Антитело VHH — это естественное антитело с отсутствующей легкой цепью (VL), обнаруженное в сыворотке верблюдов. Структура антитела VHH проста и состоит только из двух тяжелых цепей (VH). Нанотела включают вариабельную область тяжелой цепи (VHH) с молекулярной массой около 15 кДа. Антитело VHH обладает нормальной способностью распознавать антигены и демонстрирует превосходное сродство, превосходную специфичность, превосходную стабильность и превосходное проникновение. Антитела к этой структуре с тех пор были обнаружены у других животных, таких как альпаки и акулы. Нанотела, которые содержат только одну вариабельную область тяжелой цепи и две обычные области CH2 и CH3, несмотря на отсутствие домена VL, являются высокостабильным однодоменным антителом и наименьшей известной единицей связывания с активностью антитела. Alpha Lifetech может предоставить клиентам, включая подготовку нанотел, создание и скрининг библиотеки нанотел, экспрессию нанотел VHH и ряд услуг, через платформу синтеза нанотел и разработки фагового дисплея, она может эффективно создавать и скрининг, включая различные типы библиотек фаговых антител, предоставлять нашим клиентам специфические, высокоспецифичные решения для антител. Мы также можем разрабатывать профессиональные стратегии гуманизации антител для наших клиентов, которые могут быть гуманизированы для нанотел, и наша компания почти эквивалентна человеческим антителам.

Во-первых, альпака без каких-либо заболеваний позволяет иммуногенам стимулировать ее иммунную систему для выработки иммунного ответа, и эти животные могут вырабатывать однодоменные антитела. Затем мы изолировали отдельные В-клетки из PBMC альпаки, и РНК из В-клеток была извлечена и транскрибирована в кДНК. Наконец, наконец, использовалась в качестве шаблона и скринировалась наша целевая последовательность VHH с помощью электрофореза. Затем мы провели анализ секвенирования скринированной последовательности антител VHH, что может улучшить стабильность и сродство подготовленного антитела VHH. В то же время мы также можем проводить направленный мутагенез и скрининг стабильности антител VHH. Мы можем получить более высокую стабильность мутантов антител VHH, вводя специальные методы, такие как определенные специфические мутации для скрининга. Затем инженер вставлял полученную последовательность VHH в соответствующий вектор экспрессии (такой как плазмиды, вирусы и т. д.) для экспрессии антител VHH. Наконец, с помощью технологии фагового дисплея или технологии дрожжевого дисплея антитела VHH экспрессируются на поверхности хозяина, а затем с помощью покрытых антигенов и ИФА отбираются наноантитела, которые могут специфически связываться с целевым антигеном. Alpha Lifetech также секвенировала и проверила выбранные нанотела, чтобы гарантировать правильность и функциональную активность последовательностей нанотел, поставляемых клиентам.

Технология VHH использует различные достижения генной инженерии, так что целевой ген реплицируется и перестраивается вместе при нормальных обстоятельствах, что может обеспечить высокосвязывающий инструмент для других технологий, которые могут содержать различные метки, а антитела, полученные с помощью технологии VHH, удобны для очистки. Используя высокопроизводительные методы скрининга, Alpha Lifetech может скрининговать антитела VHH с определенными функциями, требуемыми клиентами, из большого количества антител за короткий период. Между тем, антитела VHH могут производиться бесконечно и экономично, когда антитела VHH подвергаются воздействию высоких температур и других растворителей. Антитела VHH могут быть генетически изменены для создания других применений, таких как превращение в каркасы, маркировка и изменение определенных аминокислот. Антитела VHH подходят для любой общей платформы с использованием обычных антител, таких как микротитровальные планшеты, электрохимические биосенсоры и устройства с латеральным потоком. Из-за меньшего размера антитела VHH могут иметь более высокую плотность в связывающем домене, так что антитела VHH имеют выдающееся преимущество в увеличении сигнала и, следовательно, более высокой чувствительности. В то же время антитело VHH имеет очень широкое применение в диагностике и лечении опухолей, диагностике воспалений, лечении заболеваний центральной нервной системы и других областях. Антитела VHH особенно полезны для мониторинга микотоксинов в пищевых продуктах и ​​кормах, поскольку их легко генетически модифицировать и они обладают превосходной стабильностью.

В процессе иммунизации мы используем различные иммуногены. В зависимости от свойств иммуногенов мы можем разделить их на природные антигены, рекомбинантные антигены, синтетические антигены и антигены малых молекул. К природным антигенам относятся вирусные иммуногены. Процесс очистки природных иммуногенов сложен, что также сложнее, чем у других иммуногенов, и стоимость очистки также выше. Вирусный иммуноген делится на вакцину с инактивированным вирусом, субъединичную вакцину, вирусную векторную вакцину и мРНК-вакцину. Цельная вакцина с инактивированным вирусом может стимулировать организм к выработке иммунного ответа, но вирус необходимо полностью инактивировать, а процесс приготовления более сложен. Для субъединичной вакцины мы использовали только вирусный поверхностный белок в качестве антигена, поэтому безопасность этого иммуногена высока, но для усиления иммунного эффекта необходимо добавить адъювант. После генетической модификации аденовирус и лентивирус используются в качестве векторов для индукции возникновения иммунного ответа посредством репликации и экспрессии вируса. Иммунный эффект эффективен и продолжительен, но процесс приготовления сложен, поэтому нам необходимо строго контролировать биологическую безопасность. Хотя мРНК можно напрямую импортировать в клетки, чтобы клетки могли экспрессировать антиген и стимулировать возникновение иммунного ответа, этот процесс более сложен, что требует от нас обеспечения стабильности и эффективности доставки мРНК. Хотя рекомбинантные антигены отличаются по конформации от природных антигенов, они могут подвергаться обширному промышленному производству. Низкомолекулярные белки или полипептидные антигены могут быть получены методами синтеза in vitro. Их структура контролируема, но она может быть сложной по конструкции. Низкомолекулярные антигены в основном представляют собой низкомолекулярные соединения, такие как пептиды и нуклеотиды, поскольку они сами по себе не являются иммуногенными, поэтому их можно использовать в качестве иммуногенов только после соединения с макромолекулярными носителями.

Молекулярная масса наноантител очень мала, обычно около 12-15 кДа, что составляет всего одну десятую от массы традиционного антитела IgG. Кристаллическая структура представляет собой мяч для регби диаметром около 2,5 нм и длиной около 4,2 нм. Уникальная молекулярная структура обеспечивает хорошее проникновение в ткани, более короткий период полувыведения и более высокий почечный клиренс через гематоэнцефалический барьер. Наноантитела состоят из комплементарных определяющих и остовных областей. Комплементарные решающие области включают CDR 1, CDR 2 и CDR 3. Диапазон длины от 3 до 28 аминокислот в области CDR 3 обеспечивает емкость библиотеки наноантител. По сравнению с областью CDR 3 традиционного антитела, состоящей всего из 8-15 аминокислот, некоторые области CDR 3 с более длинным CDR 3 помогли нам идентифицировать скрытые эпитопы на поверхности антигена. Область остова нанотел включает FR 1, FR 2, FR 3 и FR 4 с четырьмя гидрофильными аминокислотными мутациями на FR 2, и эта мутация повышает водорастворимость антитела. Специальная дисульфидная связь между CDR 1 и CDR 3 повышает стабильность антител при высоком давлении, высокой температуре, денатурации и других условиях, что способствует производству и сохранению нанотел, а также создает возможность новых методов введения.