Платформа для разработки антител с фаговым дисплеем

На основе комплексной платформенной системы антител Alpha Lifetech может предоставлять технические услуги по подготовке антител, очистке антител, секвенированию антител и т. д.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Платформа для разработки антител с фаговым дисплеем

Компания Alpha Lifetech, обладающая обширным опытом в области разработки проектов в области антител, может предоставлять индивидуальные услуги по созданию моноклональных и поликлональных антител для различных видов животных, а также услуги по созданию и скринингу библиотек антител. Alpha Lifetech предлагает клиентам высококачественные антитела и рекомбинантные антитела, а также сопутствующие услуги по получению эффективных, высокоспецифичных и стабильных антител. Используя комплексные платформы для разработки антител и технологии их инженерии, мы предоставляем услуги, охватывающие весь процесс производства антител, включая такие технические услуги, как получение, очистка, секвенирование и валидация антител.

Alpha Lifetech располагает развитой платформой для поиска антител, которая предоставляет клиентам ряд услуг, включая иммунологическую экспертизу животных, создание и скрининг библиотеки антител с использованием фагового дисплея, секвенирование антител, экспрессию антител, очистку антител, валидацию антител и маркировку антител на основе гибридомной технологии, технологию отдельных В-клеток, технологию фагового дисплея и многое другое. Alpha Lifetech располагает стандартной производственной линией и, помимо услуг по подготовке антител, может предоставлять вспомогательные услуги, такие как гуманизация антител, созревание аффинности антител, проектирование и разработка препаратов ADC, а также последующее проектирование последовательности CAR-T. Кроме того, Alpha Lifetech создала библиотеку антител на основе платформ технологии фагового дисплея M13, T4 и T7 с емкостью хранения до 10^8-10^9. Положительный результат, скорость вставки и разнообразие библиотеки могут достигать более 90%.

Технология фагового дисплея

Производство моноклональных антител изначально осуществлялось с использованием технологии гибридомных моноклональных антител для получения мышиных гибридомных моноклональных антител. В частности, путем слияния клеток селезенки иммунизированных мышей с клетками миеломы человека или мыши образуются гибридомные клетки, которые секретируют специфические гибридомные моноклональные антитела. Путем гуманизированной модификации мышиных моноклональных антител и генно-инженерной модификации антител с целью придания им постоянного участка иммуноглобулина человека можно снизить их иммуногенность. Методы конструирования моноклональных антител широко используются в биомедицинских и клинических приложениях.

Alpha Lifetech предоставляет комплексные услуги по разработке антител, от разработки протокола доклинических исследований до открытия конъюгатов антитело-лекарство (ADC) и их валидации на животных. Конъюгаты антитело-лекарство (ADC) могут доставлять химиотерапевтические препараты к раковым клеткам. После связывания со специфическими мишенями, экспрессируемыми на поверхности раковых клеток, ADC высвобождает цитотоксические препараты в раковые клетки. Alpha Lifetech также предоставляет клиентам комплексные услуги по созреванию аффинности антител. Благодаря передовой оптимизации мутаций и высокопроизводительной технологии скрининга фагового дисплея сначала проводится скрининг антител с определенной аффинностью, а затем вводятся аминокислотные мутации для получения различных вариантов. Впоследствии антитела с высокой аффинностью были оценены и скринингованы с использованием методов скрининга. После нескольких раундов оптимизации и структурного анализа были получены антитела с более высокой аффинностью и более высокой специфичностью.

Компания Alpha Lifetech может создавать различные типы библиотек фагового дисплея антител, включая иммунные библиотеки, нативные библиотеки, полусинтетические библиотеки и синтетические библиотеки. Высокая ёмкость библиотек антител позволяет получать высокоспецифичные антитела. Компания может предоставить множество фагмидных векторов, таких как pMECS, pComb3X и pCANTAB 5E, а также штаммы E. coli TG1, XL1 Blue и ER2738. Помимо ёмкости библиотеки до 10^9, скорость вставки целевых фрагментов в библиотеку также высока, что создаёт достаточные условия для скрининга антител, удовлетворяющего требованиям клиентов. Блок-схема услуг Alpha Lifetech по подготовке антител на основе технологии фагового дисплея представлена на рисунке 1.

Рис.1 Схема процесса получения моноклональных антител на основе технологии фагового дисплея.

Рабочий процесс производства антител с помощью фагового дисплея

Шаги	Содержание услуги	Хронология
Шаг 1: Иммунизация животных	(1) Животное вакцинировано 4 раза, ревакцинировано 1 дозой, всего вакцинировано 5 дозами. (2) Перед иммунизацией была собрана отрицательная сыворотка, и был проведен ИФА на четвертой дозе для определения титра сыворотки. (3) Если титр сывороточных антител после четвёртой дозы соответствует требованиям, за 7 дней до забора крови вводится одна дополнительная доза вакцины. Если титр не соответствует требованиям, плановая иммунизация продолжается. (4) Квалифицированная потенция, сбор крови и разделение моноцитов	10 недель
Шаг 2: Подготовка кДНК	(1) Извлечение тотальной РНК из PBMC (набор для извлечения РНК) (2) Высокоточная подготовка кДНК методом ОТ-ПЦР (набор для обратной транскрипции)	1 день
Шаг 3: Создание библиотеки антител	(1) Используя кДНК в качестве матрицы, гены были амплифицированы с помощью двух раундов ПЦР. (2) Конструирование и трансформация фага: вектор фагмиды для сплайсинга генов, электропорационная трансформация бактерий-хозяев TG1, конструирование библиотеки антител. (3) Идентификация: случайным образом выбирают 24 клона, положительный результат ПЦР-идентификации + показатель вставки. (4) Вспомогательная подготовка фага: амплификация фага М13 + очистка. (5) Спасение библиотеки фагового дисплея	3-4 недели
Шаг 4: Скрининг библиотеки антител (3 раунда)	(1) Стандартный трехраундовый скрининг (твердофазный скрининг): скрининг под давлением для максимально возможного удаления неспецифических антител. (2) Амплификация одного клона отобранного бактериофага + экспрессия, индуцированная IPTG + ИФА-детекция положительных клонов. (3) Все положительные клоны были отобраны для секвенирования генов.	4-5 недель

Преимущество технологии фагового дисплея

Компания Alpha Lifetech обладает богатым опытом в области разработки антител. За годы работы Alpha Lifetech создала комплексную платформу для разработки антител.

Службы поддержки

Мы можем предоставить различные услуги по созданию библиотек иммунных антител на основе животных и услуги по скринингу библиотек природных антител в соответствии с потребностями клиентов.

Множественная цель

Доступны услуги по обнаружению антител к нескольким целевым объектам: белкам, пептидам, малым молекулам, вирусам, мембранным белкам, мРНК и т. д.

Множественные векторы

Персонализированная услуга по созданию библиотеки: мы можем предоставить различные векторы бактериофагов, включая PMECS, pComb3X и pCANTAB 5E, и модифицировать их в соответствии с потребностями клиента.

Зрелая платформа

Емкость хранилища может достигать 10^8–10^9, скорость вставки превышает 90%, а аффинность антител, полученных в результате скрининга, обычно находится на уровне нМ-пМ.

Связанные УСЛУГИ

Стратегии разработки множественных антител

Служба разработки моноклональных антител

Гибридомная технологическая платформа

Платформа сортировки отдельных В-клеток

Платформа для разработки антител с фаговым дисплеем

Разработка моноклональных антител – Alpha Lifetech

Служба разработки моноклональных антител

Мы можем предоставить услуги по разработке высококачественных, высокочистых и высокоспецифичных моноклональных антител, включая производство мышиных моноклональных антител и кроличьих моноклональных антител.

Гибридомная технологическая платформа

Включая программу иммунизации, услуги по подготовке антител, очистку антител, высокопроизводительное секвенирование антител, валидацию антител и т. д.

Платформа сортировки отдельных В-клеток

Компания Alpha Lifetech обладает преимуществами в плане времени скрининга и получения высококачественных антител. Компания предлагает услуги по разработке, синтезу и модификации антигенов, иммуноферментному анализу животных, скринингу с обогащением отдельных В-клеток и секвенированию отдельных клеток.