Служба анализа белок-белкового взаимодействия
Компания Alpha Lifetech также может предоставить клиентам анализы белков, анализы взаимодействия белков, анализы белок-белкового взаимодействия (CO-IP, вестерн-блоттинг, анализ иммунопреципитации хроматина) и анализы функций белков для удовлетворения экспериментальных потребностей различных клиентов.
СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ01
Служба анализа белок-белкового взаимодействия
Компания Alpha Lifetech на протяжении многих лет активно занимается анализами белков, создала надежную платформу для анализа функций белков и освоила целый ряд технических средств для проверки взаимодействия белков, что позволяет сэкономить время научных исследований или проектных разработок, обеспечивая при этом стабильные результаты.
Компания Alpha Lifetech также может предоставить клиентам анализы белков, анализы взаимодействия белков, анализы белок-белкового взаимодействия (CO-IP, вестерн-блоттинг, анализ иммунопреципитации хроматина) и анализы функций белков для удовлетворения экспериментальных потребностей различных клиентов.
Введение в анализ белок-белкового взаимодействия
Белки – важнейшие исполнительные молекулы в любой форме жизни, реагирующие на инструкции, хранящиеся в генетическом материале. Чаще всего белки выполняют свои функции, взаимодействуя с другими белками, что становится более очевидным при изучении функции белка в реальном контексте клетки. Выявление взаимодействий между белками крайне важно для биохимического исследования отдельного белка. Анализ взаимодействий белков распространённых типов можно проводить следующим образом:
Анализ коиммунопреципитации
Принцип метода коиммунопреципитации заключается в смешивании целевого белка, специфического антитела и магнитных частиц белка A/G для инкубации, супернатант несвязанного белка отбрасывается посредством адсорбции магнитных частиц на магнитной стойке, а магнитные частицы промываются для удаления белка и других примесей, если они специально не связаны.
Рис.1 Принципиальная схема анализов Co-IP.(Источник ссылки: Анализ коиммунопреципитации — PubMed (nih.gov))
Анализ с вытягиванием
Анализ с пул-дауном заключается в фиксации известного белка на магнитной частице и добавлении определяемого вещества. Элюент детектируется по адсорбции взаимодействующих белков.
В 1988 году Смит и соавторы очистили белок слияния GST, который использовался в анализах с накоплением фрагментов и был назван Gst pull down, то есть добавляли метку GST к целевому белку, захватывали взаимодействующий белок через GSH, элюировали связывание и проверяли его с помощью анализов WB.
Рис.2 Схематическая диаграмма анализов GST pull-down.(Источник ссылки: Анализ GST Pull-Down для изучения связывания PIF4 in vitro — PubMed (nih.gov) )
Его подход заключается в использовании ионов металлов, таких как никель или кобальт, в качестве среды, очистке белка с помощью аффинной хроматографии и элюировании связывания с помощью эксперимента WB для проверки.
Кроме того, существуют анализы ДНК-пулла (анализ связывания белка с ДНК), РНК-пулла (анализ взаимодействия белка с РНК) и анализы малых молекул.
Анализ связывания ДНК (белок ДНК) – это метод in vitro для определения связывания ДНК с белком. Связывание специфических белков с целевой ДНК определялось с помощью анализа WB; неизвестные фрагменты ДНК связываются с белками, какие именно фрагменты ДНК определяются с помощью масс-спектрометрии.
Анализ взаимодействия РНК с белками (RNA pull-down) — это метод in vitro для определения связывания РНК с белками. Связывание специфических белков с целевой РНК определялось с помощью анализа WB; неизвестные фрагменты РНК связывались с белками, какие именно фрагменты РНК определялись с помощью масс-спектрометрии.
Метод SM pull-down (анализы с использованием малых молекул) позволяет обнаружить целевые белки, которые специфически связываются с малыми молекулами, а в сочетании с MS можно точно скринировать целевые белки малых молекул, что можно разделить на метод маркировки in vitro и биологический ортогональный метод.
Эксперимент ВБ
Эксперимент WB (также известный как эксперимент Western Blot или Western Blot), суть которого заключается в специфической реакции антигена и антитела. Основной принцип заключается в разделении денатурированных белков посредством электрофореза в полиакриламидном геле с SDS и переносе их на твердофазный носитель (например, мембрану PVDF, мембрану NC) путем мембранного переноса (влажным или полусухим вращением). После блокирования (с использованием BSA, пахты и т. д.) наносят первичное антитело для специфического связывания с белком, а вторичное антитело, меченное флуоресцеином, добавляют после промывки пленки. Связывая второе антитело с первичным антителом, можно наблюдать целевой белок по цвету субстрата и хемилюминесценции. Этот метод обычно используется для определения экспрессии определенного белка в образце и приблизительного анализа уровня его экспрессии.
Сравнение методов белок-белкового взаимодействия
Анализы с использованием метода «pull-down» аналогичны анализам Co-IP, оба из которых относятся к экспериментам по обнаружению взаимодействия белков. Разница между этими двумя методами заключается в том, что анализы Co-IP позволяют получить взаимодействующие белки известных белков, что обеспечивает определённую достоверность, но не позволяет подтвердить, взаимодействуют ли взаимодействующие белки напрямую или косвенно. Анализы с использованием метода «pull-down» предназначены для обнаружения неизвестного белка, взаимодействующего с известным белком. Они позволяют напрямую подтвердить, взаимодействует ли известный белок с детектируемым белком, но не позволяют определить характер связывания in vivo.
Технология коиммунопреципитации используется для анализа наличия взаимодействия между двумя или более белками на основе экспериментов по иммунопреципитации. По сравнению с другими экспериментальными методами анализа взаимодействия белков (GST Pull-down, вестерн-блот, анализ иммунопреципитации хроматина и т. д.) технология Co-IP обладает более высокой специфичностью, чувствительностью и высокой повторяемостью, что позволяет избежать помех неспецифического связывания и отразить взаимодействие белков в естественном состоянии.
| GST Сбросить | Co-IP | ВБ | |
|---|---|---|---|
| Преимущество | *Простота в эксплуатации *Подходит для очистки различных белков | *Для анализа взаимодействия in vivo *Его можно идентифицировать с помощью белка, находящегося ниже по течению | *Сильная специфичность *Качественное и количественное in vitro |
| Ограничение | *Возможно, неспецифическое связывание *Требуется дальнейшая проверка взаимодействия. | *Сильная зависимость от антител *Может иметь место неспецифическое связывание. | *Кропотливый *Трудно использовать для крупномасштабного анализа белков. |
| Пример применения | *Определение взаимодействий *Очищенный белковый комплекс | *Изучение передачи сигнала *Механизм заболевания | Последующий анализ взаимодействий белок-белок, белок-ДНК и белок-РНК |
Индивидуальный
Настройте услуги в соответствии с вашими потребностями
Опыт
Многолетний опыт производства белка
Технология
Высокое качество результатов доставки
Процесс эксперимента
Строгий процесс управления качеством
Если у вас возникнут какие-либо вопросы, обращайтесь к нам в любое время.
Leave Your Message
2018-07-16 
0102