යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශක පුස්තකාල පිරික්සුම් සේවාව
අපගේ යීස්ට් සංදර්ශක පුස්තකාලවල විශාල ධාරිතාවක් සහ ඉහළ විවිධත්වයක් ඇති අතර, එමඟින් නිශ්චිත ප්රතිදේහ අනුපිළිවෙල ඵලදායී ලෙස පරීක්ෂා කිරීම සඳහා ඉහළ පදනමක් සපයයි.
අපව අමතන්න01 (අ)
යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශක පුස්තකාල පිරික්සුම් සේවාව
ඇල්ෆා ලයිෆ්ටෙක් යීස්ට් සංදර්ශක පුස්තකාල ඉදිකිරීම සහ ප්රතිදේහ පුස්තකාල පරීක්ෂා කිරීම සඳහා විශේෂඥතාවයක් දක්වන අතර, විවිධ ආකාරයේ යීස්ට් පුස්තකාල ජනනය කිරීමට සහ ලොව පුරා සේවාදායකයින් සඳහා ඉහළ සම්බන්ධතාවයක් සහ නිශ්චිත ප්රතිදේහ සඳහා ඒවා පරීක්ෂා කිරීමට හැකියාව ලබා දෙයි. විශේෂඥ පර්යේෂකයින් කණ්ඩායමක්, උසස් තාක්ෂණය සහ උපකරණ සමඟින්, අපට පුළුල් පරාසයක රෝග ආශ්රිත ප්රෝටීන ඉලක්ක කර ගනිමින් යීස්ට් පුස්තකාල ගොඩනගා ගත හැකිය. ප්රෝටීන් යීස්ට් සංදර්ශකය, කුඩා අණු යීස්ට් සංදර්ශකය, ප්රතිදේහ යීස්ට් සංදර්ශකය යනාදිය ඇතුළුව අපට ෆේජ් සංදර්ශක සහ යීස්ට් සංදර්ශක තාක්ෂණයන් සැපයිය හැකිය.
අපගේ යීස්ට් සංදර්ශක පුස්තකාලවල විශාල ධාරිතාවක් සහ ඉහළ විවිධත්වයක් ඇති අතර, එමඟින් නිශ්චිත ප්රතිදේහ අනුපිළිවෙල ඵලදායී ලෙස පරීක්ෂා කිරීම සඳහා ඉහළ පදනමක් සපයයි. ඔබේ අවශ්යතා අනුව අපට විවිධ ආකාරයේ ප්රතිදේහ යීස්ට් සංදර්ශක පුස්තකාල (IgG, scFv, VHH, Fab ප්රතිදේහ පුස්තකාල), ප්රෝටීන් පුස්තකාල, පෙප්ටයිඩ පුස්තකාල, cDNA පුස්තකාල ආදිය ගොඩනගා ගත හැකිය. ඊට අමතරව, ප්රතිශක්තිකරණ පුස්තකාල, ස්වාභාවික පුස්තකාල, කෘතිම පුස්තකාල, අර්ධ කෘතිම පුස්තකාල සහ රෝග ප්රතිදේහ පුස්තකාල ඇතුළු විවිධ ගුණාංගවලින් යුත් ප්රතිදේහ පුස්තකාල සංවර්ධනය කිරීමටද අපට හැකිය.
යීස්ට් සංදර්ශක පද්ධතිය පිළිබඳ හැඳින්වීම
යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශක තාක්ෂණය යනු ජාන විලයනය හරහා යීස්ට් මතුපිට නැවත සංයෝජක ප්රෝටීන ප්රදර්ශනය කිරීමේ ක්රමයකි. වඩාත් සුලභ යීස්ට් සංදර්ශක පද්ධතිය ඇල්ෆා ලෙක්ටින් සංසර්ග ප්රෝටීනයේ Aga2p උප ඒකකයේ C-පර්යන්තයට විලයනය කරන ලද ඉලක්ක ප්රෝටීනය භාවිතා කරයි, ප්රධාන වශයෙන් ඉලක්කගත ප්රෝටීනයේ දෙපස ඇති එපිටෝප් ටැග් වලින් සමන්විත වේ: N-පර්යන්ත 9-ඇමයිනෝ අම්ල හේමැග්ග්ලුටිනින් (HA) ටැගය සහ C-පර්යන්ත 10 ඇමයිනෝ අම්ල c-myc ටැගය. 69 ඇමයිනෝ අම්ල Aga2p උප ඒකකය ඩයිසල්ෆයිඩ් බන්ධන දෙකක් හරහා 725 ඇමයිනෝ අම්ල ඇල්ෆා ලෙක්ටින් Aga1p උප ඒකකයට බන්ධනය වන අතර, Aga1p β 1,6-ග්ලූකන් සහසංයුජ බන්ධනයක් හරහා සෛල බිත්තියට නැංගුරම් ලා ඇත. එබැවින්, ඉලක්කගත ප්රෝටීනය යීස්ට් සෛල මතුපිට ප්රදර්ශනය වන අතර පසුව අනුරූප ලිගන්ඩ් මගින් හඳුනා ගනී. ප්රවාහ සයිටොමෙට්රි පරීක්ෂාව හරහා පුස්තකාලවලින් ක්රියාකාරී ප්රෝටීන වෙන් කරන්න.
රූපය 1: යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශනයේ මූලධර්මය. (රූප මූලාශ්රය: ප්රෝටීන් ඉංජිනේරු විද්යාව සඳහා යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශකයේ යෙදුම්.)
යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශක පුස්තකාලය පිළිබඳ හැඳින්වීම
යීස්ට් සංදර්ශක වර්ග කිරීම යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශකය මත පදනම් වන අතර එය ප්රධාන වශයෙන් සෛල මතුපිට ප්රෝටීන ඉලක්ක කරගත් ප්රතිදේහ පුස්තකාල තිරගත කිරීමට භාවිතා කරයි. යීස්ට් සෛල සහ අනෙකුත් සෛල මතුපිට අතර අඩු නිශ්චිත නොවන බන්ධනය හේතුවෙන්, යීස්ට් ජීව විද්යාත්මක තේරීමට දුර්ලභ ක්ලෝන සොයා ගැනීම සඳහා විශාල බන්ධන පුස්තකාල තිරගත කළ හැකිය.
යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශක පුස්තකාල පිරික්සුම් සේවාව
ප්ලාස්මිඩ් සහ සංස්කෘතික යීස්ට් සෛල සකස් කරන්න, ඉලක්කගත ප්රෝටීනය කේතනය කරන DNA සංස්ලේෂණය කර එය ප්රේරක ප්රවර්ධක, සංඥා පෙප්ටයිඩ සහ මතුපිට සංදර්ශක ප්රෝටීන (Aga2p වැනි) වලට විලයනය කරන ලද ඉලක්ක ජාන අඩංගු යීස්ට් ප්රකාශන දෛශිකයක් බවට ක්ලෝන කරන්න. ඉලක්කගත ප්රෝටීනය කේතනය කරන ජානය යීස්ට් සෛල බිත්ති ප්රෝටීනය කේතනය කරන ජානය සමඟ ඒකාබද්ධ කළ හැකිය (සාමාන්යයෙන් Aga2p), සහ විලයනය කරන ලද ජානය විද්යුත් විච්ඡේදනය හරහා යීස්ට් සෛල බවට පරිවර්තනය කළ හැකිය. පරිවර්තනයෙන් පසු, ඒවායේ මතුපිට ප්රතිදේහ ජාන ප්රකාශ කරන යීස්ට් සෛල ප්රතිදේහජනක-විශේෂිත පරීක්ෂණ පරීක්ෂණවලට භාජනය විය හැකිය: යීස්ට් පුස්තකාලය ඉලක්ක ප්රතිදේහජනකය සමඟ පුර්ව ලියාපදිංචි කර ඇති අතර එයට විශේෂයෙන් බන්ධනය වන යීස්ට් සෛල තෝරා ගනු ලැබේ. අපේක්ෂිත ලක්ෂණ සහිත ප්රෝටීන ප්රදර්ශනය කරන යීස්ට් සෛල හුදකලා කිරීමට ප්රතිදීප්ත සක්රිය සෛල වර්ග කිරීම (FACS) භාවිතා කරමින්, යීස්ට් සංදර්ශක පුස්තකාල පරීක්ෂාව ~10 ^ 8-10 ^ 9 යීස්ට් සෛල උපරිම පුස්තකාල ප්රමාණයකින් සිදු කළ හැකිය. වැඩිදුර විශ්ලේෂණය හෝ පහළ යෙදුම් සඳහා ධනාත්මක ක්ලෝන හුදකලා කළ හැකිය. ප්රතිදේහ පුස්තකාලයෙන් නිශ්චිත ප්රතිදේහ ක්ලෝන හඳුනාගත් පසු, ඒවා තවදුරටත් සංලක්ෂිත කර මහා පරිමාණයෙන් නිපදවිය හැකි අතර, යීස්ට් සංදර්ශක පරීක්ෂාව සහ ප්රතිදේහ නිෂ්පාදනයේ සම්පූර්ණ ක්රියාවලිය සම්පූර්ණ කිරීම සඳහා ප්රෝටීන් A/G ඇෆිනිටි ක්රොමැටෝග්රැෆි වැනි ශිල්පීය ක්රම භාවිතයෙන් පිරිසිදු කළ හැකිය.
යීස්ට් සංදර්ශක පුස්තකාල පරීක්ෂා කිරීමේ ක්රියාවලිය
රූපය 2 යීස්ට් සංදර්ශක පුස්තකාල පරීක්ෂණ ක්රියාවලිය
යීස්ට් සංදර්ශක පුස්තකාල පිරික්සුම් සේවා කාර්ය ප්රවාහය
| පියවර | සේවා අන්තර්ගතය | කාලරේඛාව |
|---|---|---|
| ප්රතිදේහජනක සකස් කිරීම | ප්රතිදේහජනක වර්ගය: පාරිභෝගිකයාට ප්රතිදේහජනක සැපයිය හැකි නම්, වර්ගය අනුව අනුරූප සාම්පල ලබා දිය යුතුය: ප්රතිසංයෝජක ප්රෝටීන සඳහා 85% ට වැඩි සංශුද්ධතාවයකින් යුත් 3-3.5mg අවශ්ය වේ, කුඩා අණු 90% ට වැඩි සංශුද්ධතාවයකින් යුත් බන්ධනය කළ යුතුය, පෙප්ටයිඩ සංස්ලේෂණය 90% ට වැඩි සංශුද්ධතාවයකින් යුත් බන්ධනය කළ යුතුය, වෛරස් වැනි සාම්පල වර්ග අක්රිය කළ යුතුය, පිරිහීම වැළැක්වීම සඳහා RNA පරීක්ෂා කළ යුතුය, සහ ඉහත ප්රතිදේහජනක වර්ග සංස්ලේෂණය සඳහා අභිරුචිකරණය කළ හැකිය. | සති 2-3 |
| සත්ව ප්රතිශක්තිය | සත්ව ප්රතිශක්තිකරණ සංඛ්යාව 5 ක් වන අතර, සෙරුම් ටයිටර් පරීක්ෂාව මත පදනම්ව ප්රතිශක්තිකරණ සංඛ්යාව වැඩි කළ යුතුද යන්න තීරණය කිරීම අවශ්ය වේ. ප්රතිදේහජනක ප්රතිශක්තිය: ප්රෝටීන්/වෛරස් ප්රතිදේහජනක විභවය105; පෙප්ටයිඩ/කුඩා අණු ප්රතිදේහජනක විභවය10^4 | සති 5-6 |
| cDNA සැකිල්ල සකස් කිරීම | ප්ලාස්මා PBMC වෙන් කර, සම්පූර්ණ RNA (RNA නිස්සාරණ කට්ටලය) නිස්සාරණය කර cDNA බවට පරිවර්තනය කරන්න. | දින 1 යි |
| පුස්තකාල ඉදිකිරීම | පුස්තකාල cDNA සැකිල්ලක් ලෙස භාවිතා කරමින්, VHH ජානය PCR වට දෙකකින් විස්තාරණය කරන ලද අතර, VHH ජාන ස්ප්ලයිස් යීස්ට් සංදර්ශක දෛශිකය ගොඩනගා ඇත. ප්රතිදේහ පුස්තකාලයක් තැනීම සඳහා විද්යුත් විච්ඡේදනය මගින් දෛශිකය යීස්ට් සෛල බවට පරිවර්තනය කරන ලදී. අහඹු ලෙස ක්ලෝන 48 ක් තෝරා PCR ක්රමය භාවිතයෙන් ධනාත්මක අනුපාතය (>90%) හඳුනා ගන්න; පුස්තකාල ධාරිතාව (10^7-10^8), නිවැරදි පුස්තකාල ඇතුළත් කිරීමේ අනුපාතය (>90%) සහ පුස්තකාල විවිධත්වය තීරණය කිරීම සඳහා NGS අනුපිළිවෙල ගණනය කරන්න. | සති 2 යි |
| පුස්තකාල පරීක්ෂාව | පෙරනිමි පරීක්ෂණ වට තුනක්: ප්රතිදීප්ත ලේබල් කරන ලද ප්රෝටීන් FACS පරීක්ෂාව, පසුව තුන්වන වටයේදී NGS අනුක්රමණය. තනි ග්රෑම් ප්රේරණ ප්රකාශනය සහ ELISA අනාවරණය සඳහා ධනාත්මක ක්ලෝන තෝරා ගන්නා ලදී. ජාන අනුක්රමණය සඳහා සියලුම ධනාත්මක ක්ලෝන තෝරා ගන්නා ලද අතර විවිධ CDR කලාප අනුපිළිවෙල තෝරා ගන්නා ලදී. | සති 2-3 |
| ප්රතිදේහ සත්යාපනය | ප්රතිදේහ අනුපිළිවෙල සඳහා සුදුසු ප්රකාශන දෛශික ගොඩනැගීම මඟින් ප්රතිදේහ ප්රකාශනය, ප්රතිදේහ පිරිසිදු කිරීම, ප්රතිදේහ සම්බන්ධතාවය සත්යාපනය කිරීම සඳහා ප්රතිදේහ ප්රතිදේහජනක බන්ධනය ELISA සහ BLI වලංගු කිරීම සහ සෛල ක්රියාකාරිත්වය වලංගු කිරීම සඳහා ප්රවාහ සයිටොමෙට්රි අවහිර කිරීම පහසු කළ හැකිය. | සති 1 යි |
යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශක පුස්තකාල පරීක්ෂාව පිළිබඳ නඩුව
අනුකූලව තෝරාගත් නැනෝ දේහ ඉක්මනින් සොයා ගැනීම සඳහා යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශක වේදිකාවේ සාහිත්යයේ, කතුවරුන් යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශකය මත පදනම් වූ සම්පූර්ණ අභ්යන්තර නැනෝ දේහ සොයාගැනීමේ වේදිකාවක් ස්ථාපිත කළහ. පළමුව, ඔටුවන්ගේ ජාන වලින් ආරම්භ කර කෘතිම නැනෝ දේහ පුස්තකාලයක් නිර්මාණය කරන ලදී. රූපය D හි දැක්වෙන්නේ නැනෝ දේහයට කාබොක්සයිල් කෙළවරේ HA ටැගයක් ඇති බවත්, පසුව නැනෝ දේහය යීස්ට් සෛල බිත්තිය මත සහසංයුජව සවි කර ඇති බවත්ය. රූපය E හි නැනෝ දේහ පරීක්ෂණ ක්රියාවලිය පෙන්වයි. ප්රතිදේහජනක සම්බන්ධතා සහිත යීස්ට් නැනෝ දේහ හුදකලා කර, විස්තාරණය කර, FACS මගින් ප්රතිදේහ සඳහා නැවත නැවතත් තෝරා ගන්නා ලදී. කතුවරුන් මෙම වේදිකාව හරහා වෙනස් මානව GPCR දෙකක් ඉලක්ක කරගත් අනුකූලතා වරණීය නැනෝ දේහ සොයා ගත්හ.
රූපය 3: කෘතිම නැනෝ ශරීර පුස්තකාලය නිර්මාණය කිරීම සහ ඉදිකිරීම. (රූප මූලාශ්රය: අනුකූලව තෝරාගත් නැනෝ ශරීර වේගයෙන් සොයා ගැනීම සඳහා යීස්ට් මතුපිට සංදර්ශක වේදිකාව.)
ඔබට කිසියම් ප්රශ්නයක් ඇත්නම්, කරුණාකර ඕනෑම වේලාවක අප හා සම්බන්ධ වීමට නිදහස් වන්න.
Leave Your Message
2018-07-16 
01 (අ)02 (අ)