Служба анализа взаимодействия белок-белок

Alpha Lifetech также может предоставить клиентам анализы белков, анализ взаимодействия белков, анализ взаимодействия белок-белок (CO-IP, вестерн-блот, анализ иммунопреципитации хроматина) и анализ функции белка для удовлетворения экспериментальных потребностей различных клиентов.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Служба анализа взаимодействия белок-белок

Компания Alpha Lifetech уже много лет активно занимается анализом белков, создала надежную платформу для анализа функций белков и освоила ряд технических средств для проверки взаимодействия белков, что позволяет экономить время научных исследований или проектных разработок, обеспечивая при этом стабильные результаты.

Введение в анализ белок-белкового взаимодействия

Белки являются наиболее важными исполнительными молекулами в любой форме жизни, реагирующими на инструкции, хранящиеся в генетических материалах. Чаще всего белки выполняют свою работу, выступая в качестве ролевых игроков, которые взаимодействуют с другими белками, что становится более очевидным, когда функция белка изучается в реальном контексте клетки. Выявление взаимодействий между белками имеет решающее значение для биохимического исследования отдельного белка. Анализ взаимодействия белков распространенных видов следующим образом:

Анализ коиммунопреципитации

Принцип метода коиммунопреципитации заключается в смешивании целевого белка, специфического антитела и магнитных частиц белка A/G для инкубации, супернатант несвязанного белка отбрасывается посредством адсорбции магнитных частиц на магнитной стойке, а магнитные частицы промываются для удаления белка и других примесей, если они специально не связаны.

Рис.1 Схематическая диаграмма анализов Co-IP.(Источник ссылки:Коиммунопреципитационный анализ - PubMed (nih.gov))

Анализ вытягивания

Анализ pull-down заключается в фиксации известного белка на магнитной бусине и добавлении вещества, которое должно быть обнаружено. Элюент обнаруживается для адсорбции взаимодействующих белков.

В 1988 году Смит и соавторы очистили белок слияния GST, который использовался в анализах pull-down и назывался Gst pull-down, то есть добавляли метку GST к целевому белку, захватывали взаимодействующий белок через GSH, элюировали связывание и проверяли его с помощью анализов WB.

Рис.2 Схематическая диаграмма анализа GST pull-down.(Источник ссылки:Анализ GST Pull-Down для изучения связывания PIF4 in vitro - PubMed (nih.gov))

Его идея заключается в использовании в качестве среды ионов металлов, таких как никель или кобальт, очистке белка с помощью аффинной хроматографии и элюировании связывания с помощью эксперимента WB для проверки.

Кроме того, существуют анализы ДНК-пулдаун (анализ связывания белка и ДНК), анализ РНК-пулдаун (анализ взаимодействия белка и РНК) и анализы малых молекул.

DNA Pull-down (анализ связывания ДНК с белком) — это метод in vitro определения связывания ДНК с белком. Связывание определенных белков с целевой ДНК было обнаружено с помощью анализов WB; Неизвестные фрагменты ДНК связаны с белками, какие фрагменты ДНК известны с помощью обнаружения MS

RNA Pull-down (анализ взаимодействия белков и РНК) — это метод in vitro для определения связывания РНК с белками. Связывание определенных белков с целевой РНК было обнаружено с помощью анализов WB; Неизвестные фрагменты РНК связаны с белками, какие фрагменты РНК известны с помощью обнаружения MS

Метод SM pull-down (анализы с малыми молекулами pull-down) позволяет обнаружить целевые белки, которые специфически связываются с малыми молекулами, а в сочетании с MS можно точно скринировать целевые белки малых молекул, что можно разделить на метод маркировки in vitro и биологический ортогональный метод.

Эксперимент ВБ

Эксперимент WB (также известный как эксперимент Western Blot или Western Blot), суть заключается в специфической реакции антигена и антитела, основной принцип заключается в разделении денатурированных белков посредством электрофореза в полиакриламидном геле SDS и переносе его на твердофазный носитель (такой как мембрана PVDF, мембрана NC) посредством мембранного переноса (влажное или полусухое вращение). После блокирования (с использованием BSA, пахты и т. д.) первичное антитело применяется для специфического связывания с белком, а вторичное антитело, меченное флуоресцеином, добавляется после промывания пленки. Связывая второе антитело с первичным антителом, целевой белок можно наблюдать по проявлению цвета субстрата и хемилюминесценции. Обычно его используют для определения того, экспрессируется ли определенный белок в образце, и приблизительного анализа уровня его экспрессии.

Сравнение методов белок-белкового взаимодействия

Анализы на вытягивание белков похожи на анализы Co-IP, оба из которых относятся к экспериментам по обнаружению взаимодействия белков. Разница между двумя методами заключается в том, что анализы Co-IP получают взаимодействующие белки известных белков, что имеет определенную достоверность, но не может подтвердить, взаимодействуют ли взаимодействующие белки напрямую или косвенно. Анализы на вытягивание предназначены для поиска неизвестного белка, взаимодействующего с известным белком. Он может напрямую подтвердить, взаимодействует ли известный белок с обнаруженным белком, но не может знать ситуацию связывания in vivo.

Технология коиммунопреципитации используется для анализа наличия взаимодействия между двумя или более белками на основе экспериментов по иммунопреципитации. По сравнению с другими экспериментальными методами анализа взаимодействия белков (GST Pull-down, вестерн-блот, анализ иммунопреципитации хроматина и т. д.) технология коиммунопреципитации обладает более высокой специфичностью, чувствительностью и высокой повторяемостью, что позволяет избежать помех неспецифического связывания и отразить взаимодействие белков в естественном состоянии.

	НДС Снижение	Co-IP	ВБ
Преимущество	Простота в эксплуатации Подходит для очистки различных белков	Для анализа взаимодействия in vivo Его можно идентифицировать с помощью белка, находящегося ниже по течению	Сильная специфичность Качественный и количественный in vitro
Ограничение	Возможно неспецифическое связывание Требуется дальнейшая проверка взаимодействия.	Сильная зависимость от антител Может возникнуть неспецифическое связывание.	Кропотливый Трудно использовать для крупномасштабного анализа белков.
Пример применения	Определите взаимодействия Очищенный белковый комплекс	Изучение передачи сигнала Механизм заболевания	Последующий анализ взаимодействий белок-белок, белок-ДНК и белок-РНК

Индивидуальный

Настройте услуги в соответствии с вашими потребностями

Опыт

Многолетний опыт производства белка

Технологии

Высокое качество результатов доставки

Процесс эксперимента

Строгий процесс управления качеством

Сопутствующие услуги

BLI-Альфа Lifetech(1) — Служба анализа BLI/SPR

Узнать больше

COIP-Альфа Lifetech(1) — Служба коиммунопреципитации (Co-IP)

Узнать больше

Производство белка-Alpha Lifetech — Услуга сшивания белков

Узнать больше

потяните вниз-Alpha Lifetch — Услуга по сбору налога на товары и услуги (GST)

Узнать больше

дрожжевая клетка-Alpha Lifetech — Дрожжевой двухгибридный сервис

Узнать больше

Если у вас возникнут какие-либо вопросы, пожалуйста, обращайтесь к нам в любое время.

	НДС Снижение	Co-IP	ВБ
Преимущество	Простота в эксплуатации Подходит для очистки различных белков	Для анализа взаимодействия in vivo Его можно идентифицировать с помощью белка, находящегося ниже по течению	Сильная специфичность Качественный и количественный in vitro
Ограничение	Возможно неспецифическое связывание Требуется дальнейшая проверка взаимодействия.	Сильная зависимость от антител Может возникнуть неспецифическое связывание.	Кропотливый Трудно использовать для крупномасштабного анализа белков.
Пример применения	Определите взаимодействия Очищенный белковый комплекс	Изучение передачи сигнала Механизм заболевания	Последующий анализ взаимодействий белок-белок, белок-ДНК и белок-РНК