Введение в библиотеку наивных антител

Библиотеки наивных антител создаются с использованием B-клеток неиммунизированных или здоровых доноров, обычно фокусируясь на изотипе IgM. Предполагается, что наивные библиотеки могут быть использованы для выделения моноклональных антител к любому антигену.

Наивный репертуар обладает уникальными преимуществами в генерации антител к целевым антигенам. Alpha Lifetech предлагает библиотеки нативных антител (в форматах scFv, Fab, VHH и адаптированные) от животных-хозяев, таких как человек, коза, собака, курица, гусь, свинья, аллигатор, крупный рогатый скот, обезьяна, осёл, лошадь, страус, хомяк, кролик, верблюд и лама. Наша цель — понять и удовлетворить потребности различных клиентов, а также помочь в решении любых возникающих и возникающих проблем в исследовательской работе.

Alpha Lifetech может предоставить

Альфа Лайфтех Инк.можем предложить библиотеки наивных антител от неиммунизированных животных и людей на основе нашей технологии отображения зрелых фагов.Alpha Lifetech Inc.Группа исследований и разработок по поиску антител с гордостью сообщает, что мы можем разработать и создать библиотеку, содержащую 10^8 - 10^10 независимых клонов.

Служба построения библиотеки наивных антител

Наивные библиотеки были созданы путём использования естественного первичного (неселекционированного) иммунного репертуара (неиммунизированных доноров) путём клонирования антител, распознающих различные антигены. Перестроенные гены V были амплифицированы с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) из мРНК B-клеток, кодирующей иммуноглобулин M (IgM), полученной от неиммунизированных доноров. Благодаря этой процедуре антитела были получены до встречи с антигеном и не прошли проверку на толерантность со стороны иммунной системы. Действительно, наивная библиотека представляет собой хороший источник антител против собственных, неиммуногенных и токсичных антигенов, если она достаточно обширна и разнообразна.

Чтобы создать большую библиотеку антител,Альфа Лайфтех Инк.использует эффективную двухэтапную стратегию клонирования для создания фаговых библиотек антител, основанную на выделении рестрикционных фрагментов из плазмидных векторов вместо продуктов ПЦР. При расщеплении ПЦР-продуктов с сайтами рестрикции, определяемыми олигонуклеотидным праймером, эффективность зависит от количества дополнительных нуклеотидов, добавленных к праймеру, но всегда ниже по сравнению с расщеплением плазмидной ДНК. На первом этапе описанной процедуры первичные репертуары готовятся из ПЦР-продуктов, кодирующих домены VH, Vκ и Vλ, что приводит к получению типичных библиотек среднего размера (1–100 миллионов клонов). На втором этапе фрагменты VH выделяются путем расщепления плазмидной ДНК, очищенной из первичных репертуаров, и клонируются в акцепторный фагмидный вектор, содержащий репертуары лёгких цепей (LC). Это нововведение значительно увеличивает размер библиотек (10–100 миллиардов клонов).

Общие процедуры разработки библиотек фагового дисплея наивных антител показаны на рисунке: мы собираем лимфоциты периферической крови (ЛПБ) от неиммунизированных хозяев (человек, различные животные), отделяем интересующий ген антитела, а затем клонируем в интересующий фрагмент гена фагмиды и формируем библиотеку фагового дисплея со специфическим фрагментом антитела.

Почему выбирают нас?