Фаговая дисплейная система

Компания Alpha Lifetech разработала идеальную стабильную систему фагового дисплея, которая экономит время на научных исследованиях или проектных работах и упрощает последующее производство.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Фаговая дисплейная система

Компания Alpha Lifetech много лет занимается разработкой технологий фагового дисплея. Alpha Lifetech создала идеальную стабильную платформу для фагового дисплея, которая экономит время на научных исследованиях или проектах, а также упрощает последующее производство. Мы предлагаем клиентам на выбор несколько систем фагового дисплея, включая системы на основе фагов M13, T7, T4 и λ. В зависимости от ваших экспериментальных потребностей вы можете выбрать подходящую систему фагового дисплея. Alpha Lifetech также предоставляет клиентам услуги по производству антител vhh, антител scfv и антител Fab.

Введение в фаговый дисплей

Технология фагового дисплея — это метод, использующий фаги (вирусы, инфицирующие бактерии) для поиска функциональных связывающих молекул специфических белков или пептидов. Методы создания библиотек фаговых антител включают создание библиотек антител Fab, библиотек антител scFv, библиотек антител vhh и др. В зависимости от типа бактериофагов их можно разделить на бактериофаги M13, T7, T4, λ и другие. В зависимости от типа библиотеки, она может быть разделена на библиотеки случайных пептидов, кДНК, антител и белков. Технология фагового дисплея проста в использовании и недорога, включает в себя фаговый дисплей Fab, фаговый дисплей scFv и фаговый дисплей vhh. Однако этот метод ограничивает разнообразие молекулярной генетики в библиотеке, поскольку не может экспрессировать слишком длинные последовательности.

Технология фагового дисплея позволяет установить физическую связь между отображаемой молекулой и последовательностью ДНК, кодирующей эту молекулу, а аминокислотная последовательность конкретного конъюгата может быть мгновенно определена путем секвенирования ДНК желаемого фрагмента в геноме фага.

В настоящее время технология фагового дисплея широко используется. Среди достижений можно отметить разработку новых вакцин (недорогих и эффективных синтетических вакцин), разработку лекарственных препаратов на основе антител (скрининг ингибиторов ферментов), клеточную сигнальную трансдукцию (скрининг моделируемых эпитопов) и исследование антигенных эпитопов (получение моноклональных антител).

Принцип фагового дисплея

Фаговый дисплей — это молекулярная технология, основанная на генетической модификации ДНК фага, которая связывает целевой фрагмент с белком оболочки фага и, таким образом, экспрессирует его на поверхности фага. Чужеродная последовательность ДНК вводится в определенное место в нуклеотидной последовательности генома фага, кодирующей белок оболочки фага (рис. 1).

При фаговой инфекции ген фага начинает экспрессироваться внутри бактерии-хозяина, а вставленный целевой фрагмент отображается на поверхности фага в виде комбинации соответствующего гена, кодирующего белок оболочки, и клонированной последовательности.

Рис. 1. Архитектура вириона бактериофага M13 и принцип технологии фагового дисплея.(Источник: Фаговый дисплей и другие технологии отображения пептидов | Обзоры микробиологии FEMS | Oxford Academic (oup.com))

Системы фагового дисплея

Нитевидные фаги являются наиболее часто используемой системой фагового дисплея, и системы фагового дисплея могут быть созданы с использованием других фагов. Такие системы могут отображать относительно крупные пептиды или более эффективно проводить скрининг библиотек кДНК, чем системы на основе нитевидных фагов.

Рис. 2. Типы бактериофагов, используемых в фаговом дисплее.(Источник: Фаговый дисплей и другие технологии отображения пептидов | Обзоры микробиологии FEMS | Oxford Academic (oup.com))

Преимущества системы фагового дисплея

В системах фагового дисплея обычно используются нитевидные фаги, включая M13, fd и f1. По сравнению с фагами M13, бактериофаги T7 состоят из двухцепочечной ДНК, что обеспечивает им большую стабильность и меньшую вероятность мутаций во время репликации. Фаг T7, как носитель, быстро растет и может образовывать бляшки в течение 3 часов, что значительно экономит время на клонирование и скрининг.

Создание библиотек фагов Т7 используется для экспрессии генов на поверхности и вне поверхности клеток, а также для создания библиотек пептидов, кДНК, геномной ДНК и антител. Это позволяет использовать фаги Т7 не только в качестве антимикробных средств, но и для скрининга мишеней лекарственных препаратов в различных органах (например, головном мозге, печени и легких), для скрининга мишеней распознавания антител, исследования физиологических механизмов и т.д. Они также могут применяться для диагностики и лечения различных заболеваний.

Другие формы бактериофагов

Селективно инфекционный фаг

В отличие от традиционного фагового дисплея, селективный инфекционный фаг (SIP) напрямую связывает белково-лигандные взаимодействия, участвующие в производстве, с инфицированием и размножением фага без необходимости этапов элюции.

Рис. 3. Селективно инфекционный фаг (SIP).(Источник: Фаговый дисплей и другие технологии отображения пептидов | Обзоры микробиологии FEMS | Oxford Academic (oup.com))

ландшафтные фаги

Ландшафтные фаги образуются из тысяч копий чужеродных пептидов, расположенных вокруг трубчатых капсидов в сверхплотных повторяющихся структурах, а поливалентное отображение на ландшафтных фагах стимулирует высокоаффинный отбор, поэтому невозможно различить высокую и низкую аффинность пептидных лигандов.

Рис. 4. Идея ландшафтных фагов. (Источник: Фаговый дисплей и другие технологии отображения пептидов | Обзоры микробиологии FEMS | Oxford Academic (oup.com))

Преимущества систем фагового дисплея

Многокомпонентные системы фагового дисплея

Системы отображения фагов M13, T7, T4 и λ доступны для выбора клиентами.

Возможность высокопроизводительного скрининга

Мы можем использовать системы фагового дисплея для быстрого создания крупномасштабных фаговых библиотек и проведения высокопроизводительных скрининговых экспериментов.

Услуги по индивидуальному оформлению фаговых дисплеев

Клиенты могут настраивать комплексные услуги в соответствии с требованиями проекта, например, проводить скрининг высокоаффинных антител и т.д.

Широкий спектр применения

Применяется в таких областях, как инженерия антител, инженерия пептидов и белков, разработка и создание лекарств, исследование белковых взаимодействий и т. д.