Служба строительства библиотеки Naïve Fab
Внедрение сервиса по созданию библиотек Naïve FabПотрясающе
Технология фагового дисплея — это метод скрининга in vitro, позволяющий выбирать целевые антитела из большой библиотеки антител и отображать их на поверхности бактериофагов. В настоящее время для отображения широко используется система фагового дисплея M13, состоящая из пяти капсидных белков. Основной функцией капсидного белка P Ⅲ является скрининг, а целевой ген может быть вставлен в P Ⅲ, а спектр его применимых векторов также очень широк. В 1985 году была создана технология фагового дисплея как метод изучения эпитопов антигенов. Фаговый дисплей в основном включает в себя вставку экзогенных генов в капсидные белки фага с помощью технологии генной инженерии, так что белок, кодируемый экзогенным геном, может быть отображен в виде белка слияния без изменения его структуры и активности. Затем, с помощью нескольких раундов скрининга, отбираются высокоспецифичные антитела, способные связываться с целевой молекулой. После многих лет разработки технология фагового дисплея нашла применение не только в изучении эпитопов антигенов, но и в таких областях, как передача клеточного сигнала, изучение участков распознавания белков и разработка лекарственных препаратов. Благодаря широкому распространению технологии фагового дисплея многие заболевания диагностируются с помощью этой технологии, которая обладает такими преимуществами, как скорость, относительно низкая стоимость и большая емкость библиотеки. Скрининг пептидов бактериофагов, связывающихся со специфическими антигенами, позволяет разрабатывать новые антитела или улучшать существующие.
Fab-фрагменты, также известные как антигенсвязывающие фрагменты, являются ключевыми областями в структуре антител, способными связываться с антигенами. Fab-фрагменты состоят из частей лёгкой и тяжёлой цепей антитела, соединённых дисульфидными связями. Лёгкая цепь содержит вариабельную область (VL) и константную область (CL), а тяжёлая цепь – вариабельную область (VH) и часть константной области (CH1). VL и VH образуют сайты связывания антигена (CDR) посредством гидрофобных взаимодействий и водородных связей. Молекулярная масса Fab-фрагментов относительно невелика, обычно 47–55 кДа, что обеспечивает им хорошее проникновение в ткани и низкую иммуногенность. Fab-фрагменты сохраняют полную способность связываться с антигенами и могут связываться со специфическими антигенами с высокой аффинностью. Благодаря отсутствию Fc-сегментов во Fab-фрагментах иммунные реакции, опосредованные Fc-сегментами, не запускаются, а также снижается вероятность реакций гиперчувствительности. Меньшая молекулярная масса позволяет Fab-фрагментам легче проникать через тканевые барьеры и достигать целевых участков. Период полураспада Fab-фрагментов in vivo относительно короткий, что способствует снижению потенциальных побочных эффектов лекарственных препаратов. Производство Fab-антител может быть достигнуто с помощью ферментативного гидролиза, методов генной инженерии и технологии фагового дисплея.
Наивная Fab-библиотека, также известная как естественная Fab-библиотека, представляет собой тип библиотеки антител в технологии фагового дисплея. Наивные библиотеки были созданы путём клонирования фрагментов генов антител из природных, неиммунизированных B-лимфоцитов, в основном фрагментов VH-CH и VL-CL, которые связаны дисульфидными связями с образованием Fab-фрагментов. Наивные библиотеки содержат большое количество последовательностей антител, не подвергавшихся воздействию антигенов и не проверявшихся иммунной системой, что обеспечивает их широкий антигенсвязывающий потенциал и разнообразие.
Alpha Lifetech может предоставить
Компания Alpha Lifetech обладает обширным опытом в разработке антител для фагового дисплея. Наша платформа фагового дисплея хорошо зарекомендовала себя, и мы можем использовать её для различных типов фагов. Платформа фагов M13 является наиболее широко используемой для фагового дисплея. Она также широко применяется во многих областях исследований. Существует множество сервисов фагового дисплея, доступных через системы фагов T4 и T7, которые могут предложить различные перспективные решения в зависимости от их конкретных характеристик.
Компания Alpha Lifetech обладает многолетним опытом в области антител и создала комплексную платформу для разработки антител, охватывающую поиск моноклональных антител, разработку поликлональных антител, разработку рекомбинантных моноклональных антител, а также различные услуги по подготовке и разработке антител. Используя различные технологии и платформы для подготовки антител, Alpha Lifetech предоставляет индивидуальные услуги по созданию моноклональных и поликлональных антител различных видов. Помимо производства FAB-антител, мы также предлагаем ряд услуг по очистке FAB-антител, секвенированию антител, валидации антител и другие. Мы предлагаем нашим клиентам продукты и услуги по производству антител и рекомбинантных белков гарантированного качества. Мы можем получать антитела с высокой эффективностью, высокой специфичностью и хорошей стабильностью. Alpha Lifetech располагает разнообразным оборудованием и инструментами для очистки FAB-антител, что позволяет нам предоставлять услуги по очистке антител из различных источников, таких как моноклональные антитела кролика, овцы, курицы и мыши, а также услуги по аффинной очистке белков A/G и разделению и очистке антител. Мы выбираем метод очистки в зависимости от конкретных целей клиента. На основе комплексной системной платформы, состоящей из платформы антител, платформы белков и т. д., мы охватываем все этапы производства FAB-антител, а также предоставляем технические услуги по получению антител, очистке антител, разделению и очистке антител, секвенированию антител, валидации антител и т. д.
Служба построения библиотеки антител Naive Fab
B-лимфоциты выделяют из периферической крови животных, не прошедших иммунизацию, и поскольку эти B-лимфоциты не иммунизированы, последовательности генов антител, которые они содержат, разнообразны. Фрагменты генов, кодирующих антитела VH-CH и VL-CL, были амплифицированы из B-лимфоцитов с помощью ПЦР, и эти фрагменты генов содержат вариабельные области антител. Амплифицированный фрагмент гена антитела сливается с геном капсидного белка фага, экспрессируется и экспонируется на поверхности фага. Каждый бактериофаг может нести специфическую последовательность антитела и может быть широко амплифицирован и скринингован in vitro, что приводит к созданию библиотеки антител, содержащей большое количество различных последовательностей антител.
Рабочий процесс создания библиотеки антител Naive Fab
| Шаги | Спецификация | Хронология |
| Шаг 1: Извлечение В-клеток | Создание разнообразного пула В-клеток, собранных из крови животных. | 1 день |
|
| Шаг 2: Выделение РНК | РНК извлекается из этих В-клеток, при этом особое внимание уделяется мРНК | 1 день
|
| Шаг 3: синтез кДНК | Используя обратную транскрипцию, мРНК преобразуется в комплементарную ДНК (кДНК)
| 1 день
|
| Шаг 4: Амплификация вариабельных участков | Затем вариабельные области тяжелой (VH) и легкой (VL) цепей антитела амплифицируются с помощью ПЦР. | 1 день
|
| Шаг 5: Создание библиотеки Fab-антител | Области VH и VL связаны с константными областями, образуя фрагменты Fab. | 2 дня
|
| Шаг 6: Клонирование библиотеки Fab-антител | Фрагменты Fab клонируются в векторы фагового дисплея | 3 дня
|
| Шаг 7: Фаговый дисплей | Библиотека Fab отображается на поверхности бактериофагов, затем проводится высокопроизводительный скрининг. | 1 неделя
|
2018-07-16 
