По мере углубления исследований были выявлены некоторые потенциальные иммунные контрольные точки, такие как ген активации лимфоцитов 3 (LAG-3) (моноклональное антитело против LAG-3 или в сочетании с терапией против PD-1), рецептор-ингибитор киллер (KIR) (отдельно или в сочетании с терапией против PD-1 или против CTLA-4), B7-H3, иммуноглобулин Т-клеток и муцин-3 (TIM-3), домен иммуноглобулина Т-клеток и иммунного тирозинового ингибиторного мотива (ITIM) (TIGIT), а также другие препараты, связанные с иммунными контрольными точками, которые также изучаются, расширяя пути лечения рака.

Цитотоксическая Т-клетка, также известная как CD8+ Т-клетка, представляет собой Т-клеточный рецептор (ТКР), способный уничтожать раковые клетки, клетки, инфицированные вирусами, бактериями или другими видами повреждений. Она распознаёт специфические антигены. Антигены внутри клетки связываются с молекулами MHCI и переносятся на поверхность клетки для распознавания Т-клетками. Если ТКР специфичен к антигену, он связывается с комплексом, и Т-клетки уничтожают клетку. Если антиген внутри клетки связывается с молекулами MHC II класса, то это CD4+ Т-клетка.

Рис. 1: Презентация антигена стимулирует Т-клетки к превращению либо в «цитотоксические» клетки CD8+, либо в «вспомогательные» клетки CD4+.

Программируемый белок клеточной смерти 1 (PD-1), кодируемый геном PDCD1, является рецептором клеточной поверхности на Т- и В-клетках. PD-1 является иммунной контрольной точкой, которая регулирует активность Т-клеток, стимулируя антигенспецифический апоптоз Т-клеток в лимфатических узлах и ингибируя апоптоз регуляторных Т-клеток. Экспрессия PD-L1 на опухолевых клетках ингибирует противоопухолевую активность путем связывания с PD-1 на эффекторных Т-клетках, индуцируя апоптоз клеток и ослабляя иммунный ответ хозяина на опухолевые клетки, тем самым стимулируя рост опухолевых клеток и вызывая уклонения опухолевых клеток от иммунного ответа. Антигенпрезентирующие клетки (АПК) представляют опухолевые антигены Т-клеточным рецепторам (ТКР) через главный комплекс гистосовместимости (ГКГ). Специфическое связывание комплекса антигенов MHC с TCR запускает ряд сигнальных путей, включая фосфатидилинозитоловую сигнализацию, сигнальные пути митоген-активируемой протеинкиназы и т.д., тем самым активируя иммунный ответ эффекторных Т-клеток. После связывания PD-L1 с PD-1 цитоплазматическая область PD-1 подвергается фосфорилированию, активируя SHP2. Впоследствии SHP-2 опосредует дефосфорилирование сигнальных тел CD3 и ZAP70, ассоциированных с TCR, одновременно подавляя сигналы стимуляции CD28, ослабляя интенсивность сигнала TCR и секрецию цитокинов (таких как ИЛ-2), что в конечном итоге приводит к подавлению функции Т-клеток.

Рис. 2: Механизм иммунорегуляции PD-1/PD-L1. (Источник: Лин, С., Канг, К., Чен, П. и др. Механизмы регуляции PD-1/PD-L1 при раке. Mol Cancer 23, 108 (2024). https://doi.org/10.1186/s12943-024-02023-w)

CD47 (CD47-дифференцировочный кластер 47), также известный как интегрин-ассоциированный белок (IAP), участвует в серии клеточных процессов, включая апоптоз, пролиферацию, адгезию и миграцию. Активация и развитие аксонов Т-клеток и дендритных клеток (DC), связывание CD47 с его рецепторным сигнальным регуляторным белком альфа (SIRP альфа) и снижение фагоцитоза опухолевых клеток, антитела к CD47 могут способствовать гибели опухолевых клеток посредством различных механизмов. Во-первых, моноклональные антитела к CD47 могут ингибировать взаимодействие между CD47 и SIRP альфа, что может привести к фагоцитозу опухолевых клеток макрофагами (антитела к SIRP альфа также могут ингибировать этот путь), уменьшая иммунный ответ. Во-вторых, они могут элиминировать опухолевые клетки посредством антителозависимой цитотоксичности, опосредованной NK-клетками (ADCC), и комплементзависимой цитотоксичности (CDC). В-третьих, они могут напрямую вызывать апоптоз опухолевых клеток и, в конечном итоге, представлять антигены Т-клеткам CD4+ и CD8+, тем самым стимулируя противоопухолевый адаптивный иммунный ответ.

Рис. 3: Терапевтическое воздействие на путь CD47-SIRPα может привести к уничтожению раковых клеток посредством нескольких механизмов. (Источник: Чао М.П., ​​Вайсман И.Л., Маджети Р. Путь CD47-SIRPα в уклонении раковых клеток от иммунного ответа и потенциальные терапевтические последствия. )

Автор инокулировал линии опухолевых клеток (отобранные линии AT3-OVA, способные экспрессировать высокие уровни CD47 и PD-L1) мышам, вводил им определённое количество биспецифических антител (CD47 × PD-L1) с определёнными интервалами и добавлял соответствующие контрольные группы. В экспериментах с Т-клетками CD8+ для наблюдения использовали антитела к CD8a. Через некоторое время Т-клетки выделяли из тканей и тел мышей, и готовили суспензии отдельных клеток для анализа методом проточной цитометрии. Полученные данные подвергали статистической обработке, а скорость ингибирования роста опухоли оценивали путём расчёта среднего объёмного значения.

На рис. 4а показаны экспериментальная и контрольная группы: мышам, получившим опухоли AT3-OVA, вводили CD47 × PD-L1 BisAb и изотипический контроль. На рис. 4b (изменения в процессе) и c (презентация результатов) показано, что объем опухоли значительно уменьшился по сравнению с введением антител изотипического контроля. На рис. 4d и e представлены макрофаги, моноциты и нейтрофилы в селезенке и опухоли соответственно, количество которых увеличилось после эксперимента. На рис. 4f и g представлены CD44 hi CD4+ T-клетки в селезенке и опухоли. Количество CD44 hi CD8+ T-клеток и SIINFEKL+ CD8+ T-клеток в некоторых случаях значительно увеличилось, а в других случаях не изменилось.

Рис. 4: Терапия CD47 × PD‐L1 BisAb снижает опухолевую нагрузку и вызывает расширение CD8+ T-клеток.

Рис. 5a. Инокуляция мышей экспериментальной и контрольной групп антителами к истощению CD8. На рис. 5b показано количество CD44 hi CD8+ T-клеток в селезенке и опухоли. Видно, что количество CD44 hi CD8+ T-клеток резко снижается или даже отсутствует. Объем опухоли на рис. 5c увеличивается со временем. Конечный объем опухоли на рис. 5d увеличивается по сравнению с другими контрольными группами. Видно, что CD8+ T-клетки играют прямую роль в регрессии опухоли рака молочной железы, а механизм контроля опухоли, опосредованный CD47 × PD-L1 BisAb, регулируется CD8+ T-клетками.

Рис. 5: Терапия CD47 × PD‐L1 BisAb снижает опухолевую нагрузку и вызывает расширение CD8+ T-клеток.

Компания Alpha Lifetech предлагает биоаналогичные антитела к CD47 и PD-L1 соответственно, как показано в таблице ниже. Мы также предлагаем услуги по разработке биоаналогичных антител и биспецифических антител для ускорения исследований наших клиентов и предоставления им индивидуальных услуг.

Вкладка 2: Список биоаналогичных антител.