Услуги по созданию стабильных клеточных линий

Alpha Lifetech располагает клеточной платформой, инфицированной лентивирусом, которая позволяет настраивать экспериментальный процесс для различных типов штаммов трансмутации, устойчивых к клеточным факторам.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Услуги по созданию стабильных клеточных линий

Alpha Lifetech много лет глубоко вовлечена в сферу разработки процесса создания стабильной клеточной линии. Она создала идеальную платформу процесса создания стабильной клеточной линии с более чем 300 видами опухолевых клеток и первичных клеток, которые могут поставлять стабильные клеточные линии, экономя время на научные исследования или проектные исследования и облегчая последующее производство. Alpha Lifetech также может предоставлять клиентам такие услуги, как разработка процесса штамма, скрининг штамма, создание штамма, рекомбинантный белок и производство антител, обеспечивая исследовательскую базу для новых лекарств.

Alpha Lifetech имеет платформу клеток, инфицированных лентивирусом, которая может настраивать экспериментальный процесс для различных типов штаммов трансмутации, устойчивых к клеткам. Мы использовали технологию нокаута генов для создания линий клеток с нокаутом CRISPR/Cas9. Методы сверхэкспрессии генов и подавления генов использовались для стабилизации штаммов трансмутации. Интеграция генов по сайту завершает услуги по созданию линий клеток для интеграции вершин.

Введение в создание стабильной клеточной линии

Стабильная клеточная линия относится к клеточной линии, которая интегрирует чужеродные гены в геном клетки-хозяина, так что чужеродные гены могут стабильно экспрессироваться в клетке-хозяине в течение длительного времени. Принцип заключается в том, чтобы свести чужеродный ген к вектору с определенной устойчивостью, трансфицировать клетки-хозяева, интегрировать чужеродный ген в хромосому хозяина и провести скрининг генов устойчивости, содержащихся в векторе, для получения стабильных клеточных линий с высокой экспрессией целевого белка или стабильным подавлением целевого гена, которые соответствуют требованиям эксперимента.

Alpha Lifetech располагает независимым хранилищем, идеальной системой заморозки и хранения клеток, а также более чем 300 видами опухолевых клеток и первичных клеток на ваш выбор, предназначенными для ваших научных исследований.

Процесс создания стабильной клеточной линии

стабильная клеточная линия-Alpha Lifetech

Метод создания стабильной клеточной линии

Методы создания стабильных линий клеток включают лентивирусный, транспозонный, CRISPR/Cas9-опосредованный и плазмидный скрининг.

лентивирус-опосредованный является одним из наиболее часто используемых методов для создания стабильных клеточных линий. Этот подход имеет преимущество инфицирования почти всех типов клеток и интеграции генетического материала в геном клетки-хозяина для стабильной экспрессии в течение длительного периода. Однако эта система имеет определенные ограничения, а лентивирус имеет ограниченную емкость упаковки, поэтому он не подходит для транскрипции генов с длинными транскрипционными областями

По сравнению с лентивирусным опосредованным, транспозонный опосредованный не имеет ограничений по размеру гена, и с постоянной оптимизацией технологии эффективность вставки транспозона была улучшена в несколько раз. Недостатком является то, что определенные ограничения на первичные клетки и клетки трудно трансфицировать.

CRISPR/Cas9-опосредованный содержит нокаут гена crispr и нокаут гена crispr. Нокаут гена Crispr относится к внедрению двухцепочечного разрыва ДНК, что приводит к потере функции целевого гена. Нокаут гена Crispr относится к внедрению чужеродных фрагментов ДНК в определенные гены, которые могут быть использованы для исправления дефектных генов или внедрения новых функциональных генов.

Плазмидный скрининг — это наиболее примитивная схема построения клеточной линии, в которой необходимо лишь успешно трансфицировать целевую плазмиду в клетку и использовать соответствующую резистентность при долгосрочном скрининге. Тогда есть определенная вероятность получения стабильных клеточных линий.

Методы создания различных стабильных клеточных линий

Метод посредничества	Система лентивирусов	Транспозонная система	CRISP/Cas9-опосредованный	Скрининг плазмид
Пропускная способность перевозчика	5 кб	10 кб	5 кб	10 кб
Опосредованная эффективность	Высокий	Нормальный	Нормальный	Низкий
Хронология	1-2 недели	3-4 недели	3-4 недели	4-6 недель
Преимущество	Быстро и эффективно	Безопасность и стабильность	Интеграция с фиксированной точкой	Более низкая стоимость
Недостаток	Риск биологической безопасности	Изобилие выражений нормальный	Трансдукция CAS9 сложна и затратна	Низкая эффективность и нестабильность

Технические трудности при создании стабильных клеточных линий

Перед масштабированием процесса небольшой биореактор используется для определения таких параметров, как газ, система культуральной жидкости, минимальное гидродинамическое напряжение, приложенное к клеткам и т. д., чтобы обеспечить кросс-масштабное культивирование. Однако даже если соответствующие параметры процесса определены, среда больших биореакторов в производителе будет неравномерной, и легко выйти из строя. Alpha Lifetech имеет многолетний опыт в масштабировании процесса культивирования, что позволяет в определенной степени избегать ошибок, снижать риски и значительно повышать показатель успешности. В то же время Alpha Lifetech обеспечивает постоянство используемых партий сырья и сред, снижая показатель неудач при масштабировании процесса культивирования клеток.

Alpha Lifetech имеет комплексную платформу разработки стабильной клеточной линии для обеспечения стабильности клеточных линий во время производства. Мы также можем предоставить вам индивидуальные услуги для удовлетворения ваших потребностей.

Содержание услуги по созданию стабильных клеточных линий

Содержание	Хронология
Культуральная линия клеток HEK293 предоставлена заказчиком.	3-5 месяцев
Конструирование плазмиды sgRNA-Cas9 (с использованием скринингового гена G418).
sgRNA-Cas9 и шаблон репарационной ДНК были совместно перенесены в клеточную линию HEK293.
Скрининг моноклональной клеточной линии (ген GFP) стук положительного клона).
Доставка: Вектор, штамм с нокаутированным геном GFP, результаты секвенирования, все необработанные данные, лабораторный отчет

Клетки можно отследить

Клетки приобретаются у профессиональных организаций, таких как ATCC, и могут предоставить доказательство соответствия вашим требованиям к регистрации.

Преимущество производства

Компания Alpha Lifetech имеет многолетний опыт удовлетворения различных потребностей в разработке; у нас есть различные ячейки, независимый цех по хранению, идеальная заморозка ячеек и система управления хранением.

Контроль качества проекта

Каждый проект проходит строгий контроль качества, чтобы гарантировать поставку клиентам клеточных линий, соответствующих высоким стандартам.

Техническое преимущество

Помимо инженеров с обширным опытом работы в области клеточных технологий, у нас есть передовые технологические эволюционные алгоритмы для улучшения условий работы реактора и изменения параметров процесса.

Если у вас возникнут какие-либо вопросы, пожалуйста, обращайтесь к нам в любое время.