Услуги по созданию стабильных клеточных линий

Компания Alpha Lifetech разработала платформу для заражения клеток лентивирусом, которая позволяет адаптировать экспериментальный процесс для различных типов стабильных трансмутационных штаммов клеток.

СВЯЗАТЬСЯ С НАМИ

Услуги по созданию стабильных клеточных линий

Компания Alpha Lifetech много лет активно занимается разработкой процессов создания стабильных клеточных линий. Она создала совершенную платформу для создания стабильных клеточных линий, включающую более 300 видов опухолевых и первичных клеток, что позволяет получать стабильные клеточные линии, экономя время на научных исследованиях или проектах, а также упрощая последующее производство. Alpha Lifetech также предоставляет клиентам услуги по разработке технологических процессов, скринингу и созданию штаммов, производству рекомбинантных белков и антител, обеспечивая тем самым исследовательскую базу для новых лекарственных препаратов.

Компания Alpha Lifetech располагает платформой для культивирования клеток, инфицированных лентивирусом, что позволяет адаптировать экспериментальный процесс для получения различных типов стабильных трансмутационных штаммов клеток. Мы использовали технологию нокаута генов для создания клеточных линий с нокаутом генов с помощью CRISPR/Cas9. Для стабилизации трансмутационных штаммов применялись методы сверхэкспрессии и подавления генов. Интеграция генов в определенные участки завершает услуги по созданию клеточных линий с интеграцией в вершину.

Введение в конструирование стабильных клеточных линий

Стабильная клеточная линия — это клеточная линия, в которой чужеродные гены интегрированы в геном клетки-хозяина, так что эти гены могут стабильно экспрессироваться в клетке-хозяине в течение длительного времени. Принцип заключается в том, чтобы преобразовать чужеродный ген в вектор с определенной устойчивостью, трансфицировать клетки-хозяина, интегрировать чужеродный ген в хромосому клетки-хозяина и провести скрининг генов устойчивости, содержащихся в векторе, для получения стабильных клеточных линий с высокой экспрессией целевого белка или стабильным подавлением целевого гена, соответствующих требованиям эксперимента.

Компания Alpha Lifetech располагает собственным цехом хранения, идеальной системой заморозки и хранения клеток, а также предлагает на выбор более 300 видов опухолевых и первичных клеток, предназначенных для ваших научных исследований.

Процесс создания стабильных клеточных линий

стабильная клеточная линия - Alpha Lifetech

Метод создания стабильной клеточной линии

К методам создания стабильных клеточных линий относятся лентивирусный, транспозонный, CRISPR/Cas9-опосредованный и плазмидный скрининг.

Лентивирусная транскрипция — один из наиболее часто используемых методов создания стабильных клеточных линий. Преимущество этого подхода заключается в возможности инфицирования практически всех типов клеток и интеграции генетического материала в геном клетки-хозяина для стабильной экспрессии в течение длительного периода. Однако эта система имеет определенные ограничения, а лентивирус обладает ограниченной упаковочной способностью, поэтому он не подходит для транскрипции генов с длинными транскрипционными областями.

По сравнению с лентивирусным методом, транспозонный метод не имеет ограничений по размеру генов, и благодаря непрерывной оптимизации технологии эффективность вставки транспозонов была улучшена в несколько раз. Недостатком является наличие определенных ограничений на первичные клетки и сложность трансфекции клеток.

Технология CRISPR/Cas9 включает в себя нокаут генов и введение генов. Нокаут генов подразумевает внесение двуцепочечных разрывов ДНК, что приводит к потере функции целевого гена. Введение генов подразумевает внедрение фрагментов чужеродной ДНК в определенные гены, что может быть использовано для восстановления дефектных генов или введения новых функциональных генов.

Плазмидный скрининг — это наиболее примитивная схема конструирования клеточных линий, которая требует лишь успешной трансфекции целевой плазмиды в клетку и использования соответствующей устойчивости в ходе длительного скрининга. Таким образом, существует определенная вероятность получения стабильных клеточных линий.

Методы создания различных стабильных клеточных линий

Метод медиации	Лентивирусная система	Транспозонная система	CRISP/Cas9-опосредованный	Скрининг плазмид
Пропускная способность оператора	5 кб	10 КБ	5 кб	10 КБ
Опосредованная эффективность	Высокий	Нормальный	Нормальный	Низкий
Хронология	1-2 недели	3-4 недели	3-4 недели	4-6 недель
Преимущество	Быстро и эффективно	Безопасность и стабильность	Интеграция фиксированных точек	Более низкая стоимость
Недостаток	Риск биобезопасности	обилие экспрессии нормальный	Трансдукция CAS9 — сложный и дорогостоящий процесс.	Низкая эффективность и нестабильность

Технические трудности при создании стабильных клеточных линий

Перед масштабированием процесса используется небольшой биореактор для определения таких параметров, как газовая смесь, система культуральной жидкости, минимальное гидродинамическое напряжение, воздействующее на клетки, и т. д., чтобы обеспечить возможность культивирования в разных масштабах. Однако даже при правильном определении параметров процесса, условия в больших биореакторах на предприятии будут нестабильными, и легко могут возникнуть сбои. Компания Alpha Lifetech обладает многолетним опытом масштабирования процессов культивирования, что позволяет в определенной степени избежать ошибок, снизить риски и значительно повысить вероятность успеха. В то же время Alpha Lifetech обеспечивает стабильность используемых сырьевых материалов и питательных сред, снижая вероятность неудач при масштабировании процесса клеточного культивирования.

Компания Alpha Lifetech располагает комплексной платформой для разработки стабильных клеточных линий, обеспечивающей их стабильность в процессе производства. Мы также можем предоставить вам услуги, адаптированные под ваши потребности.

Содержание услуги по созданию стабильных клеточных линий

Содержание	Хронология
Клеточная линия HEK293 для культивирования предоставлена заказчиком.	3-5 месяцев
Создание плазмиды sgRNA-Cas9 (с геном скрининга G418).
sgRNA-Cas9 и репарационная ДНК-матрица были одновременно перенесены в клеточную линию HEK293.
Скрининг моноклональных клеточных линий (ген GFP) нокаутирующий позитивный клон).
Доставка: вектор, штамм с внедренным геном GFP, результаты секвенирования, все исходные данные, лабораторный отчет.

Клетки можно отследить

Эти ячейки приобретаются у профессиональных организаций, таких как ATCC, и могут служить подтверждением соответствия вашим требованиям регистрации.

Производственное преимущество

Компания Alpha Lifetech обладает многолетним опытом, позволяющим удовлетворять разнообразные потребности в разработке лекарственных препаратов; мы располагаем различными типами ячеек, собственной мастерской по хранению, оборудованием для идеальной заморозки ячеек и системой управления хранением.

контроль качества проекта

Каждый проект проходит строгие процессы контроля качества, чтобы гарантировать поставку клиентам клеточных линий, отвечающих высоким стандартам.

Техническое преимущество

Помимо инженеров с обширным опытом работы в области клеточных технологий, мы используем передовые эволюционные алгоритмы для улучшения условий в реакторе и модификации параметров процесса.

Если у вас возникнут какие-либо вопросы, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться к нам в любое время.