Služba vývoja monoklonálnych protilátok

Spoločnosť Alpha Lifetech Inc.môže zabezpečiť predikciu epitopov, syntézu peptidov, expresiu proteínov, produkciu polyklonálnych alebo monoklonálnych protilátok, ako aj purifikáciu protilátok z bunkovej kultúry, ascitovej tekutiny alebo celého séra.

Spoločnosť Alpha Lifetech Inc.má skúsenosti s poskytovaním rôznych služieb v oblasti stabilných bunkových línií zákazníkom vrátane hybridómových buniek, bunkových línií na úpravu genómu, knockdown bunkových línií a nadmerne expresných bunkových línií. Snažíme sa každému klientovi ponúkať pokročilé služby v oblasti zákazkových bunkových línií a naše služby sú overené a dôveryhodné.

Stratégia vývoja protilátok

1. Návrh a príprava antigénu
Tieto antigény môžu byť proteíny, peptidy alebo iné molekuly. Navrhovanie imunogénov si vyžaduje komplexný prístup, ktorý integruje znalosti o štruktúre antigénu, imunológii a systémoch podávania. Spoločnosť Alpha Lifetech má technológiu návrhu antigénov, ktorá dokáže navrhnúť imunogény pre zákazníkov v núdzi.
Spoločnosť Alpha Lifetech poskytuje zákazníkom produkty rekombinantných proteínov, z ktorých si môžu vybrať. Máme k dispozícii rôzne systémy expresie proteínov, ako napríklad systém expresie E. coli, systém expresie kvasiniek, systém expresie bakulovírusu a hmyzu, systém expresie cicavcov atď., na produkciu rekombinantných proteínov, ktoré potrebujete na výskum.

2. Očkovanie zvierat
Spoločnosť Alpha Lifetech môže zákazníkom poskytnúť imunogény a na výber máte imúnne zvieratá, ako sú myši, králiky, ovce, alpaky, morčatá, škrečky atď.

3. Metódy produkcie monoklonálnych protilátok

●Produkcia monoklonálnych antigénov hybridómovou technológiou
Hybridóm je hybridná bunka vytvorená fúziou dvoch druhov buniek, a to bunkovej línie myšieho myelómu a plazmatických buniek (lymfocyt B), v ktorej heterozygotná bunka dokáže in vitro produkovať kontinuálne protilátky proti sledovanému antigénu. Produkcia hybridómovej bunkovej línie pozostáva z troch častí: návrh antigénu (haptény, malé molekuly a peptidy), imunizácia zvierat, bunková fúzia a skríning pozitívnych klonov. Využitím jedinečných imunizačných metodík dosahujeme mimoriadne vysokú účinnosť bunkovej fúzie (1 – 10 hybridómov na tisíc B buniek) a vysoké titre protilátok, čím maximalizujeme našu úspešnosť v následných analytických testoch, ktoré zahŕňajú biochemický skríning, bunkové testy in vitro a štúdie na zvieratách.

●Produkcia monoklonálnych protilátok pomocou technológie fágového displeja
Fágový displej ponúka ďalšiu metódu na generovanie monoklonálnych protilátok. B-lymfocyty sa izolujú zo zvieracej krvi a extrahuje sa ich mRNA. Prostredníctvom PCR sa táto mRNA premení na cDNA, ktorá amplifikuje všetky segmenty VH a VL. Tieto segmenty sa potom klonujú do vektora, zvyčajne ako jednoreťazcové variabilné fragmenty (scFv), spolu s proteínom PIII bakteriofága. Následne sa tento konštrukt použije na infikovanie E. coli, čo vedie k vytvoreniu knižnice obsahujúcej približne 10^10 buniek prostredníctvom inokulácie pomocným fágom. E. coli je potom schopná sekretovať bakteriofág, ktorý obsahuje segmenty VH a VL ako súčasť svojho obalu. Následne je možné vybrať špecifické segmenty VH a VL zamerané na sledovaný antigén a použiť ich na reinfekciu E. coli bakteriofágom. Bunky obsahujúce plazmid sa potom izolujú a sekvenujú.

4. Skríning fúzie

●Bunková fúzia a výber
Získané B bunky sa potom zlúčia s myelómovými bunkami, čo sú rakovinové bunky, ktoré sa môžu v kultúre množiť donekonečna. Fúzia sa zvyčajne dosahuje pomocou techniky, ako je fúzia polyetylénglykolu (PEG).
Po fúzii sa hybridómové bunky kultivujú v selektívnom médiu, ktoré umožňuje prežitie iba hybridómom. Médium zvyčajne obsahuje aminopterín, ktorý zabraňuje rastu nefúzovaných myelómových buniek.

●Skríning a klonovanie
Výsledné hybridómové bunky sa skrínujú na produkciu protilátok špecifických pre cieľový antigén. Toto sa zvyčajne vykonáva pomocou techník, ako je enzýmovo-imunoanalýza (ELISA), Western blot, imunoprecipitácia a prietoková cytometria.

Po identifikácii hybridómových buniek produkujúcich protilátku sa tieto klonujú, aby sa vytvorila populácia identických buniek. Tým sa zabezpečí, že protilátka produkovaná každou hybridómovou bunkou je identická.

5. Overenie funkčnosti protilátok
Spoločnosť Alpha Lifetech poskytuje validáciu funkčnosti protilátok, ako je Western blotting, imunohistochemické vyšetrenia alebo funkčné testy, na charakterizáciu monoklonálnych protilátok a potvrdenie špecifickosti, afinity a funkčnosti protilátok.

6. Optimalizácia protilátok
Purifikácia protilátok z kultivačného supernatantu pomocou techník, ako je afinitná chromatografia s proteínom A alebo proteínom G, a Alpha Lifetech môže tiež poskytnúť metódy modifikácie protilátok na zlepšenie afinity protilátok.

7. Tvorba protilátok
Spoločnosť Alpha Lifetech dokáže vyhodnotiť kandidátske protilátky pre vysokovýkonné skríningové aplikácie a veľkovýrobu.