приводит к созданию библиотеки, содержащей приблизительно 10^10 клеток, путем инокуляции вспомогательным фагом. Затем E. coli может секретировать бактериофаг, несущий сегменты VH и VL как часть своей оболочки. После этого можно выбрать определенные сегменты VH и VL, нацеленные на интересующий антиген, и использовать их для повторной прививки E. coli бактериофагом. Затем клетки, содержащие плазмиду, изолируют и секвенируют.

4.Скрининг слияния

●Слияние клеток и селекция
Собранные В-клетки затем сливаются с клетками миеломы, которые являются раковыми клетками, способными бесконечно размножаться в культуре. Слияние обычно достигается с помощью такой техники, как слияние с полиэтиленгликолем (ПЭГ).
После слияния клетки гибридомы культивируются в селективной среде, которая позволяет выживать только гибридомам. Среда обычно содержит аминоптерин, который предотвращает рост не слившихся клеток миеломы.

●Скрининг и удлинение
Полученные гибридомные клетки проверяются на выработку антител, специфичных к целевому антигену. Обычно это делается с использованием таких методов, как иммуноферментный анализ (ИФА), вестерн-блот, иммунопреципитация и проточная цитометрия.

После того, как клетки гибридомы, продуцирующие антитело, идентифицированы, их клонируют для создания популяции идентичных клеток. Это гарантирует, что антитело, продуцируемое каждой клеткой гибридомы, идентично.

5. Проверка функциональности антител
Alpha Lifetech проводит функциональную проверку антител, например, вестерн-блоттинг, иммуногистохимию или функциональные анализы, для характеристики моноклональных антител и подтверждения специфичности, сродства и функциональности антител.

6.Оптимизация антител
Очистка антител из культурального супернатанта с использованием таких методов, как аффинная хроматография с белком А или белком G, а также Alpha Lifetech может предложить методы модификации антител для улучшения аффинности антител.

7.Выработка антител
Alpha Lifetech может проводить оценку антител-кандидатов для высокопроизводительного скрининга и крупномасштабного производства.