Служба строительства библиотеки Naïve Fab
Введение в услугу строительства библиотеки Naïve FabПотрясающе
Технология фагового дисплея — это метод скрининга in vitro, который позволяет выбирать целевые антитела из большой библиотеки антител и отображать их на поверхности бактериофагов. В настоящее время для отображения широко используется система фагового дисплея M13, состоящая из пяти капсидных белков. Основной функцией капсидного белка P Ⅲ является скрининг, а целевой ген может быть вставлен в P Ⅲ, а диапазон его применимых векторов также очень широк. В 1985 году была создана технология фагового дисплея как метод изучения эпитопов антигенов. Фаговый дисплей в основном включает в себя вставку экзогенных генов в капсидные белки фага с помощью технологии генной инженерии, так что белок, кодируемый экзогенным геном, может быть отображен как слитый белок без изменения его структуры и активности. Затем, посредством нескольких раундов скрининга, отбираются высокоспецифичные антитела, которые могут связываться с целевой молекулой. После многих лет разработки технология фагового дисплея нашла применение не только в изучении эпитопов антигенов, но и в таких областях, как трансдукция клеточного сигнала, сайты распознавания белков и разработка лекарств. Благодаря широкому использованию технологии фагового дисплея многие заболевания идентифицируются с помощью технологии фагового дисплея, которая имеет такие преимущества, как скорость, относительно низкая стоимость и большая емкость библиотеки. Путем скрининга пептидов бактериофагов, которые связываются со специфическими антигенами, можно разрабатывать новые антитела или улучшать существующие антитела.
Фрагменты Fab, также известные как антигенсвязывающие фрагменты, являются ключевыми областями в структурах антител, которые могут связываться с антигенами. Фрагменты Fab состоят из части легкой и тяжелой цепей антитела, которые соединены дисульфидными связями. Легкая цепь содержит вариабельную область (VL) и константную область (CL), в то время как тяжелая цепь содержит вариабельную область (VH) и часть константной области (CH1). VL и VH образуют сайты связывания антигена (CDR) посредством гидрофобных взаимодействий и водородных связей. Молекулярная масса фрагментов Fab относительно мала, обычно между 47-55 кДа, что обеспечивает им хорошее проникновение в ткани и низкую иммуногенность. Фрагменты Fab сохраняют свою полную способность связывать антиген и могут связываться со специфическими антигенами с высокой аффинностью. Из-за отсутствия сегментов Fc во фрагментах Fab иммунные реакции, опосредованные сегментами Fc, не запускаются, а также снижается вероятность реакций гиперчувствительности. Меньший молекулярный вес позволяет фрагментам Fab легче проникать через тканевые барьеры и достигать целевых участков. Период полураспада фрагментов Fab in vivo относительно короткий, что помогает снизить потенциальные побочные эффекты лекарств. Производство антител Fab может быть достигнуто с помощью ферментативного гидролиза, методов генной инженерии и технологии фагового дисплея.
Библиотека наивных Fab, также известная как библиотека естественных Fab, представляет собой тип библиотеки антител в технологии фагового дисплея. Библиотеки наивных антител были созданы путем клонирования фрагментов генов антител из природных, неиммунизированных В-лимфоцитов, в основном фрагментов VH-CH и VL-CL, которые связаны между собой дисульфидными связями для формирования фрагментов Fab. Библиотеки наивных антител содержат большое количество последовательностей антител, которые не подвергались воздействию антигенов или не проверялись иммунной системой, таким образом, обладая широким потенциалом связывания антигенов и разнообразием.
Alpha Lifetech может предоставить
Alpha Lifetech имеет большой опыт в обнаружении антител с помощью фагового дисплея. Наша платформа фагового дисплея хорошо зарекомендовала себя, и мы смогли использовать ее для различных типов фагов. Платформа фагов M13 является наиболее широко используемой для фагового дисплея. Она также широко используется во многих областях исследований. Существует множество услуг фагового дисплея, доступных через систему фагов T4 и T7, которые могут предлагать различные многообещающие варианты в зависимости от их конкретных достоинств.
Alpha Lifetech имеет многолетний опыт в области антител и создала комплексную платформу для обнаружения антител, начиная от обнаружения моноклональных антител, разработки поликлональных антител, разработки рекомбинантных моноклональных антител до различных типов услуг по подготовке и разработке антител. На основе различных технологий и платформ для подготовки антител Alpha Lifetech предоставляет индивидуальные услуги для моноклональных и поликлональных антител разных видов. В дополнение к производству FAB-антител мы также можем предоставить ряд услуг по очистке FAB-антител, секвенированию антител, валидации антител и других услуг. Мы можем предоставить нашим клиентам продукты и услуги по гарантированному качеству антител и рекомбинантных белков. Мы можем подготовить антитела с высокой эффективностью, сильной специфичностью и хорошей стабильностью. Alpha Lifetech имеет различные инструменты и оборудование для очистки FAB-антител, которые могут предоставлять услуги по очистке антител из различных источников, таких как моноклональные антитела кролика, овцы, курицы и мыши, а также услуги по аффинной очистке белков A/G и услуги по разделению и очистке антител. И мы выберем метод очистки на основе конкретной цели клиента. На основе комплексной системной конструкции платформы антител, белковой платформы и т. д. мы охватываем услуги по восходящей и нисходящей цепочке производства FAB-антител и можем предоставить технические услуги по подготовке антител, очистке антител, разделению и очистке антител, секвенированию антител, валидации антител и т. д.
Служба построения библиотеки антител Naive Fab
В-лимфоциты выделяют из периферической крови животных, которые не были иммунизированы, и поскольку эти В-лимфоциты не иммунизированы, последовательности генов антител, которые они содержат, разнообразны. Фрагменты генов, кодирующие антитела VH-CH и VL-CL, были амплифицированы из В-лимфоцитов с помощью ПЦР, и эти фрагменты генов содержат вариабельные области антител. Амплифицированный фрагмент гена антитела сливается с геном капсидного белка фага, экспрессируется и отображается на поверхности фага. Каждый бактериофаг может нести специфическую последовательность антитела и может быть широко амплифицирован и подвергнут скринингу in vitro, в результате чего получается конструкция библиотеки антител, содержащая большое количество различных последовательностей антител.
Рабочий процесс создания библиотеки антител Naive Fab
| Шаги | Спецификация | Хронология |
| Шаг 1: Извлечение В-клеток | Создание разнообразного пула В-клеток, собранных из крови животных | 1 день |
|
| Шаг 2: Выделение РНК | Из этих В-клеток извлекается РНК, при этом особое внимание уделяется мРНК | 1 день
|
| Шаг 3: Синтез кДНК | Используя обратную транскрипцию, мРНК преобразуется в комплементарную ДНК (кДНК)
| 1 день
|
| Шаг 4: Амплификация вариабельных участков | Затем вариабельные области тяжелой (VH) и легкой (VL) цепей антитела амплифицируются с помощью ПЦР. | 1 день
|
| Шаг 5: Создание библиотеки Fab-антител | Области VH и VL связаны с константными областями, образуя фрагменты Fab. | 2 дня
|
| Шаг 6: Клонирование библиотеки Fab-антител | Фрагменты Fab клонируются в векторы фагового дисплея | 3 дня
|
| Шаг 7: Фаговый дисплей | Библиотека Fab отображается на поверхности бактериофагов, затем проводится высокопроизводительный скрининг | 1 неделя
|
2018-07-16 
