Служба построения библиотеки антител scFv
Введение в услугу по созданию библиотеки антител scFv
scFv представляет собой небольшой фрагмент антитела, состоящий из тяжелой цепи (VH) и легкой цепи (VL), соединенных коротким гибким пептидом, размером около 25 кДа, и является наиболее часто используемым типом рекомбинантного антитела. scFv имеет небольшой размер, специфичен, может быть произведен в больших масштабах в прокариотической системе экспрессии и имеет неповрежденный антигенсвязывающий сайт, который широко используется в диагностике и лечении заболеваний. Благодаря своему небольшому размеру он легче быстро проникает в опухоли при лечении заболеваний; кроме того, scFv имеет преимущества короткого времени удержания в нецелевых тканях и быстрого очищения сыворотки, что делает его имеющим большой потенциал для применения в визуализации опухолей. Обычные библиотеки антител scFv представляют собой библиотеки фагового дисплея, кроме того, для построения библиотек scFv также могут использоваться технологии рибосомного дисплея, дисплея дрожжевых клеток, дисплея клеток млекопитающих и бактериального дисплея.
Alpha Lifetech может предоставить
Alpha Lifetech имеет хорошо зарекомендовавшую себя систему построения библиотеки антител scFv и может подготовить библиотеки антител scFv на клетках селезенки иммунизированных животных и В-лимфоцитах человеческого происхождения. Кроме того, мы анализируем все аспекты информации о последовательности антител scFv и проверяем ее с помощью различных анализов, таких как анализ EC50, анализ аффинности, проверка сквозной блокировки и т. д. У нас есть различные платформы фагов, включая фаги M13, T4, T7 и λ, которые могут удовлетворить различные потребности клиентов и предоставить персонализированные услуги по построению библиотеки scFv. Наши исследователи имеют многолетний опыт в построении библиотек и хорошо умеют создавать различные типы библиотек отображения фагов scFv, такие как иммунные библиотеки, естественные библиотеки, полусинтетические библиотеки, синтетические библиотеки и т. д. Созданная нами библиотека антител scFv имеет большую емкость библиотеки и богатое разнообразие, что позволяет производить высокоаффинные антитела scFv. Мы предоставили услуги по созданию библиотеки антител scFv против бактерий, вирусов, токсинов, рецепторов и опухолевых антигенов, пептидов и т. д. для многих отечественных и зарубежных учреждений. Технология отображения фаговых антител проста в эксплуатации, имеет короткий экспериментальный период и может экспрессировать желаемые scFv в больших количествах с помощью системы экспрессии млекопитающих. Технология рекомбинантных антител scFv, полученных с помощью системы отображения фагов, не требует подготовки гибридомных клеток и позволяет напрямую клонировать ген scFv в желаемый фаговый вектор.
Различные типы библиотек антител | Фаговый вектор | Бактерия-хозяин | Разновидность | Ткани или клетки | Максимальная вместимость библиотеки |
библиотека иммунизации scFv | pMECS, pComb3X, pCANTAB 5E и т. д. | TG1 E. coli, XL1-Blue, ER2738 и т. д. | Люди, крысы, кролики, овцы, крупный рогатый скот и т. д. | Клетки селезенки животных, PBMC и гибридомы | 1×10^9 |
scFv наивная библиотека | |||||
полусинтетическая библиотека scFv | |||||
библиотека синтеза scFv |
Процесс создания библиотеки антител scFv
Мы умеем связывать VH с VL с помощью гибкого пептида для создания scFv, необходимого нашим клиентам. Мы можем предоставить нашим клиентам широкий спектр фаговых векторов, включая pMECS, pComb3X и pCANTAB 5E. У нас есть такие штаммы, как TG1 E. coli, XL1-Blue и ER2738, которые можно использовать для заражения фагом после расширенной культуры. Мы создали библиотеки антител с большой емкостью библиотеки до 10^9, с хорошим разнообразием и высокой скоростью вставки фрагментов, что способствует скринингу антител scFv с высокой аффинностью и специфичностью для удовлетворения клиентов. Мы также можем экспрессировать и очищать скрининговый scFv в соответствии с потребностями клиентов. В дополнение к прокариотическим системам экспрессии у нас также есть различные эукариотические системы экспрессии для белков антител, такие как системы экспрессии клеток млекопитающих, дрожжевых клеток, растений и насекомых и т. д., которые позволяют нам производить высококачественные антитела scFv для наших клиентов. Alpha Lifetech предоставит комплексные услуги по созданию библиотеки scFv для удовлетворения различных потребностей ученых по всему миру.
Рабочий процесс службы создания библиотеки антител scFv
Шаги | Спецификация | Хронология |
---|---|---|
Шаг 1: Извлечение РНК и обратная транскрипция | Были взяты мышиная селезенка, гибридома, человеческие и кроличьи BPMC, РНК была извлечена и подвергнута обратной транскрипции. | 1 день |
Шаг 2: Амплификация и восстановление генов VH и VL | Амплификация генов VH и VL с использованием кДНК в качестве матрицы | 2 дня |
Шаг 3: Сплайсинг и амплификация гена scFv | С помощью SOE-ПЦР гены VH и VL были лигированы с линкером для получения фрагмента гена scFv с последующим восстановлением в геле. | 2 дня |
Шаг 4: Ферментативное расщепление и лигирование | Ген scFv был расщеплен плазмидой и лигирован ДНК-лигазой T4. | 2 дня |
Шаг 5: Трансформация рекомбинантных плазмид | Первичные библиотеки антител получают путем электрохимического или химического преобразования. | 3 дня |
Шаг 6: Определение емкости библиотеки scFv | Титровать библиотеку и рассчитывать ее размер | 2 дня |
Шаг 7: Определение скорости вставки и разнообразия | Титровать библиотеку и рассчитывать ее размер | 2 дня |

Системы множественного выражения
Доступны многочисленные системы экспрессии scFv: прокариотические, млекопитающие, дрожжи, растения, насекомые и т. д., и могут экспрессироваться в больших масштабах с помощью E. coli.

Множественные виды
Создание библиотек антител scFv различных видов: включая человека, мышей, кроликов, овец, крупный рогатый скот и т. д.

Несколько типов библиотек
Несколько типов библиотек антител scFv: иммунизированные, натуральные, полусинтетические и синтетические библиотеки.

Множественные фаги
Широкий выбор фагов: фаги M13, T4, T7 и λ для отображения scFv.

Персонализированная настройка
Подробная индивидуальная программа настройки (включая анализ последовательности, разработку праймеров, экспериментальное проектирование и синтез генов и т. д.)

Профессионально и надежно
Профессиональная работа лабораторного персонала, сокращение цикла создания библиотеки, подготовка высококачественных библиотек scFv.

Дополнительные услуги
Предоставляет услуги по иммунизации животных с коротким периодом иммунизации и высокой активностью сывороточных антител.

Доставка результата
Сконструированные библиотеки антител scFv являются большими и разнообразными с высокой скоростью вставки фрагментов.