Моноклональные антитела (mAb) как пионеры в области лекарств-антител, более 100 моноклональных антител были одобрены для лечения рака, инфекционных заболеваний, собственного рынка разработки лекарств и демонстрируют свою уникальную терапевтическую ценность. Технология антител отдельных В-клеток, как новое поколение технологии разработки антител, позволяет эффективно и быстро изолировать антитела из отдельных В-клеток, что является прорывом в технологии производства антител после гибридомы и фагового дисплея. Технология сортировки отдельных В-клеток может использоваться для генерации антител против нескольких видов, таких как кролики, мыши, верблюды, овцы и куры. Технология сортировки отдельных В-клеток имеет выдающиеся преимущества, такие как высокая специфичность, высокая активность и высокое сродство. Основанная на платформе сортировки отдельных В-клеток, Alpha Lifetech имеет преимущества во времени скрининга и получении высококачественных антител. Она может обеспечить разработку антигена, синтез и модификацию, иммунитет животных, скрининг обогащения отдельных В-клеток, секвенирование отдельных клеток, высокопроизводительный скрининг, экспрессию и очистку, комплексные технические услуги, такие как функциональная проверка, для удовлетворения разнообразных потребностей клиентов.

Выберите подходящий антиген для подопытных животных (например, мышей, кроликов и т. д.) для стимуляции иммунитета, чтобы они могли вырабатывать специфические антитела против антигена.

Иммунизация животных — это начальная стадия выработки антител. Иммунизация животных — это использование механизма гуморального иммунного ответа самого организма, посредством непрерывной стимуляции антигенами животные вырабатывают сильный иммунный ответ, а затем секретируют специфические антитела против специфических антигенов.

В-клетки были выделены из периферической крови, селезенки или лимфатических узлов иммунных животных. Эти В-клетки были иммунологически стимулированы для выработки антител против определенных антигенов.

Обогащение В-клеток, удаление примесных клеток физическими или химическими методами (такими как центрифугирование в градиенте плотности, разделение магнитными частицами и т. д.) повышает чистоту В-клеток и эффективность последующего разделения.

Для скрининга отдельных В-клеток из обогащенных В-клеток с целью получения целевых антител можно использовать сортировку клеток с активацией флуоресценции (FACS), магнитное разделение клеток (MACS), микрофлюидную сортировку клеток (MCS) или другие высокопроизводительные методы скрининга в сочетании с антигенспецифической маркировкой.

Когда отдельная В-клетка выделяется из смешанной популяции В-клеток, ее гены антител необходимо секвенировать с помощью технологии секвенирования отдельных клеток и проанализировать для получения информации о последовательности ДНК вариабельной области тяжелой цепи (VH) и вариабельной области легкой цепи (VL). Технология секвенирования отдельных клеток в основном включает три этапа: выделение отдельной клетки, внутриклеточную амплификацию нуклеиновой кислоты и анализ секвенирования. Принцип секвенирования отдельных клеток заключается в амплификации следа ДНК или РНК всего генома изолированных отдельных клеток для получения полного генома или транскриптома с высоким покрытием для высокопроизводительного секвенирования.

Благодаря высокопроизводительному скринингу последовательности генов антител тысяч В-клеток могут быть получены одновременно, что значительно ускоряет скорость обнаружения антител. Эта информация о последовательностях может быть в дальнейшем использована для построения библиотеки антител и скрининга.

Рис.2 Схематическая диаграмма захвата одной В-клетки, создания библиотеки, высокопроизводительного скрининга и секвенирования.(Источник ссылки:Массовое параллельное секвенирование рецепторов В-клеток отдельных клеток позволяет быстро обнаруживать разнообразные антигенреактивные антитела.）

(1)Рекомбинантный белок: ≥2,5 мг, чистота белка >85%, молекулярная масса белка более 10 кДа, концентрация растворимого белка от 0,5 до 5 мг/мл. Если требуется очистка антигена с помощью аффинности, требуется дополнительно 10 мг рекомбинантного белка.

(2) Полипептиды и малые молекулы: чистый пептид ≥10 мг, чистота пептида >90%, не менее 10 аминокислот, связывание KLH/BSA/OVA или других белков-носителей; малые молекулы требуют предварительной структурной оценки.