Моноклональные антитела (мАт) являются пионерами в разработке лекарственных препаратов на основе антител. Более 100 моноклональных антител одобрены для лечения рака и инфекционных заболеваний, они занимают свою нишу на рынке разработки лекарств и демонстрируют свою уникальную терапевтическую ценность. Технология выделения антител из отдельных B-клеток, как технология нового поколения, позволяет эффективно и быстро выделять антитела из отдельных B-клеток, что является прорывом в технологии производства антител после гибридом и фагового дисплея. Технология сортировки отдельных B-клеток может использоваться для получения антител против различных видов животных, таких как кролики, мыши, верблюды, овцы и куры. Технология выделения антител из отдельных B-клеток обладает выдающимися преимуществами, такими как высокая специфичность, высокая активность и высокая аффинность. Основываясь на платформе сортировки отдельных B-клеток, компания Alpha Lifetech имеет преимущества во времени скрининга и получении высококачественных антител. Она может предоставлять услуги по разработке, синтезу и модификации антигенов, иммунитету животных, обогащению и скринингу отдельных B-клеток, секвенированию отдельных клеток, высокопроизводительному скринингу, экспрессии и очистке, а также комплексные технические услуги, такие как функциональная верификация, для удовлетворения разнообразных потребностей клиентов.

Для иммунизации экспериментальных животных (таких как мыши, кролики и т. д.) следует подобрать соответствующий антиген, чтобы они могли выработать специфические антитела против этого антигена.

Иммунизация животных — это начальный этап выработки антител. Иммунизация животных — это использование механизма гуморального иммунного ответа самого организма: посредством непрерывной стимуляции антигенами животные вырабатывают сильный иммунный ответ, а затем секретируют специфические антитела против конкретных антигенов.

В-клетки были выделены из периферической крови, селезенки или лимфатических узлов иммунизированных животных. Эти В-клетки были иммунологически стимулированы для выработки антител против специфических антигенов.

Физическими или химическими методами (такими как центрифугирование в градиенте плотности, разделение с помощью магнитных шариков и т. д.) происходит обогащение В-клеток, удаление примесей, повышение чистоты В-клеток и эффективности последующего разделения.

Для скрининга отдельных B-клеток из обогащенных B-клеток с целью получения целевых антител можно использовать флуоресцентную проточную цитометрию (FACS), магнитную сепарацию клеток (MACS), микрофлюидную сортировку клеток (MCS) или другие высокопроизводительные методы скрининга в сочетании со специфической маркировкой антигенов.

Когда из смешанной популяции B-клеток выделяют отдельную B-клетку, необходимо секвенировать ее гены антител с помощью технологии секвенирования отдельных клеток и проанализировать их для получения информации о последовательности ДНК вариабельного региона тяжелой цепи (VH) и вариабельного региона легкой цепи (VL). Технология секвенирования отдельных клеток включает в себя три основных этапа: выделение отдельной клетки, внутриклеточная амплификация нуклеиновых кислот и анализ секвенирования. Принцип секвенирования отдельных клеток заключается в амплификации следовой ДНК или РНК всего генома изолированных отдельных клеток для получения полного генома или транскриптома с высоким покрытием для высокопроизводительного секвенирования.

Благодаря высокопроизводительному скринингу можно одновременно получить последовательности генов антител тысяч B-клеток, что значительно ускоряет процесс открытия антител. Полученная информация о последовательностях может быть использована для создания и скрининга библиотек антител.

Рис. 2. Схема процесса захвата отдельных B-клеток, создания библиотеки, высокопроизводительного скрининга и секвенирования.(Источник: Массовое параллельное секвенирование рецепторов B-клеток на уровне отдельных клеток позволяет быстро обнаруживать разнообразные антиген-реактивные антитела..)

(1) Рекомбинантный белок: ≥2,5 мг, чистота белка >85%, молекулярная масса белка более 10 кДа, концентрация растворимого белка от 0,5 до 5 мг/мл. Если требуется аффинная очистка антигена, необходимо дополнительно 10 мг рекомбинантного белка.

(2) Полипептиды и малые молекулы: чистый пептид ≥10 мг, чистота пептида >90%, не менее 10 аминокислот, связанный с KLH/BSA/OVA или другими белками-носителями; малые молекулы требуют предварительной оценки структуры.