Служба скрининга библиотеки фаговых дисплеев
Alpha Lifetech много лет глубоко вовлечена в технологию отображения фагов. Она создала идеальную стабильную платформу технологии отображения фагов, которая экономит время на научные исследования или проектные исследования и облегчает последующее производство. Alpha Lifetech также может предоставлять клиентам такие услуги, как производство антител vhh, производство антител scFv, производство антител Fab.
Alpha Lifetech имеет комплексную платформу отображения фагов M13/T7 для обеспечения создания и производства библиотек антител. Мы также можем предоставлять индивидуальные услуги, такие как производство антител scFv и высокопроизводительный скрининг антител, чтобы удовлетворить ваши потребности.
Процесс создания библиотеки фагового дисплея
Процесс создания библиотеки фагов выглядит следующим образом: разрабатываются специфические праймеры для ПЦР-амплификации, которая получает продукты, которые ферментативно лигируются с вектором фага T7/M13, и успешно создается рекомбинантная фаговая плазмида. Рекомбинантная фаговая плазмида трансформируется в клетки рецептора TG1, затем покрывается средой, содержащей соответствующие антибиотики, и после скрининга трансформаторов проводится расширенная культура. После нескольких раундов культивирования фаг реплицирует время репликации в бактериях и успешно экспрессирует целевой белок или полипептид. Затем фаговая библиотека очищается для удаления некоторых примесей и несвязанных фагов.
Методы скрининга библиотеки фагового дисплея
Успех производства антител с фаговым дисплеем в основном зависит от библиотек фагового дисплея антител, а распространенными методами фагового пэннинга являются твердофазный и жидкофазный скрининг. Твердофазный скрининг антигенов обогащает специфические антитела посредством 3-4 раундов элюции для получения библиотек фагового дисплея антител; Жидкофазный скрининг антигенов выполняется путем инкубации меченых биотином целевых и библиотек фагового дисплея антител и захвата связанных фагов с помощью магнитных шариков. Твердофазный скрининг потребляет больше антигена, и некоторые эпитопы антигена разрушаются. Жидкофазный скрининг характеризуется высокой эффективностью и обогащением, но полученные антитела менее специфичны. Метод фагового пэннинга зависит от экспериментальных потребностей, все из которых будут иметь определенное влияние на эффект производства антител с фаговым дисплеем.
Высокопроизводительный скрининг антител
Разработка антител в современной медицине стала быстрой. Существуют различные методы разработки антител, но в медицинской науке больше используется высокопроизводительный скрининг антител. Этот процесс позволяет получить большое разнообразие репертуара антител. Сочетание с традиционными методами скрининга библиотек антител может улучшить качество скрининга библиотек фагового дисплея. После биологического скрининга антитела можно охарактеризовать с помощью низкопроизводительного ИФА или высокопроизводительного скрининга антител.

Рис.1. Блок-схема, иллюстрирующая последовательность событий от создания библиотек фаговых антител до получения моноклональных антител с высоким сродством к антигенам и низкой иммуногенностью.(Источник ссылки:Технология фагового дисплея как мощная платформа для разработки лекарств на основе антител- ЧВК (nih.gov))
Меры предосторожности при скрининге фагового дисплея антителМеры предосторожности
Соображения относительно буфера
При выборе буферов следует учитывать стабильность мишени, микросреду связывания и минимальное неспецифическое связывание в реальном сценарии применения. Неродственные белки, неионные детергенты и физиологические концентрации солей способствуют снижению фона. Существуют также другие условия, например, некоторые мишени могут потребовать добавления двухвалентных катионов или других кофакторов в буфер, кофакторы белков могут быть совместно зафиксированы с мишенью, могут быть добавлены в сортировочный буфер и даже могут использоваться в качестве средства захвата мишени.
Соображения относительно давления
К общим факторам давления отбора относятся концентрация целевых молекул, время связывания, интенсивность промывки и т. д. Другие методы повышения давления отбора включают использование денатурирующих агентов (таких как кислоты, мочевина и гуанидин), органических растворителей, повышение температуры или увеличение концентрации конкурирующих лигандов или мишеней в промывочном буфере.
Среди них важен первый раунд скрининга. Первый раунд скрининга заключается в захвате как можно большего количества положительных клонов из сконструированной библиотеки, при этом удаляя неспецифические клоны. Следует использовать мишени с пористым покрытием или большое количество растворимых мишеней, чтобы обеспечить захват большого количества связанных фагов для поддержания разнообразия библиотеки. В последующих раундах скрининга давление отбора должно быть увеличено с увеличением обогащения, многократной промывки и увеличения времени промывки, клоны с высоким сродством могут быть скринингованы.
Среди них важен первый раунд скрининга. Первый раунд скрининга заключается в захвате как можно большего количества положительных клонов из сконструированной библиотеки, при этом удаляя неспецифические клоны. Следует использовать мишени с пористым покрытием или большое количество растворимых мишеней, чтобы обеспечить захват большого количества связанных фагов для поддержания разнообразия библиотеки. В последующих раундах скрининга давление отбора должно быть увеличено с увеличением обогащения, многократной промывки и увеличения времени промывки, клоны с высоким сродством могут быть скринингованы.
Стратегия отрицательного скрининга
Антигенные метки и материалы-носители процесс скрининга заключается в скрининге всех веществ на конъюгатах антигена, таких как метки, белки слияния и поддерживающие субстраты. Отрицательный скрининг нецелевых веществ может ограничить обогащение антител, отличных от целевого антигена.
Целые клетки, липосомы, нанофосфолипидные диски и вирусоподобные частицы можно подвергнуть отрицательному скринингу с использованием моделированных трансфицированных клеток или нетрансфицированных клеток при скрининге трансфицированных клеточных линий.
Удаление сложных смесей антигенов. Строгий отрицательный скрининг может быть выполнен для неизвестных или сложных целевых молекул, таких как целые клетки или неочищенные белки.
Стратегия антител против определенных участков антигенов заключается в том, чтобы элюировать антитело, которое может конкурировать с лигандом, путем добавления высокой концентрации лигандов, а другая — в блокировании антитела.
Целые клетки, липосомы, нанофосфолипидные диски и вирусоподобные частицы можно подвергнуть отрицательному скринингу с использованием моделированных трансфицированных клеток или нетрансфицированных клеток при скрининге трансфицированных клеточных линий.
Удаление сложных смесей антигенов. Строгий отрицательный скрининг может быть выполнен для неизвестных или сложных целевых молекул, таких как целые клетки или неочищенные белки.
Стратегия антител против определенных участков антигенов заключается в том, чтобы элюировать антитело, которое может конкурировать с лигандом, путем добавления высокой концентрации лигандов, а другая — в блокировании антитела.
Применение фагового дисплея
*Открытие антител становится все более важным в современной медицине. Существуют различные подходы к открытию антител, но технология фагового дисплея больше используется в медицинской науке. С 1990 года для создания фаговых библиотек использовались различные форматы антител, включая VH, VHH, scFv, диатела и Fab-антитела.
*Библиотеки фаговых пептидов позволяют быстро определять последовательность белковых эпитопов и стали мощным инструментом для исследования взаимодействия между эпитопами и антигенными рецепторами.
*Фрагменты антител сливаются с G3P фага M13, и путем клонирования большого количества генов, кодирующих фрагмент антитела, можно создать большие библиотеки фаговых дисплеев антител, из которых можно выбрать множество разнообразных антител.
*Система фагового дисплея Т7 имеет много преимуществ, включая простоту, высокую безопасность, стабильность, удобство хранения и транспортировки, поэтому ее используют в профилактических и терапевтических вакцинах.
*Система фагового дисплея Т7 может обнаруживать различные антигены, такие как поверхностные антигены патогенных микроорганизмов и раковые антигены.
*Библиотеки фаговых пептидов позволяют быстро определять последовательность белковых эпитопов и стали мощным инструментом для исследования взаимодействия между эпитопами и антигенными рецепторами.
*Фрагменты антител сливаются с G3P фага M13, и путем клонирования большого количества генов, кодирующих фрагмент антитела, можно создать большие библиотеки фаговых дисплеев антител, из которых можно выбрать множество разнообразных антител.
*Система фагового дисплея Т7 имеет много преимуществ, включая простоту, высокую безопасность, стабильность, удобство хранения и транспортировки, поэтому ее используют в профилактических и терапевтических вакцинах.
*Система фагового дисплея Т7 может обнаруживать различные антигены, такие как поверхностные антигены патогенных микроорганизмов и раковые антигены.
Фаг
01020304
0102030405
010203
If you have any questions, please feel free to contact us at any time.
Leave Your Message
0102