Платформа для разработки антител на основе фагового дисплея

Основываясь на комплексной платформенной системе, созданной на основе антител, компания Alpha Lifetech может предоставлять технические услуги, начиная от подготовки антител, их очистки, секвенирования и т.д.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Платформа для разработки антител на основе фагового дисплея

Компания Alpha Lifetech, обладающая обширным опытом работы над проектами в области разработки антител, может предоставлять услуги по созданию моноклональных и поликлональных антител для различных видов животных, а также услуги по созданию и скринингу библиотек антител. Alpha Lifetech может обеспечить клиентов качественными антителами и рекомбинантными антителами, а также соответствующими услугами для получения эффективных, высокоспецифичных и стабильных антител. Используя комплексные платформы для разработки антител и методы инженерии антител, мы предоставляем услуги, охватывающие все этапы производства антител, включая такие технические услуги, как подготовка, очистка, секвенирование и валидация антител.

Компания Alpha Lifetech располагает развитой платформой для разработки антител, предоставляющей клиентам широкий спектр услуг, включая иммунитет животных, создание и скрининг библиотек антител на основе фагового дисплея, секвенирование антител, экспрессию антител, очистку антител, валидацию антител и мечение антител на основе гибридомных технологий, технологий отдельных B-клеток, фагового дисплея и многого другого. Alpha Lifetech имеет стандартную производственную линию, и помимо услуг по подготовке антител, предоставляются также вспомогательные услуги, такие как гуманизация антител, созревание аффинности антител, разработка и создание лекарственных препаратов ADC, а также последующая разработка последовательности CAR-T. Одновременно Alpha Lifetech создала библиотеку антител на основе фаговых дисплеев M13, T4 и T7 с емкостью хранения до 10^8-10^9. Положительная реакция, частота вставки и разнообразие библиотеки могут достигать более 90%.

Технология фагового дисплея

Производство моноклональных антител первоначально осуществлялось с использованием технологии гибридомных моноклональных антител для получения мышиных гибридомных моноклональных антител. В частности, путем слияния клеток селезенки иммунизированных мышей с миеломными клетками человека или мыши образуются гибридомные клетки, которые секретируют специфические гибридомные моноклональные антитела. Благодаря гуманизированной модификации мышиных моноклональных антител и генетической модификации антител для придания им постоянного участка человеческого иммуноглобулина, их иммуногенность может быть снижена. Инженерия моноклональных антител широко используется в биомедицинских и клинических приложениях.

Компания Alpha Lifetech предоставляет комплексные услуги по разработке антител, начиная от проектирования протоколов доклинических исследований и заканчивая созданием конъюгатов антител с лекарственными препаратами (ADC) и их валидацией на животных. Конъюгаты антител с лекарственными препаратами (ADC) позволяют доставлять химиотерапевтические препараты к раковым клеткам. После связывания со специфическими мишенями, экспрессируемыми на раковых клетках, ADC высвобождает цитотоксические препараты в раковые клетки. Alpha Lifetech также предоставляет клиентам комплексные услуги по повышению аффинности антител. С помощью передовой технологии оптимизации мутаций и высокопроизводительного скрининга с использованием фагового дисплея сначала проводится скрининг антител с определенной аффинностью, а затем вводятся аминокислотные мутации для создания разнообразных вариантов. Впоследствии высокоаффинные антитела оцениваются и скринингуются с использованием методов скрининга. После нескольких раундов оптимизации и структурного анализа в конечном итоге были получены антитела с более высокой аффинностью и более сильной специфичностью.

Компания Alpha Lifetech может создавать различные типы библиотек антител на основе фагового дисплея, включая иммунные библиотеки, нативные библиотеки, полусинтетические библиотеки и синтетические библиотеки. Благодаря высокой емкости библиотек антител можно получать высокоспецифичные антитела. В качестве векторов могут использоваться фагемиды, такие как pMECS, pComb3X и pCANTAB 5E, а также штаммы, например, TG1 E. coli, XL1 Blue и ER2738. Помимо емкости библиотеки до 10^9, высока и скорость вставки целевых фрагментов, что создает достаточные условия для скрининга антител, удовлетворяющих требованиям заказчиков. Блок-схема услуги Alpha Lifetech по подготовке антител на основе технологии фагового дисплея представлена на рисунке 1.

Рис. 1. Схема процесса получения моноклональных антител на основе технологии фагового дисплея.

Технологический процесс производства антител методом фагового дисплея

Шаги	Содержание сервиса	Хронология
Шаг 1: Иммунизация животных	(1) Вакцинация животных 4 раза, бустерная вакцинация 1 дозой, всего 5 доз вакцины. (2) Была собрана отрицательная сыворотка до иммунизации, и на четвертой дозе был проведен ИФА для определения титра сыворотки. (3) Если титр антител в сыворотке после четвертой дозы соответствует требованиям, за 7 дней до забора крови будет введена еще одна доза иммунизации. Если он не соответствует требованиям, плановая иммунизация будет продолжена. (4) Квалифицированная активность, сбор крови и выделение моноцитов	10 недель
Шаг 2: Подготовка кДНК	(1) Выделение общей РНК из PBMC (набор для выделения РНК) (2) Высокоточная ОТ-ПЦР подготовка кДНК (набор для обратной транскрипции)	1 день
Шаг 3: Создание библиотеки антител	(1) Используя кДНК в качестве матрицы, гены были амплифицированы в два раунда ПЦР. (2) Конструирование и трансформация фагов: фагемидный вектор для сплайсинга генов, электропорационная трансформация бактерий-хозяев TG1, создание библиотеки антител. (3) Идентификация: Случайный выбор 24 клонов, процент положительных результатов ПЦР-идентификации + процент вставки. (4) Вспомогательная подготовка фага: амплификация фага M13 + очистка. (5) Спасение библиотеки фагового дисплея	3-4 недели
Шаг 4: Скрининг библиотеки антител (3 раунда)	(1) Стандартный 3-этапный скрининг (твердофазный скрининг): скрининг под давлением для удаления неспецифических антител в максимально возможной степени. (2) Амплификация одного клона с отбором бактериофагов + экспрессия, индуцированная IPTG + обнаружение положительных клонов методом ELISA. (3) Все положительные клоны были отобраны для секвенирования генов.	4-5 недель

Преимущества технологии фагового дисплея

Компания Alpha Lifetech обладает богатым опытом в области разработки антител. За годы работы Alpha Lifetech создала комплексную платформу для разработки антител.

Службы поддержки

Мы можем предоставить различные услуги по созданию иммунных библиотек на основе животных и услуги по скринингу библиотек природных антител в соответствии с потребностями заказчика.

Множественная цель

Доступны услуги по поиску антител, нацеленных на различные мишени: белки, пептиды, малые молекулы, вирусы, мембранные белки, мРНК и т. д.

Множественные векторы

Мы предоставляем услуги по созданию библиотек на заказ, включая различные бактериофаговые векторы PMECS, pComb3X и pCANTAB 5E, и можем модифицировать их в соответствии с потребностями заказчика.

Зрелая платформа

Емкость хранилища может достигать 10⁸-10⁹, процент внедрения превышает 90%, а аффинность антител, полученных в результате скрининга, обычно находится на уровне нМ/пМ.

Сопутствующая услуга

Множественные стратегии разработки антител

Услуги по разработке моноклональных антител

Технологическая платформа гибридом

Платформа для сортировки отдельных B-клеток

Платформа для разработки антител на основе фагового дисплея

Разработка моноклональных антител - Alpha Lifetech

Услуги по разработке моноклональных антител

Мы предоставляем высококачественные, высокочистые и высокоспецифичные услуги по разработке моноклональных антител, включая производство мышиных и кроличьих моноклональных антител.

Технологическая платформа гибридом

Включая программу иммунизации, услуги по подготовке антител, очистку антител, высокопроизводительное секвенирование антител, валидацию антител и т. д.

Платформа для сортировки отдельных B-клеток

Компания Alpha Lifetech обладает преимуществами в скорости скрининга и получении высококачественных антител. Она может предложить разработку, синтез и модификацию антигенов, исследования иммунитета животных, скрининг с обогащением отдельных B-клеток, а также секвенирование отдельных клеток.