Platforma vývoja protilátok na fágovom displeji

Alpha Lifetech so svojimi rozsiahlymi projektovými skúsenosťami v oblasti objavovania protilátok môže poskytnúť prispôsobené služby monoklonálnych a polyklonálnych protilátok pre viaceré druhy, ako aj služby konštrukcie knižníc protilátok a skríningu. Alpha Lifetech môže zákazníkom poskytnúť kvalitné protilátky a rekombinantné protilátkové produkty, ako aj zodpovedajúce služby na prípravu účinných, vysoko špecifických a stabilných protilátok. Využitím komplexných platforiem protilátok a inžinierstva protilátok poskytujeme služby pokrývajúce upstream a downstream produkcie protilátok, vrátane technických služieb, ako je príprava protilátok, purifikácia, sekvenovanie protilátok a validácia.

Alpha Lifetech má vyspelú platformu na objavovanie protilátok, ktorá poskytuje zákazníkom celý rad služieb vrátane imunity zvierat, konštrukcie a skríningu knižnice protilátok na fágovom displeji, sekvenovania protilátok, expresie protilátok, purifikácie protilátok, validácie protilátok a značenia protilátok na základe technológie hybridómov, technológie jednotlivých B buniek, technológie fágového displeja a ďalšie. Alpha Lifetech má štandardnú výrobnú linku a okrem služieb prípravy protilátok možno poskytnúť aj podporné služby, ako je humanizácia protilátok, dozrievanie afinity protilátok, návrh a vývoj liekov ADC a návrh následnej sekvencie CAR-T. Alpha Lifetech zároveň skonštruoval knižnicu protilátok založenú na platformách technológie fágového displeja M13, T4 a T7 s úložnou kapacitou až 10^8-10^9. Pozitívna miera, miera vkladania a diverzita knižnice môžu dosiahnuť viac ako 90 %.

Technológia fágového displeja

Produkcia monoklonálnych protilátok bola pôvodne pripravená s použitím technológie hybridómovej monoklonálnej protilátky na produkciu myšacej hybridómovej monoklonálnej protilátky. Konkrétne fúziou buniek sleziny z imunizovaných myší s myelómovými bunkami od ľudí alebo myší sa vytvoria hybridómové bunky, ktoré vylučujú špecifické hybridómové monoklonálne protilátky. Humanizovanou modifikáciou myších monoklonálnych protilátok a modifikáciou protilátok genetickým inžinierstvom, aby sa im poskytla konštantná oblasť ľudského imunoglobulínu, sa môže znížiť ich imunogenicita. Monoklonálne protilátkové inžinierstvo sa široko používa v biomedicínskych a klinických aplikáciách.

Alpha Lifetech môže poskytnúť komplexné služby v oblasti inžinierstva protilátok od návrhu protokolu predklinického výskumu až po objavenie konjugátov protilátok (ADC) a overenie na zvieratách. Konjugáty protilátky a liečiva (ADC) môžu dodávať chemoterapeutické lieky do rakovinových buniek. Po naviazaní na špecifické ciele exprimované na rakovinových bunkách ADC uvoľňuje cytotoxické lieky do rakovinových buniek. Alpha Lifetech môže zákazníkom poskytnúť aj komplexné služby dozrievania afinity protilátok. S pokročilou optimalizáciou mutácií a vysokovýkonnou technológiou skríningu fágového displeja sa najprv skrínujú protilátky s určitou afinitou a potom sa zavedú mutácie aminokyselín, aby sa vytvorili rôzne varianty. Následne boli protilátky s vysokou afinitou hodnotené a skrínované pomocou skríningových techník. Po viacerých kolách optimalizácie a štruktúrnej analýzy sa nakoniec získali protilátky s vyššou afinitou a silnejšou špecifickosťou.

Alpha Lifetech môže skonštruovať rôzne typy knižníc fágového displeja protilátok, vrátane imunitných knižníc, natívnych knižníc, polosyntetických knižníc a syntetických knižníc. Na základe vysokej kapacity knižníc protilátok možno získať vysoko špecifické protilátky. Môžu byť poskytnuté viaceré fagemidové vektory, ako napríklad pMECS, pComb3X a pCANTAB 5E, ako aj kmene, ako napríklad TG1 E. coli, XL1 Blue a ER2738. Okrem kapacity knižnice až 10^9 je rýchlosť vkladania cieľového fragmentu knižnice tiež vysoká, čo vytvára dostatočné podmienky na skríning protilátok, ktoré uspokoja zákazníkov. Vývojový diagram služby prípravy protilátok spoločnosti Alpha Lifetech založenej na technológii fágového displeja je znázornený na obrázku 1.

Obr. 1 Schéma procesu prípravy monoklonálnych protilátok na základe technológie fágového displeja.

Pracovný postup produkcie protilátok fágového displeja

Kroky	Obsah služby	Časová os
Krok 1: Imunizácia zvierat	(1) Imunizácia zvierat 4-krát, posilňovacia imunizácia 1 dávka, celkovo 5 imunizovaných dávok. (2) Pred imunizáciou bolo odobraté negatívne sérum a pri štvrtej dávke bola vykonaná ELISA na detekciu sérového titra. (3) Ak titer sérových protilátok štvrtej dávky spĺňa požiadavky, 7 dní pred odberom krvi sa podá jedna ďalšia imunizačná dávka. Ak nespĺňa požiadavky, rutinná imunizácia bude pokračovať. (4) Kvalifikovaná potencia, odber krvi a separácia monocytov	10 týždňov
Krok 2: Príprava cDNA	(1) Celková extrakcia RNA PBMC (súprava na extrakciu RNA) (2) Vysoko verná RT-PCR príprava cDNA (súprava na reverznú transkripciu)	1 deň
Krok 3: Konštrukcia knižnice protilátok	(1) S použitím cDNA ako templátu boli gény amplifikované dvoma cyklami PCR. (2) Konštrukcia a transformácia fágu: génový zostrih fagemidového vektora, elektroporačná transformácia hostiteľských baktérií TG1, konštrukcia knižnice protilátok. (3) Identifikácia: Náhodne vyberte 24 klonov, rýchlosť identifikácie PCR + rýchlosť inzercie. (4) Príprava asistovaného fágu: amplifikácia fágu M13 + purifikácia. (5) Záchrana knižnice fágového displeja	3-4 týždne
Krok 4: Skríning knižnice protilátok (3 kolá)	(1) Predvolený 3-kolový skríning (skríning na pevnej fáze): tlakový skríning na odstránenie nešpecifických protilátok v maximálnej možnej miere. (2) Selektovaný bakteriofág na amplifikáciu jedného klonu + expresia indukovaná IPTG + detekcia pozitívnych klonov ELISA. (3) Všetky pozitívne klony sa vybrali na génové sekvenovanie.	4-5 týždňov

Výhoda technológie fágového displeja

Alpha Lifetech má bohaté skúsenosti v oblasti vývoja protilátok. V priebehu rokov spoločnosť Alpha Lifetech vytvorila komplexnú platformu na vývoj protilátok.

Služby podpory

Môžeme poskytnúť rôzne služby budovania imunitných knižníc na zvieratách a skríningové služby knižnice prírodných protilátok podľa potrieb zákazníka

Viacnásobný cieľ

K dispozícii sú služby zisťovania viacerých cieľových protilátok: proteíny, peptidy, malé molekuly, vírusy, membránové proteíny, mRNA atď.

Viac vektorov

Personalizovaná služba výstavby knižnice, môžeme poskytnúť rôzne bakteriofágové vektory vrátane PMECS, pComb3X a pCANTAB 5E a upraviť ich podľa potrieb zákazníka

Vyspelá platforma

Skladovacia kapacita môže dosiahnuť 10^8-10^9, miery inzercie sú všetky nad 90 % a afinita protilátok získaná skríningom je vo všeobecnosti na úrovni nM pM

Súvisiaca SERVICE

Stratégie vývoja viacerých protilátok

Služba vývoja monoklonálnych protilátok

Hybridoma technologická platforma

Platforma na triedenie jednej bunky B

Platforma vývoja protilátok na fágovom displeji

vývoj monoklonálnych protilátok-Alpha Lifetech

Služba vývoja monoklonálnych protilátok

Môžeme poskytnúť vysokokvalitné, vysoko čisté a vysoko špecifické služby vývoja monoklonálnych protilátok, vrátane produkcie myších monoklonálnych protilátok a králičích monoklonálnych protilátok

Hybridoma technologická platforma

Vrátane imunizačného programu, služieb prípravy protilátok, čistenia protilátok, vysokovýkonného sekvenovania protilátok, validácie protilátok atď.

Platforma na triedenie jednej bunky B

Alpha Lifetech má výhody v čase skríningu a získavaní vysoko kvalitných protilátok. Môže poskytnúť návrh antigénu, syntézu a modifikáciu, zvieraciu imunitu, skríning obohatenia jednotlivých B buniek, sekvenovanie jednotlivých buniek.