Служба разработки моноклональных антител

Альфа Лайфтех Инк.может обеспечить прогнозирование эпитопов, синтез пептидов, экспрессию белков, производство поликлональных или моноклональных антител, а также очистку антител из клеточной культуры, асцитической жидкости или цельной сыворотки.

Альфа Лайфтех Инк.Имеет опыт предоставления клиентам различных услуг по созданию стабильных линий клеток, включая гибридомные клетки, линии клеток для редактирования генома, линии клеток с пониженным уровнем экспрессии и линии клеток с повышенной экспрессией. Мы стремимся предлагать каждому клиенту передовые услуги по созданию индивидуальных линий клеток, и наши услуги проверены и надежны.

Стратегия разработки антител

1. Разработка и приготовление антигена
Эти антигены могут быть белками, пептидами или другими молекулами. Разработка иммуногенов требует комплексного подхода, объединяющего знания структуры антигенов, иммунологии и систем доставки. Alpha Lifetech располагает технологией разработки антигенов, позволяющей создавать иммуногены для нуждающихся клиентов.
Компания Alpha Lifetech предлагает клиентам широкий выбор рекомбинантных белковых продуктов. Мы располагаем различными системами экспрессии белков, такими как система экспрессии E. coli, система экспрессии дрожжей, система экспрессии бакуловирусов и насекомых, система экспрессии млекопитающих и т. д., для получения рекомбинантных белков, необходимых для ваших исследований.

2. Иммунизация животных
Компания Alpha Lifetech может предоставить клиентам иммуногены, а также на выбор иммунные животные, такие как мыши, кролики, овцы, альпаки, морские свинки, хомяки и т. д.

3.Методы производства моноклональных антител

●Производство моноклональных антител с помощью гибридомной технологии
Гибридома – это гибридная клетка, полученная путем слияния двух типов клеток: линии клеток миеломы мыши и плазматических клеток (лимфоцитов B), при этом гетерозиготная клетка способна продуцировать антитела к интересующему антигену in vitro. Создание гибридомной клеточной линии состоит из трёх этапов: конструирование антигена (гаптены, малые молекулы и пептиды), иммунизация животных, слияние клеток и скрининг положительных клонов. Используя уникальные методики иммунизации, мы добиваемся исключительно высокой эффективности слияния клеток (1–10 гибридом на тысячу B-клеток) и высоких титров антител, что максимально повышает вероятность успеха в последующих аналитических исследованиях, включая биохимический скрининг, in vitro-анализы на клетках и исследования на животных.

●Производство моноклональных антител с помощью технологии фагового дисплея
Фаговый дисплей предлагает другой метод получения моноклональных антител. B-лимфоциты выделяют из крови животных и извлекают их мРНК. С помощью ПЦР эта мРНК преобразуется в кДНК, которая амплифицирует все сегменты VH и VL. Эти сегменты затем клонируются в вектор, как правило, в виде одноцепочечных вариабельных фрагментов (scFv), вместе с белком PIII бактериофага. Впоследствии эта конструкция используется для заражения E. coli, что приводит к созданию библиотеки, содержащей приблизительно 10^10 клеток, путем инокуляции фагом-помощником. После этого E. coli способна секретировать бактериофаг, содержащий сегменты VH и VL в составе своей оболочки. После этого можно выбрать специфические сегменты VH и VL, нацеленные на интересующий антиген, и использовать их для повторной вакцинации E. coli бактериофагом. Клетки, содержащие плазмиду, затем выделяют и секвенируют.

4.Скрининг слияния

●Слияние клеток и отбор
Собранные В-клетки затем сливаются с миеломными клетками — раковыми клетками, способными неограниченно размножаться в культуре. Слияние обычно осуществляется с помощью метода, например, слияния с полиэтиленгликолем (ПЭГ).
После слияния гибридомные клетки культивируют в селективной среде, которая позволяет выживать только гибридомам. Среда обычно содержит аминоптерин, который предотвращает рост неслившихся миеломных клеток.

●Скрининг и клонирование
Полученные гибридомные клетки проверяются на продукцию антител, специфичных к целевому антигену. Для этого обычно используются такие методы, как иммуноферментный анализ (ИФА), вестерн-блоттинг, иммунопреципитация и проточная цитометрия.

После идентификации гибридомных клеток, продуцирующих антитело, их клонируют для создания популяции идентичных клеток. Это гарантирует идентичность антитела, продуцируемого каждой гибридомной клеткой.

5. Проверка функциональности антител
Alpha Lifetech обеспечивает функциональную проверку антител, такую ​​как вестерн-блоттинг, иммуногистохимия или функциональные анализы, для характеристики моноклональных антител и подтверждения специфичности, сродства и функциональности антител.

6.Оптимизация антител
Очистка антител из культурального супернатанта с использованием таких методов, как аффинная хроматография с белком А или белком G, а также Alpha Lifetech могут предоставить методы модификации антител для улучшения аффинности антител.

7.Выработка антител
Alpha Lifetech может проводить оценку антител-кандидатов для высокопроизводительного скрининга и крупномасштабного производства.