Сервис анализа белково-белковых взаимодействий
Компания Alpha Lifetech также может предоставить клиентам анализы белков, анализы белковых взаимодействий, анализы белково-белковых взаимодействий (CO-IP, вестерн-блоттинг, анализ иммунопреципитации хроматина) и анализы функций белков для удовлетворения экспериментальных потребностей различных клиентов.
СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ01
Сервис анализа белково-белковых взаимодействий
Компания Alpha Lifetech на протяжении многих лет активно занимается анализом белков, создала надежную платформу для анализа функций белков и освоила различные технические методы проверки взаимодействия белков, что позволяет экономить время научных исследований или проектов, обеспечивая при этом стабильные результаты.
Компания Alpha Lifetech также может предоставить клиентам анализы белков, анализы белковых взаимодействий, анализы белково-белковых взаимодействий (CO-IP, вестерн-блоттинг, анализ иммунопреципитации хроматина) и анализы функций белков для удовлетворения экспериментальных потребностей различных клиентов.
Введение в анализ белково-белковых взаимодействий
Белки — это важнейшие молекулы-«исполнительные механизмы» в любой форме жизни, реагирующие на инструкции, хранящиеся в генетическом материале. Чаще всего белки выполняют свои функции, выступая в роли «игроков», взаимодействующих с другими белками, что особенно очевидно при изучении функции белка в реальном контексте клетки. Выявление взаимодействий между белками имеет решающее значение для биохимического исследования отдельного белка. Анализ взаимодействий белков распространенных типов выглядит следующим образом:
Анализ коиммунопреципитации
Принцип метода коиммунопреципитации заключается в смешивании целевого белка, специфического антитела и магнитных шариков с белком A/G для инкубации, после чего супернатант несвязанного белка удаляется путем адсорбции магнитных шариков на магнитной стойке, а магнитные шарики промываются для удаления белка и других примесей, за исключением специфически связанных.
Рис. 1. Схема анализа коиммунопреципитации.(Источник: Метод коиммунопреципитации - PubMed (nih.gov))
Анализ методом осаждения
Метод осаждения белков заключается в фиксации известного белка на магнитной бусине и добавлении детектируемого вещества. Элюат анализируется на предмет адсорбции взаимодействующих белков.
В 1988 году Смит и соавторы очистили GST-слитый белок, который применялся в методах осаждения и получил название Gst pull down. Этот метод заключается в добавлении GST-метки к целевому белку, захвате взаимодействующего белка с помощью GSH, элюировании связывания и его подтверждении с помощью вестерн-блоттинга.
Рис. 2. Схема анализа связывания GST.(Источник: Метод GST Pull-Down для изучения связывания PIF4 in vitro - PubMed (nih.gov) )
Его метод осаждения заключается в использовании ионов металлов, таких как никель или кобальт, в качестве среды, очистке белка с помощью аффинной хроматографии и элюировании связывания с помощью вестерн-блоттинга для подтверждения.
Кроме того, существуют методы ДНК-пуллдаун (анализ связывания белка с ДНК), РНК-пуллдаун (анализ взаимодействия белка с РНК) и анализ связывания малых молекул.
Метод ДНК-пулл-даун (анализ связывания белка с ДНК) — это метод определения связывания ДНК белками in vitro. Связывание специфических белков с целевой ДНК определяется с помощью вестерн-блоттинга; неизвестные фрагменты ДНК, связывающиеся с белками, определяются с помощью масс-спектрометрии.
Метод РНК-пулл-даун (анализ взаимодействия белка и РНК) — это метод in vitro для определения связывания РНК с белками. Связывание специфических белков с целевой РНК определяется с помощью вестерн-блоттинга; неизвестные фрагменты РНК, связывающиеся с белками, определяются с помощью масс-спектрометрии.
Метод SM pull-down (анализ связывания малых молекул) позволяет обнаруживать целевые белки, специфически связывающиеся с малыми молекулами, а в сочетании с масс-спектрометрией позволяет точно определять целевые белки, связывающиеся с малыми молекулами. Этот метод можно разделить на метод мечения in vitro и биологически ортогональный метод.
Эксперимент WB
Вестерн-блоттинг (также известный как WB-эксперимент или Western blot) по своей сути основан на специфической реакции антигена и антитела. Основной принцип заключается в разделении денатурированных белков с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) и переносе их на твердую фазу (например, PVDF-мембрану, NC-мембрану) методом мембранного переноса (влажное или полусухое вращение). После блокирования (с использованием BSA, пахты и т. д.) наносится первичное антитело, специфически связывающееся с белком, а после промывки пленки добавляется меченное флуоресцеином вторичное антитело. Связывая вторичное антитело с первичным, целевой белок можно наблюдать по проявлению окраски субстрата и хемилюминесценции. Этот метод обычно используется для определения наличия экспрессии определенного белка в образце и приблизительного анализа уровня его экспрессии.
Сравнение методов анализа белково-белковых взаимодействий
Методы осаждения белков (pull-down assays) аналогичны методам коиммунопреципитации (Co-IP assays), оба относятся к экспериментам по обнаружению белковых взаимодействий. Разница между этими двумя методами заключается в том, что в методе Co-IP получают белки, взаимодействующие с известными белками, что обеспечивает определенную достоверность, но не позволяет подтвердить, взаимодействуют ли белки напрямую или косвенно. Методы осаждения белков (pull-down assays) предназначены для обнаружения неизвестного белка, взаимодействующего с известным белком. Они позволяют напрямую подтвердить взаимодействие известного белка с обнаруженным белком, но не позволяют определить ситуацию связывания in vivo.
Технология коиммунопреципитации используется для анализа наличия взаимодействия между двумя или более белками на основе экспериментов по иммунопреципитации. По сравнению с другими экспериментальными методами анализа взаимодействия белков (GST-пулл-даун, вестерн-блоттинг, анализ хроматиновой иммунопреципитации и др.), технология коиммунопреципитации обладает более высокой специфичностью, чувствительностью и воспроизводимостью, что позволяет избежать влияния неспецифического связывания и отражать взаимодействие белков в естественном состоянии.
| Скидка на НДС | Совместная IP-связь | ВБ | |
|---|---|---|---|
| Преимущество | *Простота в эксплуатации *Подходит для очистки различных белков | *Для анализа взаимодействия in vivo *Его можно идентифицировать по нижележащему белку | *Высокая специфичность *Качественные и количественные исследования in vitro |
| Ограничение | *Возможно, неспецифическое связывание *Требуется дополнительная проверка взаимодействия | *Сильная зависимость от антител *Возможно неспецифическое связывание | *Кропотливый *Сложно использовать для крупномасштабного анализа белков. |
| Пример применения | *Выявление взаимодействий *Очищенный белковый комплекс | *Исследование передачи сигналов *Механизм заболевания | Последующий анализ взаимодействий белок-белок, белок-ДНК и белок-РНК |
Индивидуальный
Настройте услуги в соответствии с вашими потребностями.
Опыт
Многолетний опыт в производстве белка.
Технологии
Высококачественные результаты доставки
Процесс эксперимента
Строгий процесс управления качеством
Если у вас возникнут какие-либо вопросы, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам в любое время.
Leave Your Message
2018-07-16 
0102