අනුබද්ධතා මිනුම් වේදිකාව
Octet සහ Biacore-T2000 වේදිකාව මත පදනම්ව, Alpha Lifetech හට විශ්වාසදායක සම්බන්ධතා නිර්ණය සේවා සැපයිය හැකිය.
අපව අමතන්න01 (අ)
අනුබද්ධතා මිනුම් වේදිකාව
Octet සහ Biacore-T2000 වේදිකාව මත පදනම්ව, Alpha Lifetech හට විශ්වාසදායක සම්බන්ධතා නිර්ණය සේවා සැපයිය හැකිය. ප්රතිදේහ, සෛල, ප්රෝටීන, කුඩා අණු වැනි බහු සාම්පල සඳහා සම්බන්ධතා නිර්ණය අපට සැපයිය හැකිය. මතුපිට ප්ලාස්මන් අනුනාදය (SPR) සහ ජෛව ස්ථර මැදිහත්වීම (BLI) සම්බන්ධතා නිර්ණය ඇතුළු විවිධ සම්බන්ධතා නිර්ණය කිරීමේ ක්රම තිබේ.
Alpha Lifetech සතුව ELISA සහ Affinity නිර්ණය ඒකාබද්ධ කරන වෘත්තීය සහ නිවැරදි Affinity නිර්ණය කිරීමේ වේදිකාවක් ඇති අතර එය ලොව පුරා සිටින පාරිභෝගිකයින් සඳහා වෘත්තීය, කාර්යක්ෂම, වේගවත් සහ නිරවද්ය Affinity නිර්ණය කිරීමේ ප්රතිඵල සපයයි. පාරිභෝගිකයින්ට තෝරා ගැනීමට අපට ක්රම දෙකක් ඉදිරිපත් කළ හැකිය: වේගවත් Affinity නිර්ණය සහ නිරවද්ය Affinity නිර්ණය. වේගවත් Affinity නිර්ණය යනු තනි සාන්ද්රණ නිර්ණයකි, නිරවද්ය Affinity නිර්ණය විවිධ සාන්ද්රණයන්ගේ Affinity මැනිය හැකිය. විවිධ කුඩා අණු සංයෝග, පෙප්ටයිඩ, ප්රෝටීන, ඔලිගොනියුක්ලියෝටයිඩ සහ ඔලිගෝමර් මෙන්ම ලිපිඩ, බැක්ටීරියාභක්ෂක, වෛරස් සහ සෛල අතර අන්තර්ක්රියා අධ්යයනයට අදාළ වේ. Affinity මිනුම් වේදිකාවට Affinity ඖෂධ පරීක්ෂාව සහ පරීක්ෂාව, ප්රතිදේහ සොයා ගැනීම සහ පසුකාලීන පර්යේෂණ සඳහා පදනමක් තැබිය හැකිය.
බැඳීම පිළිබඳ හැඳින්වීම
අන්තර් අණුක අන්තර්ක්රියා, සම්බන්ධක ඖෂධ පරීක්ෂණ සහ ඖෂධ පරීක්ෂාව ඇගයීමේදී සම්බන්ධතාවය වැදගත් වේ. අන්තර් අණුක අන්තර්ක්රියා සමීකරණ මගින් විස්තර කළ හැකිය: L + R = LR, එහිදී L නිදහස් ලිගන්ඩ් නියෝජනය කරයි, R නොබැඳි ප්රතිග්රාහක නියෝජනය කරයි, සහ LR බැඳී ඇති ලිගන්ඩ්-ප්රතිග්රාහක සංකීර්ණ නියෝජනය කරයි. බන්ධන ප්රතික්රියා අන්තර් අණුක අන්තර්ක්රියා නිර්වචනය කරයි, එහිදී සමතුලිතතාවයට ළඟා වන තෙක් ප්රතික්රියාව අතරතුර බැඳී ඇති සහ නොබැඳි තත්වයන් අතර ගතික හුවමාරුව සිදු වේ. මෙය ප්රතික්රියාවේ අනුපාත නියතයන් දෙක වන Kon (බන්ධන අනුපාත නියතය) සහ Koff (විඝටන අනුපාත නියතය) මගින් විස්තර කළ හැකිය. බන්ධන නියතයේ (Ka) අන්යෝන්ය අගය වන Kd අගය, ප්රතික්රියා සම්බන්ධතාවය සඳහා වැදගත් නියතයක් වන Koff/Kon වේ. එබැවින්, අණු දෙකක් අතර බන්ධනය දැඩි වන තරමට සම්බන්ධතාවය වැඩි වේ. Kd අගය කුඩා වන තරමට, අනෙක් අතට. මෙම සමීකරණය අර්ධ-ලඝුගණක ප්රස්ථාරයක S-හැඩැති වක්රයක් ලෙස නිරූපණය කළ හැකි අතර, ලිගන්ඩ් සාන්ද්රණය x-අක්ෂයේ (ලඝුගණක පරිමාණ අක්ෂයේ) සහ y-අක්ෂයේ භාගික සීමාව ඇත. ඉරි සහිත රේඛාව 0.5 බන්ධන භාගයක Kd (1 nM) හි ලිගන්ඩ් සාන්ද්රණය නිරූපණය කරයි.
රූපය 1: සෛල මතුපිට ප්රතිග්රාහකයට බැඳී ඇති ලිගන්ඩ්හි විවිධ සාන්ද්රණයන්ගෙන් යුත් සිග්මොයිඩ් බන්ධන වක්රය. (යොමු මූලාශ්රය: හන්ටර් එස්ඒ, කොක්රාන් ජේආර්. ප්රෝටීන්-ප්රෝටීන් අන්තර්ක්රියා වල සම්බන්ධතාවය තීරණය කිරීම සඳහා සෛල බන්ධන පරීක්ෂණ: තාක්ෂණයන් සහ සලකා බැලීම්.)
සම්බන්ධතාවය තීරණය කිරීමේ ක්රම
ELISA බන්ධන සම්බන්ධතා තක්සේරුව
ප්රතිදේහ සම්බන්ධතාවය අධ්යයනය කිරීම සඳහා බහුලව භාවිතා වන තාක්ෂණය පදනම් වී ඇත්තේ ELISA ක්රමය මත වන අතර එය එහි පහසුව, වේගය, සරල බව, ඉහළ සංවේදීතාව සහ ශක්තිමත් නිශ්චිතතාව මගින් සංලක්ෂිත වේ. එයට ප්රතික්රියාකාරක කුඩා ප්රමාණයක් (එනම්, ප්රතිදේහ සහ ප්රතිදේහජනක) භාවිතා කළ හැකි අතර පිරිසිදු කිරීමේ ප්රතික්රියාකාරක අවශ්යතාවයකින් තොරව ප්රතිදේහ සම්බන්ධතාවය මැනිය හැකිය. ඝන පෘෂ්ඨයක් මත ප්රතිදේහජනකය නිශ්චල කර ප්රාථමික ප්රතිදේහයක් භාවිතයෙන් එය අනාවරණය කර ගැනීමෙන්, ලේබල් කරන ලද ද්විතියික ප්රතිදේහය එන්සයිම සම්බන්ධිත ප්රතිශක්තිකරණ විශ්ලේෂණය (ELISA) කියවනයක දත්ත කියවා විශ්ලේෂණය කිරීමට ප්රාථමික ප්රතිදේහය සමඟ ප්රතික්රියා කරයි.
රූපය 2: නිර්මාණය කරන ලද පෙප්ටයිඩ ඒවායේ ඉලක්ක වලට බන්ධනය කිරීම ඇගයීම සඳහා ELISA-සමාන පරීක්ෂණ. (යොමු මූලාශ්රය: හජිකාරිම්ලෝ, මේරියම්, සහ තවත් අය, 2022. SARS-CoV-2 මතුපිට ප්රෝටීන් S හඳුනා ගන්නා පෙප්ටයිඩ ඉක්මනින් නිර්මාණය කිරීම සඳහා පරිගණකමය ප්රවේශයක්.)
මතුපිට ප්ලාස්මන් අනුනාද (SPR) බන්ධන සම්බන්ධතා තක්සේරුව
SPR තාක්ෂණය ප්රධාන වශයෙන් වර්තන දර්ශකයේ වෙනස්කම් හඳුනා ගනී. සාම්ප්රදායික දෘශ්ය සංසිද්ධි සහ ආලෝකයේ අනුනාද සංසිද්ධිය ආධාරයෙන්, ජෛව අණු අතර අන්තර්ක්රියා සඳහා ජෛව සංවේදක විශ්ලේෂණ තාක්ෂණයක් ගොඩනගා ගත හැකි අතර ජෛව සංවේදක චිප් මත ලිගන්ඩ් සහ විශ්ලේෂක අතර අන්තර්ක්රියා අනාවරණය කර ගත හැකිය. ජෛව අණු අතර බන්ධනය සහ අන්තර්ක්රියා පිළිබඳ නිශ්චිත සංඥා ජීව විද්යාත්මක ප්රතික්රියා අතරතුර SPR කෝණවල ගතික වෙනස්කම් නිරීක්ෂණය කිරීමෙන් ලබා ගත හැකිය.
රූපය 3: H10/AGR2 බන්ධනයේ මතුපිට ප්ලාස්මෝන අනුනාද (SPR) විශ්ලේෂණය. (යොමු මූලාශ්රය: ගැරී, කැරොලිනා, සහ තවත් අය, 2018. ඉදිරිපස අනුක්රමික සමජාතීය 2 (AGR2) ට එරෙහිව නව පෙප්ටයිඩයක් හඳුනා ගැනීම, සංලක්ෂිත කිරීම සහ යෙදීම.)
ජෛව ස්ථර මැදිහත්වීම් (BLI) බන්ධන සම්බන්ධතා තක්සේරුව
ජෛව පටල මැදිහත්වීම් තාක්ෂණය යනු අන්තර් අණුක අන්තර්ක්රියා සහ ප්රෝටීන් සාන්ද්රණය තීරණය කිරීම සඳහා පුළුල් ප්රමාණාත්මක විශ්ලේෂණයක් සඳහා ප්රධාන වශයෙන් භාවිතා කරන ලේබල්-නිදහස්, තත්ය කාලීන අධීක්ෂණ දෘශ්ය හඳුනාගැනීමේ තාක්ෂණයකි. මෙම තාක්ෂණය සාම්පලයේ ජෛව පටලයේ ඝණකමෙහි වෙනස්කම් සෘජුවම අනාවරණය කිරීම සඳහා පරීක්ෂණ පාදක ජෛව සංවේදකයක් භාවිතා කරයි. මැදිහත්වීම් වර්ණාවලියේ විස්ථාපන වෙනස්කම් හඳුනා ගැනීමෙන්, සංවේදක මතුපිට අන්තර්ක්රියා කරන ජෛව අණු අතර බන්ධනය සහ විඝටනය අනාවරණය වන අතර, මැදිහත්වීම් වර්ණාවලියේ තත්ය කාලීන විස්ථාපනය (nm) ප්රදර්ශනය කෙරේ.
රූපය 4: aLDRG සහ කයිටිනොලිගොසැකරයිඩ අතර ජෛව ස්ථර අන්තර්මිතික (BLI) පරීක්ෂණය. (යොමු මූලාශ්රය: ලී, බිං, 2023. ආර්මිලේරියා විශේෂයේ රයිසෝමෝර්ෆ් සහ හයිෆේ අතර සංසන්දනාත්මක පිටපත් කිරීමේ ලක්ෂණ 541 LysM වසම් කෙරෙහි අවධාරණය කරමින් දිලීර සහජීවනයට සහභාගී වීම.)
BLI සහ SPR තාක්ෂණය සංසන්දනය කිරීම
| තාක්ෂණ නාමය | BLI (ජෛව-ස්ථර නිරෝධමිතිය) | SPR (මතුපිට ප්ලාස්මන් අනුනාදය) |
|---|---|---|
| මූලධර්මය | සංවේදක මතුපිට පරාවර්තනය වූ ආලෝකයේ මැදිහත්වීම් රටාවේ වෙනස්කම් මනින අතර, ජෛව ස්ථරයේ දෘශ්ය ඝණකමෙහි වෙනස්වීම් හරහා අණුක අන්තර්ක්රියා අනාවරණය කරයි. එය තත්ය කාලීන බන්ධන වක්රයක් (සෘජු මිනුම) සපයයි. | සංවේදක චිපයේ මතුපිට අසල වර්තන දර්ශකයේ සංඥා වෙනස්කම් හඳුනා ගැනීමෙන් අණුක අන්තර්ක්රියා මනිනු ලැබේ (ආලෝකය රන් සහ වීදුරු අතුරුමුහුණත සමඟ අන්තර්ක්රියා කරන විට සිදු වේ, වර්තන දර්ශකයේ වෙනස්කම් ඇති කරයි). දත්ත අනුනාද කෝණයේ වෙනස්කම් ලෙස පිළිබිඹු වේ (වක්ර මිනුම). |
| නිෂ්පාදක | සාර්ටෝරියස් | ජීඊ |
| උපකරණය | ForteBio ජෛව සංවේදක | SPR උපකරණය විවෘත කරන්න |
| පද්ධතිය | ForteBio ඔක්ටෙට් පද්ධතිය (අණුක අන්තර්ක්රියා විශ්ලේෂණය සඳහා) | TraceDrawer (ස්වීඩනයේ Ridgeview Instruments විසින් සංවර්ධනය කරන ලදී) |
| වාසි | 1. පුළුල් සාම්පල අනුකූලතාව, විශිෂ්ට ස්ථාවරත්වයක්, විශේෂයෙන් කුඩා අණු හඳුනා ගැනීම සඳහා (නියැදි සංශුද්ධතාවය සහ බෆර තත්වයන් සඳහා නිශ්චිත අවශ්යතා අඩු දැඩි වේ). බන්ධන අධ්යයනයන් සඳහා SSA චිප්ස් ලාභදායී වේ. 2. SPR හා සසඳන විට වේගවත් ප්රතිදානය සහ කෙටි අත්හදා බැලීමේ කාලය. | 1. දිගු සංවර්ධන ඉතිහාසයක්, BLI හා සසඳන විට ඉහළ සංවේදීතාවයක් ලබා දෙයි. 2. ඉහළ සම්බන්ධතා සහ නිශ්චිතතා දත්ත සහිත දුර්ලභ හෝ වටිනා ප්රෝටීන හඳුනා ගැනීම වැනි නිශ්චිත යෙදුම් සඳහා වැඩි නිරවද්යතාවයක් සහ ශක්තිමත් බවක්. |
| අවාසි | 1. SPR හා සසඳන විට දත්ත නිරවද්යතාවය තරමක් අඩුය. 2. උපකරණය ප්රවේශමෙන් නඩත්තු කිරීම අවශ්ය වේ. 3. SSA චිප පිරිවැය සාපේක්ෂව ඉහළ ය. | 1. ඉතා කුඩා අණු හඳුනා ගැනීම සඳහා ස්වාරක්ෂක කොන්දේසි අවශ්ය විය හැකි අතර, හඳුනාගැනීමේ අසාර්ථකත්වයේ අවදානම වැඩි කරයි. 2. චිප්ස් සාමාන්යයෙන් BLI වල භාවිතා කරන ඒවාට වඩා මිල අධිකයි. 3. දීර්ඝ අත්හදා බැලීම් වලදී නියැදි වාෂ්පීකරණය ගැටළුවක් විය හැක. |
| චිප් වර්ගය | SSA චිප් | NTA චිප් |
සම්බන්ධතා මිනුම් විෂය පථය
සම්බන්ධතාවය තීරණය කිරීම සඳහා ප්රතිදේහජනක-ප්රතිදේහ (ශක්තිමත් ප්රතිදේහජනක-ප්රතිදේහ, දුර්වල ප්රතිදේහජනක-ප්රතිදේහ), ප්රෝටීන්-ප්රෝටීන්, ප්රෝටීන්-පෙප්ටයිඩ, ප්රෝටීන්-කුඩා අණුවක් සහ ප්රෝටීන් DNA/RNA (aptamer) ඇතුළත් විය හැකිය. KD මැනීමේදී, මවුලික සාන්ද්රණයන්ගෙන් එකක් දැන ගැනීම අවශ්ය වේ. කුඩා අණු බන්ධනය වන විට, එක් අණුක බරක් ඩෝල්ටන් 150 ට වඩා අඩු විය නොහැක.
| වර්ගය | විෂය පථය | පූර්වාරක්ෂා |
|---|---|---|
| 1. ප්රතිදේහජනක-ප්රතිදේහය | 10^-6 සිට 10^-12 දක්වා | බොහෝ ප්රතිදේහවල Kd අගයන් 10^-6-10^-7 සිට 10^-9 දක්වා පරාසයක පවතී. සාමාන්යයෙන් විශ්වාස කරන්නේ ඉහළ-සම්බන්ධතා ප්රතිදේහ 10^-9 තුළ ඇති බවත්, ඉහළ-සම්බන්ධතා ඇති බවත්ය. ප්රතිදේහ 10^-12 තුළ ඇති බවත්ය. |
| 2. ප්රෝටීන් - කුඩා අණු | 10^-4 සිට 10^-5 දක්වා | කුඩා අණු සහ ප්රෝටීන වල KD 10^-4 සහ 10^-5 අතර වන අතර, 10^-3 සහ 10^-7 සාමාන්ය වන අතර 10^-10 දක්වා ළඟා විය නොහැක. සහසංයුජ කුඩා අණු 10^-10 දක්වා ළඟා විය හැක. |
| 3. අවිඩින්-බයෝටින් | 10^-14 | සම්බන්ධතාවය පහසුවෙන් නිශ්චිත නොවන බන්ධනයකට භාජනය විය හැකි අතර, ස්ට්රෙප්ටාවයිඩින් හෝ ඩිග්ලයිකොසිලේටඩ් සම්බන්ධතාවය භාවිතා කළ හැකිය. |
| 4. DNA-ප්රෝටීන් | 10^-8 සිට 10^-10 දක්වා | උසස් තත්ත්වයේ සහ සම්පූර්ණ DNA; විද්යුත් විච්ඡේදනයේ බලපෑම වැළැක්වීමට ප්රවේශම් වන්න. |
සම්බන්ධතා තීරණය කිරීම සඳහා නියැදි අවශ්යතා
| නියැදිය | අවශ්යතා |
|---|---|
| 1. විශාල අණු සාම්පලය | ප්රෝටීන් > 50 µg, ප්රතිදේහ > 100 µg, බයෝටිනයිලේටඩ් ප්රෝටීන් > 200 µg; බයෝටින් රහිත ප්රෝටීන් > 2 mg, සංශුද්ධතාවය අවශ්යතාවය > 90%, බෆර් ද්රාවණය: PBS, HEPBS. ඉමිඩසෝල් කාණ්ඩ අඩංගු විය නොහැක; තත්ත්ව පාලනය අවශ්ය වේ. |
| 2. කුඩා අණු සාම්පලය | ප්රමාණය>1mg, කුඩු හෝ ද්රව, ද්රවය ජලයේ හෝ DMSO හි ද්රාව්ය විය යුතුය. ග්ලිසරෝල්, ඉමිඩසෝල්, ට්රෙහලෝස් හෝ වෙනත් ලවණ අඩංගු නොකිරීමට උත්සාහ කරන්න; කාබනික ප්රතික්රියාකාරක නොමැතිව බෆරයේ ට්රයිස් වැනි ඇමයිනෝ කාණ්ඩ සහිත ප්රතික්රියාකාරක, සාමාන්යයෙන් PBS, HEPPS ආදිය වළක්වා ගැනීමට උත්සාහ කරන්න. |
බහු සාම්පල විශ්ලේෂණය
ප්රතිදේහ, සෛල, ප්රෝටීන සහ අනෙකුත් ජෛව අණු ඇතුළු විවිධ සාම්පල සඳහා ඇල්ෆා ලයිෆ්ටෙක් ආයතනයට බන්ධුතා පරීක්ෂණ සැපයිය හැකිය.
පරිණත තාක්ෂණ වේදිකාව
අප සතුව spr බන්ධන විශ්ලේෂණය, bli බන්ධන විශ්ලේෂණය සහ elisa බන්ධන විශ්ලේෂණය වැනි දියුණු තාක්ෂණයන් ඇත.
නම්යශීලී ව්යාපෘති තේරීම
පාරිභෝගිකයින්ට වේගවත් සම්බන්ධතා නිර්ණය සහ නිරවද්ය සම්බන්ධතා නිර්ණය අතර තෝරා ගත හැකිය.
ඉහළ නිරවද්යතාවයකින් යුත් ප්රතිඵල
අපගේ වෘත්තීය තාක්ෂණික කණ්ඩායමට කාර්යක්ෂම, නිවැරදි සහ විශ්වාසදායක සම්බන්ධතා නිර්ණය ප්රතිඵල සහතික කළ හැකිය.
සිද්ධි අධ්යයනයනඩුව
BLI වේගවත් සම්බන්ධතා විශ්ලේෂණය ප්රතිදේහ සහ ඇප්ටැමර් සම්බන්ධතා විශ්ලේෂණය
SA පරීක්ෂණ නිශ්චිතතාව සහිත බයෝටයිනයිලේටඩ් ඇප්ටැමර් ග්රහණය කර ඒවා විසුරුවා හරින්න. සාම්පලය ස්ථාවර සාන්ද්රණයකට විසුරුවා හැර තනුක කරන්න, පරීක්ෂණ විශේෂිත ග්රහණය කරගත් ඉලක්ක 1-5 ඇප්ටැමර් ඝන කර, සංඥා සන්තෘප්තියෙන් පසු, සාම්පලයට බැඳ තබන්න. ඉන්පසු ඒවා ළිං 96 ක තහඩුවකට එකතු කරන්න.
රූපය 5: ළිං 96 තහඩු සාම්පල සඳහා හඳුනාගැනීමේ ස්ථාන බෙදා හැරීම. B යනු සංවේදක සමතුලිත කිරීම සහ විඝටනය කිරීම සඳහා භාවිතා කරන බෆරයයි. L: බයෝටින් ඉලක්ක 1-5 ඇප්ටැමර්, 221: නියැදිය.
දත්තවල ස්ථායිතාව සහ නිරවද්යතාවය සහතික කිරීම සඳහා කැණීම් කෙරෙහි අවධානය යොමු කරන්න, සහ ප්රතිඵල ලබා ගැනීම සඳහා අනුරූප වැඩසටහන සකසන්න:
රූපය 6: ඉලක්ක 1, 2, සහ 3 ඇප්ටැමර් සහ සාම්පල අතර අන්තර්ක්රියා ගැළපෙන රූප සටහන. (CH 1 \ 3 \ 5 ඝනීකරණය කරන ලද ඉලක්ක 1 \ 2 \ 3 ඇප්ටැමර් පරීක්ෂණය සහ නියැදිය අතර අන්තර්ක්රියාවේ සංඥාව සහ දත්ත නිරූපණය කරයි.)
රූපය 7: ඉලක්ක 4 සහ 5 ඇප්ටැමර් සහ සාම්පල අතර අන්තර්ක්රියා ගැළපෙන රූප සටහන. (CH 1 \ 3 ඝනීභවනය කරන ලද ඉලක්ක 4 \ 5 ඇප්ටැමර් පරීක්ෂණය සහ නියැදිය අතර අන්තර්ක්රියාවේ සංඥාව සහ දත්ත නිරූපණය කරයි.)
ප්රතිඵල පෙන්වයි
පහත ප්රතිඵල ලබා ගන්නා ලදී: සවි කිරීමෙන් පසු නියැදියට ඉලක්ක 1 ඇඩැප්ටරයේ සම්බන්ධතාවය 9.41 ^ -8; සවි කිරීමෙන් පසු නියැදියට ඉලක්ක 2 ඇඩැප්ටරයේ සම්බන්ධතාවය 8.32 ^ -8; සවි කිරීමෙන් පසු නියැදියට ඉලක්ක 3 ඇඩැප්ටරයේ සම්බන්ධතාවය 8.64 ^ -8; සවි කිරීමෙන් පසු නියැදියට ඉලක්ක 4 ඇඩැප්ටරයේ සම්බන්ධතාවය 3.70 ^ -8; සවි කිරීමෙන් පසු නියැදියට ඉලක්ක 5 ඇඩැප්ටරයේ සම්බන්ධතාවය 3.01 ^ -8 වේ.
ඔබට කිසියම් ප්රශ්නයක් ඇත්නම්, කරුණාකර ඕනෑම වේලාවක අප හා සම්බන්ධ වීමට නිදහස් වන්න.
Leave Your Message
2018-07-16 
01 (අ)02 (අ)