Услуги по созданию библиотек фаговых дисплеев

Компания Alpha Lifetech располагает комплексной платформой для фагового дисплея M13/T7, обеспечивающей создание и производство библиотек антител. Мы также можем предоставить индивидуальные услуги, такие как производство scFv-антител, в соответствии с вашими потребностями.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Услуги по созданию библиотек фаговых дисплеев

Компания Alpha Lifetech много лет занимается разработкой технологии фагового дисплея. Она создала идеальную стабильную платформу для фагового дисплея, которая экономит время на научных исследованиях или проектах, а также упрощает последующее производство. Alpha Lifetech также предоставляет клиентам такие услуги, как производство антител vhh, антител scFv и антител Fab.

Компания Alpha Lifetech располагает комплексной платформой фагового дисплея M13/T7, обеспечивающей создание и производство библиотек антител. Мы также можем предоставить индивидуальные услуги, такие как производство scFv-антител и высокопроизводительный скрининг антител, в соответствии с вашими потребностями.

Введение в фаговый дисплей

Технология фагового дисплея — это метод, использующий фаги (вирусы, инфицирующие бактерии) для поиска функциональных связывающих молекул специфических белков или пептидов. Методы создания библиотек фаговых антител включают создание библиотек Fab-антител, библиотек scFv-антител, библиотек наноантител и т. д. В зависимости от типа бактериофагов их можно разделить на системы M13, T7, T4, λ и другие. В зависимости от типа библиотеки, она может быть разделена на библиотеки случайных пептидов, кДНК-библиотеки, библиотеки антител и белковые библиотеки. Технология фагового дисплея проста в эксплуатации и недорога в использовании. Однако этот метод ограничивает разнообразие молекулярной генетики в библиотеке, поскольку не может экспрессировать слишком длинные последовательности.

В настоящее время технология фагового дисплея широко используется. Среди достижений можно отметить разработку новых вакцин (недорогих и эффективных синтетических вакцин), разработку лекарственных препаратов на основе антител (скрининг ингибиторов ферментов), клеточную сигнальную трансдукцию (скрининг моделируемых эпитопов) и исследование антигенных эпитопов (получение моноклональных антител).

Введение в бактериофаг Т7

Бактериофаг Т7 представляет собой двухцепочечную ДНК длиной 40 кб, заключенную в капсид диаметром 60 нм. Соединительный элемент между головкой и хвостом представляет собой кольцевую структуру, состоящую из множества копий gp8. Головка и ядро бактериофага Т7 образуют цилиндрическую структуру, которая связывается с gp8 и может соединять головку и хвост.

Рис. 1. Схематическое изображение бактериофага Т7.(Ссылка: Достижения в системе фагового дисплея Т7 (обзор))

Введение в бактериофаг М13

Бактериофаг M13 относится к группе нитевидных фагов, которые в совокупности называются Ff-фагами. Его длина составляет 900 нм, а ширина — 6,5 нм. Он содержит геном одноцепочечной ДНК (оцДНК) длиной 6407 пар оснований, состоящий из девяти генов, кодирующих 11 различных белков. Среди них пять белков являются белками оболочки, а шесть белков участвуют в репликации и сборке фага. Наибольшая концентрация белков оболочки приходится на капсидный белок G8P, который состоит примерно из 2700 белковых единиц и образует оболочку вокруг хромосомы.

Рис. 2. Схематическое изображение бактериофага M13.(Ссылка: Основы технологии фагового дисплея антител)

Введение в библиотеку антител, полученную методом фагового дисплея.

В современной медицине все большее значение приобретает поиск антител. Существуют различные подходы к поиску антител, но в медицинской науке чаще используется библиотека антител, созданная с помощью фагового дисплея.

С 1990 года для создания фаговых библиотек используются различные форматы антител, включая VH, VHH, scFv, диатела и Fab-антитела. scFv, состоящие из структурных доменов VH и VL, представляют собой одноцепочечные антитела, используемые для создания библиотек scFv. scFv характеризуется коротким периодом полураспада и низкой иммуногенностью. Библиотека Fab-антител состоит из VH, VL, CL и CH1, что позволяет быстро отбирать идеальные антитела с высокой аффинностью. Наименьшей единицей, способной связываться с целевым антигеном, является VHH, который в настоящее время составляет библиотеку наноантител. VHH обладает преимуществами простой структуры, малого объема, высокой растворимости, хорошей стабильности, а также простоты получения и экспрессии. Библиотеки синтетических наноантител (Nb) становятся привлекательной альтернативой иммунизации животных благодаря стабильным синтетическим наноантителам с высокой аффинностью. Как правило, эти фрагменты антител сливаются с G3P фага M13, и путем клонирования большого количества генов, кодирующих фрагмент антитела, можно создавать большие библиотеки антител для фагового дисплея, из которых можно отбирать множество разнообразных антител.

Процесс создания библиотеки фагов

Процесс создания фаговой библиотеки выглядит следующим образом: разрабатываются специфические праймеры для ПЦР-амплификации, позволяющие получить продукты, которые затем ферментативно лигируются с фаговым вектором T7/M13, и успешно конструируется рекомбинантная фаговая плазмида. Рекомбинантная фаговая плазмида трансформируется в клетки-рецепторы TG1, затем наносится на среду, содержащую соответствующие антибиотики, и после отбора трансформеров проводится культивирование. После нескольких циклов культивирования фаг реплицируется в бактериях и успешно экспрессирует целевой белок или полипептид. Затем фаговая библиотека очищается от примесей и несвязанных фагов.

Вариабельные регионы (VH и VL) коррелировали с разнообразием антител, и VH и VL были вставлены в фаговый вектор вместе с последовательностью, кодирующей фаговый белок PIII. После сборки фаговая частица экспонируется и сливается с N-концом минорного белка оболочки III, образуя функциональный фрагмент антитела, в результате чего получается библиотека, содержащая последовательность ДНК антитела.

После завершения иммунизации определяли титр, и после подтверждения титра брали кровь у животных. Из крови выделяли лимфоциты, экстрагировали РНК, проводили амплификацию целевого фрагмента методом ОТ-ПЦР, получая фрагмент гена V-области. Ген V амплифицировали с использованием специфического праймера.

Созданные природные библиотеки включают в себя слабоиммуногенные антитела у животных, способные поражать любую мишень. Фаговые антитела, специфически связывающиеся с антигеном, могут быть получены с помощью методов скрининга, которые фиксируют или метят антиген.

Целевой антиген фиксируется на твердом носителе, например, в отверстии микропланшета, или связывается с магнитной бусиной. Затем добавляется библиотека фаговых антител для связывания с антигеном. После многократных элюций низкоаффинные или неспецифические фаги смываются, а те, которые демонстрируют специфические антитела, сохраняются.

Применение фагового дисплея

*В современной медицине поиск антител приобретает все большее значение. Существуют различные подходы к поиску антител, но технология фагового дисплея чаще используется в медицинской науке. С 1990 года для создания фаговых библиотек используются различные форматы антител, включая VH, VHH, scFv, диатела и Fab-антитела.
*Фаговые пептидные библиотеки позволяют быстро определять последовательность белковых эпитопов и стали мощным инструментом для исследования взаимодействия между эпитопами и антигенными рецепторами.
*Фрагменты антител сливаются с G3P фага M13, и путем клонирования большого количества генов, кодирующих фрагмент антитела, можно создавать большие библиотеки антител для фагового дисплея, из которых можно отбирать множество разнообразных антител.
*Система фагового дисплея Т7 обладает множеством преимуществ, включая простоту, высокую безопасность, стабильность, удобство хранения и транспортировки, поэтому она используется в профилактических и терапевтических вакцинах.
*Система фагового дисплея Т7 позволяет обнаруживать различные антигены, такие как поверхностные антигены патогенных микроорганизмов и антигены раковых клеток.

Фаг

Почему выбирают нас?

Компания Alpha Lifetech также может предоставлять клиентам такие услуги, как производство антител vhh, производство антител scFv и производство антител Fab.