Vývojová platforma aptamerov

Aptaméry sú jednovláknové oligonukleotidy (DNA, RNA alebo XNA) s vlastnosťou vysokej afinity a vysokej špecificity, ktoré sa špecificky viažu na cieľové molekuly, ako sú protilátky, a vo veľkej miere sa používajú na vývoj biosenzorov, diagnostiku a terapeutiká.

Platforma aptamérov poskytovaná spoločnosťou Alpha Lifetech zahŕňa dve kategórie: platforma syntézy aptamérov, ktorá zahŕňa hlavne službu syntézy knižnice aptamérov SELEX a vývojovú službu aptamérov (DNA, RNA alebo XNA) a platformu skríningu aptamérov vrátane skríningových služieb založených na technológii SELEX pre proteíny, peptidy, bunky, malé molekuly, kovové ióny a iné cieľové molekuly, ako aj služby optimalizácie aptamérov a následné služby identifikácie.

Platforma syntézy aptamérov

Služba syntézy knižnice aptamérov SELEX

Služba syntézy knižnice aptamérov SELEX zahŕňa hlavne konštrukciu knižnice obsahujúcej veľký počet náhodných jednovláknových oligonukleotidových sekvencií chemickou syntézou in vitro podľa cieľových molekúl. Konštrukcia knižnice je východiskovým bodom technológie SELEX, ktorá poskytuje množstvo kandidátskych sekvencií pre následný skríningový proces konštrukciou obrovských náhodných knižníc a zvyšuje možnosť skríningu vysokoafinitných aptamérov.

Syntéza knižnice je rozdelená hlavne do nasledujúcich krokov:

Kroky	Podrobnosti o technológii
Identifikujte cieľové molekuly	Identifikujte cieľové molekuly, ktoré je potrebné skrínovať na aptaméry, čo môžu byť proteíny, nukleové kyseliny, malé molekuly, ióny kovov atď.
Návrh náhodnej sekvencie	Náhodná dĺžka sekvencie, zloženie báz a ďalšie parametre boli navrhnuté podľa charakteristík cieľových molekúl a požiadaviek na skríning. Náhodné sekvencie sú zvyčajne dlhé desiatky až stovky báz.
Syntéza pevných sekvencií	Navrhnú sa a syntetizujú fragmenty oligonukleotidov s fixnými sekvenciami (ako sú sekvencie primérov PCR) na oboch koncoch, ktoré sa použijú v následnom procese amplifikácie a skríningu.

Syntetizovanú knižnicu je ešte potrebné ďalej spracovať na kontrolu kvality. Koncentrácia knižnice bola určená na zabezpečenie jej použiteľnosti v následnom skríningovom procese. Rozmanitosť a presnosť náhodných sekvencií v knižnici bola overená sekvenovaním a inými metódami, aby sa zabezpečilo, že kvalita knižnice spĺňa požiadavky na skríning.

Prostredníctvom vyššie uvedených krokov je možné syntetizovať vysokokvalitnú a vysoko rôznorodú knižnicu aptamérov SELEX, ktorá môže poskytnúť množstvo kandidátskych sekvencií pre následný skríningový proces.

Služby vývoja aptamérov (DNA, RNA alebo XNA)

Aptaméry zvyčajne označujú aptaméry nukleovej kyseliny. Aptaméry nukleovej kyseliny zahŕňajú DNA aptaméry, RNA aptaméry a XNA aptaméry, čo sú chemicky modifikované aptaméry nukleovej kyseliny. Technika SELEX sa široko používa na vývoj aptamérov. Základný pracovný postup služieb vývoja aptamérov zahŕňa konštrukciu knižnice, väzbu cieľa, izoláciu a purifikáciu, amplifikáciu, viacnásobné skríningové cykly a identifikáciu sekvencie. Dlhé roky sa zameriavame na výstavbu knižníc a bohaté skúsenosti s vývojom aptamérov. Zaviazali sme sa poskytovať zákazníkom lepšie služby.

Proces technológie SELEX

Proces SELEX pozostáva z viacerých kôl, z ktorých každé pozostáva z nasledujúcich kľúčových krokov:

Knižnica a cieľová väzba

Skonštruovaná knižnica nukleových kyselín sa zmieša so špecifickými cieľovými molekulami (ako sú proteíny, zlúčeniny s malými molekulami atď.), takže sekvencie nukleových kyselín v knižnici majú možnosť viazať sa na cieľové molekuly.

Izolácia neviazaných molekúl

Sekvencie nukleových kyselín, ktoré nie sú naviazané na cieľovú molekulu, sú zo zmesi oddelené špecifickými metódami, ako je afinitná chromatografia, separácia magnetických guľôčok atď.

Amplifikácia väzbových molekúl

Sekvencia nukleovej kyseliny naviazaná na cieľovú molekulu sa amplifikuje, zvyčajne pomocou technológie polymerázovej reťazovej reakcie (PCR). Pre nasledujúcu fázu skríningu sa ako východisková knižnica použijú amplifikované sekvencie.

Obr. 1: Proces skríningu SELEX

Platforma na skríning aptamérov

Skríningová služba aptamérov

Alpha Lifetech ponúka pestrú škálu špecializovaných služieb skríningu aptamérov s použitím rôznych metodológií SELEX pre rôzne typy vašich molekúl:

Typy cieľov	Technické detaily
Skríning proteínového aptaméru spoločnosťou SELEX	Hlavným účelom skríningu proteínových aptamérov je skríning aptamérov, ktoré sa môžu špecificky viazať na cieľové proteínové molekuly. Tieto aptaméry sa jednoduchšie syntetizujú, sú stabilnejšie a menej náchylné na faktory prostredia.
Skríning peptidových aptamérov od SELEX	Peptidové aptaméry sú triedou krátkych peptidových sekvencií s vysokou špecifickosťou a afinitou, ktoré sa môžu špecificky viazať na cieľové látky a vykazujú široký rozsah aplikačného potenciálu v biomedicínskej oblasti. Prostredníctvom špecifického skríningového procesu sa peptidové aptaméry, ktoré sa môžu špecificky viazať na cieľové molekuly, skrínujú z veľkého počtu knižníc náhodných peptidových sekvencií.
Bunkovo špecifický skríning aptaméru (Cell-SELEX)	Cieľové bunky alebo špecifické molekuly na bunkovom povrchu sú pripravené ako ciele. Cieľmi môžu byť celé bunky, receptory na bunkovej membráne, proteíny alebo iné malé molekuly.
Skríning aptamérov malých molekúl od Capture SELEX	Capture SELEX je in vitro skríningová technika na skríning aptamérov s malou molekulou, čo je variant SELEX. Capture SELEX je obzvlášť vhodný na aptamérový skríning malých molekúl cieľov, ktoré majú typicky menej funkčných skupín a je ťažké ich imobilizovať priamo na nosičoch pevnej fázy.
Služby SELEX založené na živých zvieratách	Skríningová služba na živých zvieratách je experimentálna technika široko používaná v oblasti biovedy, medicíny a biotechnológie, ktorá využíva živé zvieratá ako experimentálne modely na skríning a hodnotenie špecifických molekúl, liečiv, terapeutík alebo biologických procesov. Služby sú navrhnuté tak, aby simulovali fyziologické prostredie v ľudskom tele s cieľom presnejšie predpovedať a vyhodnocovať účinnosť a bezpečnosť experimentálnych výsledkov v ľudskom tele.

Služba optimalizácie aptamerov

Hydrofilnosť, vysoká strata afinity počas produkcie a rýchle vylučovanie aptamérov obmedzujú ich aplikáciu. V súčasnosti sa skúmalo množstvo optimalizačných metód na zvýšenie výkonu aptamérov.

Máme tiež rôzne spôsoby optimalizácie aptaméru pozostávajúce zo skrátenia, modifikácií, konjugácie na vhodnú skupinu (tiol, karboxy, amín, fluorofór atď.).

Služba analýzy charakterizácie aptaméru

Služba analýzy charakterizácie aptaméru sa týka profesionálnej služby rozlíšenia štruktúry hodnotenia výkonu a funkčnej verifikácie získaného aptaméru, aby sa zabezpečilo, že aptamér spĺňa požiadavky na špecifické väzbové schopnosti, stabilitu a špecifickosť. Zahŕňa najmä analýzu afinity a špecificity, hodnotenie stability a overenie biologickej funkcie.