Услуга по созданию библиотеки антител scFv
Введение в услугу по созданию библиотеки антител scFv
scFv — это небольшой фрагмент антитела, состоящий из тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL), соединенных коротким гибким пептидом, размером около 25 кДа, и является наиболее часто используемым типом рекомбинантных антител. scFv имеет небольшой размер, специфичен, может производиться в больших масштабах в прокариотической экспрессионной системе и имеет интактный антигенсвязывающий сайт, что делает его широко используемым в диагностике и лечении заболеваний. Благодаря своему небольшому размеру, он легче и быстрее проникает в опухоли при лечении заболеваний; кроме того, scFv обладает преимуществами короткого времени удержания в нецелевых тканях и быстрого выведения из сыворотки, что делает его перспективным для применения в визуализации опухолей. Обычно используются библиотеки антител scFv, такие как фаговые дисплеи, а также рибосомные дисплеи, дисплеи дрожжевых клеток, дисплеи клеток млекопитающих и бактериальные дисплеи.
Компания Alpha Lifetech может предоставить
Компания Alpha Lifetech располагает хорошо отлаженной системой создания библиотек scFv-антител и может создавать библиотеки scFv-антител на клетках селезенки иммунизированных животных и В-лимфоцитах человека. Кроме того, мы анализируем все аспекты информации о последовательности scFv-антител и подтверждаем ее с помощью различных методов, таких как анализ EC50, анализ аффинности, проверка блокирования проточного анализа и т.д. Мы используем различные фаговые платформы, включая фаги M13, T4, T7 и λ, что позволяет удовлетворять различные потребности клиентов и предоставлять персонализированные услуги по созданию библиотек scFv. Наши исследователи имеют многолетний опыт в создании библиотек и хорошо разбираются в создании различных типов фаговых библиотек scFv, таких как иммунные библиотеки, природные библиотеки, полусинтетические библиотеки, синтетические библиотеки и т.д. Созданная нами библиотека scFv-антител обладает большой емкостью и богатым разнообразием, что позволяет получать высокоаффинные scFv-антитела. Мы предоставляем услуги по созданию библиотек scFv-антител против бактерий, вирусов, токсинов, рецепторов и опухолевых антигенов, пептидов и т.д. для многих отечественных и зарубежных учреждений. Технология фагового дисплея антител проста в использовании, имеет короткий экспериментальный период и позволяет экспрессировать желаемые scFv в больших количествах с помощью системы экспрессии млекопитающих. Технология рекомбинантных scFv-антител, полученных с использованием системы фагового дисплея, не требует подготовки гибридомных клеток и позволяет напрямую клонировать ген scFv в желаемый фаговый вектор.
| Различные типы библиотек антител | Фаговый вектор | Бактерия-хозяин | Разновидность | Ткани или клетки | Максимальная вместимость библиотеки |
| библиотека иммунизации scFv | pMECS, pComb3X, pCANTAB 5E и др. | TG1 E. coli, XL1-Blue, ER2738 и др. | Люди, крысы, кролики, овцы, крупный рогатый скот и т. д. | Селезенка животных, периферические мононуклеарные клетки крови и гибридомные клетки | 1×10^9 |
| scFv наивная библиотека | |||||
| полусинтетическая библиотека scFv | |||||
| библиотека синтеза scFv |
Процесс создания библиотеки антител scFv
Мы умеем связывать VH и VL с помощью гибкого пептида для создания scFv, необходимых нашим клиентам. Мы можем предоставить нашим клиентам широкий спектр фаговых векторов, включая pMECS, pComb3X и pCANTAB 5E. У нас есть штаммы, такие как TG1 E. coli, XL1-Blue и ER2738, которые можно использовать для заражения фагами после культивирования в больших количествах. Мы создали библиотеки антител с большой емкостью до 10^9, обладающие хорошим разнообразием и высокой скоростью вставки фрагментов, что способствует скринингу scFv-антител с высокой аффинностью и специфичностью в соответствии с требованиями клиентов. Мы также можем экспрессировать и очищать отобранные scFv в соответствии с потребностями клиентов. В дополнение к прокариотическим системам экспрессии, мы также располагаем различными эукариотическими системами экспрессии для белков антител, такими как системы экспрессии в клетках млекопитающих, дрожжевых клетках, клетках растений и насекомых и т. д., что позволяет нам производить высококачественные scFv-антитела для наших клиентов. Компания Alpha Lifetech предоставит комплексные услуги по созданию библиотек scFv для удовлетворения различных потребностей ученых по всему миру.
Рабочий процесс создания библиотеки антител scFv
| Шаги | Спецификация | Хронология |
|---|---|---|
| Шаг 1: Выделение РНК и обратная транскрипция | Были взяты образцы селезенки мыши, гибридомы, а также клетки BPMC человека и кролика, из которых была выделена РНК и проведена обратная транскрипция. | 1 день |
| Шаг 2: Амплификация и выделение генов VH и VL. | Амплификация генов VH и VL с использованием кДНК в качестве матрицы. | 2 дня |
| Шаг 3: Сплайсинг и амплификация гена scFv | С помощью SOE-PCR гены VH и VL были лигированы с линкером для получения фрагмента гена scFv, после чего была проведена процедура выделения из геля. | 2 дня |
| Шаг 4: Ферментативное расщепление и лигирование | Ген scFv был расщеплен плазмидой и лигирован с помощью ДНК-лигазы Т4. | 2 дня |
| Шаг 5: Трансформация рекомбинантных плазмид | Библиотеки первичных антител получают путем электрохимической или химической трансформации. | 3 дня |
| Шаг 6: Определение емкости библиотеки scFv | Проведите титрование библиотеки и рассчитайте ее размер. | 2 дня |
| Шаг 7: Определение частоты вставки и разнообразия. | Проведите титрование библиотеки и рассчитайте ее размер. | 2 дня |
Системы множественной экспрессии
Доступны различные системы экспрессии scFv: прокариотические, млекопитающие, дрожжевые, растительные, насекомые и т. д., и их можно экспрессировать в больших масштабах с помощью E. coli.
Множество видов
Создание библиотек scFv-антител различных видов, включая человека, мышей, кроликов, овец, крупный рогатый скот и др.
Различные типы библиотек
Существует несколько типов библиотек scFv-антител: иммунизированные, природные, полусинтетические и синтетические библиотеки.
Множественные фаги
Широкий выбор фагов: M13, T4, T7 и λ-фаги для отображения scFv.
Персонализированная настройка
Подробная программа персонализированной настройки (включая анализ последовательности, разработку праймеров, экспериментальное проектирование и синтез генов и т. д.)
Профессиональный и надежный
Профессиональная работа лабораторного персонала, сокращение цикла создания библиотек, подготовка высококачественных библиотек scFv.
Дополнительные услуги
Предоставляет услуги по иммунизации животных с коротким периодом вакцинации и высокой достоверностью антител в сыворотке крови.
Достижение результата
Созданные библиотеки scFv-антител отличаются большим объемом и разнообразием, а также высокой частотой вставки фрагментов.



2018-07-16 

