Platforma pre vývoj protilátok s fágovým displejom

Spoločnosť Alpha Lifetech, s rozsiahlymi skúsenosťami s projektmi v oblasti objavovania protilátok, dokáže poskytnúť prispôsobené služby v oblasti monoklonálnych a polyklonálnych protilátok pre viacero druhov, ako aj služby v oblasti tvorby a skríningu knižníc protilátok. Spoločnosť Alpha Lifetech môže zákazníkom poskytnúť kvalitné protilátkové a rekombinantné protilátkové produkty so zaručenou kvalitou, ako aj zodpovedajúce služby na prípravu účinných, vysoko špecifických a stabilných protilátok. Využívaním komplexných platforiem protilátok a inžinierstva protilátok poskytujeme služby pokrývajúce predchádzajúcu aj následnú fázu produkcie protilátok vrátane technických služieb, ako je príprava protilátok, purifikácia, sekvenovanie protilátok a validácia.

Spoločnosť Alpha Lifetech má vyspelu platformu na objavovanie protilátok, ktorá zákazníkom poskytuje širokú škálu služieb vrátane imunity zvierat, konštrukcie a skríningu knižnice protilátok pre fágový displej, sekvenovania protilátok, expresie protilátok, purifikácie protilátok, validácie protilátok a označovania protilátok na základe hybridómovej technológie, technológie jednotlivých B buniek, technológie fágového displeja a ďalších. Spoločnosť Alpha Lifetech má štandardnú výrobnú linku a okrem služieb prípravy protilátok môže poskytovať aj podporné služby, ako je humanizácia protilátok, afinitné zrenie protilátok, návrh a vývoj liekov ADC a návrh následnej sekvencie CAR-T. Zároveň spoločnosť Alpha Lifetech zostrojila knižnicu protilátok založenú na platformách technológie fágového displeja M13, T4 a T7 s úložnou kapacitou až 10^8-10^9. Miera pozitívnych výsledkov, miera inzercie a diverzita knižnice môžu dosiahnuť viac ako 90 %.

Technológia fágového displeja

Produkcia monoklonálnych protilátok bola pôvodne pripravená s použitím hybridómovej technológie monoklonálnych protilátok na výrobu myšacích hybridómových monoklonálnych protilátok. Konkrétne, fúziou slezinových buniek z imunizovaných myší s myelómovými bunkami z ľudí alebo myší sa vytvoria hybridómové bunky, ktoré vylučujú špecifické hybridómové monoklonálne protilátky. Humanizovanou modifikáciou myších monoklonálnych protilátok a genetickou modifikáciou protilátok, aby sa im poskytla konštantná ľudská imunoglobulínová oblasť, je možné znížiť ich imunogenicitu. Monoklonálne protilátkové inžinierstvo sa široko používa v biomedicínskych a klinických aplikáciách.

Spoločnosť Alpha Lifetech môže poskytnúť komplexné služby v oblasti inžinierstva protilátok, od návrhu predklinických výskumných protokolov až po objavovanie konjugátov protilátok a liečiv (ADC) a ich validáciu na zvieratách. Konjugáty protilátok a liečiv (ADC) môžu dodávať chemoterapeutické lieky do rakovinových buniek. Po naviazaní na špecifické ciele exprimované na rakovinových bunkách ADC uvoľňuje cytotoxické lieky do rakovinových buniek. Spoločnosť Alpha Lifetech môže tiež poskytnúť zákazníkom komplexné služby v oblasti dozrievania afinity protilátok. Vďaka pokročilej optimalizácii mutácií a vysokokapacitnej technológii skríningu fágového displeja sa najskôr skrínujú protilátky s určitou afinitou a potom sa zavádzajú aminokyselinové mutácie na vytvorenie rôznych variantov. Následne sa pomocou skríningových techník vyhodnotili a skrínovali protilátky s vysokou afinitou. Po viacerých kolách optimalizácie a štrukturálnej analýzy sa nakoniec získali protilátky s vyššou afinitou a silnejšou špecifickosťou.

Spoločnosť Alpha Lifetech dokáže zostaviť rôzne typy fágových zobrazovacích knižníc protilátok, vrátane imunitných knižníc, natívnych knižníc, polosyntetických knižníc a syntetických knižníc. Vďaka vysokej kapacite protilátkových knižníc je možné získať vysoko špecifické protilátky. Je možné poskytnúť viacero fágových vektorov, ako napríklad pMECS, pComb3X a pCANTAB 5E, ako aj kmene ako TG1 E. coli, XL1 Blue a ER2738. Okrem kapacity knižnice až 10^9 je vysoká aj miera vkladania cieľových fragmentov do knižnice, čo vytvára dostatočné podmienky na skríning protilátok, ktoré uspokoja zákazníkov. Vývojový diagram služby prípravy protilátok spoločnosti Alpha Lifetech založenej na technológii fágového zobrazovania je znázornený na obrázku 1.

Obr. 1 Schéma procesu prípravy monoklonálnych protilátok na základe technológie fágového displeja.

Pracovný postup produkcie protilátok fágovým displejom

Kroky	Obsah služby	Časová os
Krok 1: Imunizácia zvierat	(1) Imunizácia zvierat 4-krát, posilňovacia imunizácia 1 dávka, celkovo 5 imunizovaných dávok. (2) Pred imunizáciou bolo odobraté negatívne sérum a pri štvrtej dávke bol vykonaný test ELISA na zistenie titra séra. (3) Ak titer sérových protilátok po štvrtej dávke spĺňa požiadavky, 7 dní pred odberom krvi sa podá jedna ďalšia dávka imunizácie. Ak nespĺňa požiadavky, bude pokračovať rutinná imunizácia. (4) Kvalifikovaná účinnosť, odber krvi a separácia monocytov	10 týždňov
Krok 2: Príprava cDNA	(1) Extrakcia celkovej RNA PBMC (súprava na extrakciu RNA) (2) Príprava cDNA pomocou vysoko presnej RT-PCR (súprava na reverznú transkripciu)	1 deň
Krok 3: Vytvorenie knižnice protilátok	(1) Gény boli amplifikované dvoma kolami PCR s použitím cDNA ako templátu. (2) Konštrukcia a transformácia fágu: zostrih génov s fágovým vektorom, elektroporačná transformácia hostiteľských baktérií TG1, konštrukcia knižnice protilátok. (3) Identifikácia: Náhodne vybrať 24 klonov, miera pozitívnej PCR identifikácie + miera inzercie. (4) Asistovaná príprava fágov: amplifikácia + purifikácia fága M13. (5) Záchrana knižnice fágového displeja	3-4 týždne
Krok 4: Skríning knižnice protilátok (3 kolá)	(1) Štandardný 3-kolový skríning (skríning na pevnej fáze): tlakový skríning na odstránenie nešpecifických protilátok v maximálnej možnej miere. (2) Amplifikácia jedného klonu selektovaného bakteriofága + expresia indukovaná IPTG + detekcia pozitívnych klonov ELISA. (3) Všetky pozitívne klony boli vybrané na sekvenovanie génov.	4-5 týždňov

Výhoda technológie fágového displeja

Spoločnosť Alpha Lifetech má bohaté skúsenosti v oblasti vývoja protilátok. V priebehu rokov si spoločnosť Alpha Lifetech vybudovala komplexnú platformu pre vývoj protilátok.

Podporné služby

Podľa potrieb zákazníka vieme poskytnúť rôzne služby v oblasti výstavby imunitných knižníc na báze zvierat a skríningu knižníc s prírodnými protilátkami.

Viacero cieľov

K dispozícii sú služby objavovania viacerých cieľových protilátok: proteíny, peptidy, malé molekuly, vírusy, membránové proteíny, mRNA atď.

Viacero vektorov

Personalizovaná služba výstavby knižníc, vieme poskytnúť rôzne bakteriofágové vektory vrátane PMECS, pComb3X a pCANTAB 5E a upraviť ich podľa potrieb zákazníka.

Platforma pre dospelých

Skladovacia kapacita môže dosiahnuť 10^8-10^9, miery inzercie sú nad 90% a afinita protilátok získaných skríningom je vo všeobecnosti na úrovni nM pM.

Súvisiaca SLUŽBA

Stratégie vývoja viacerých protilátok

Služba vývoja monoklonálnych protilátok

Technologická platforma hybridómov

Platforma na triedenie jednotlivých B buniek

Platforma pre vývoj protilátok s fágovým displejom

vývoj monoklonálnych protilátok – Alpha Lifetech

Služba vývoja monoklonálnych protilátok

Ponúkame vývoj vysoko kvalitných, vysoko čistých a vysoko špecifických monoklonálnych protilátok vrátane produkcie myších monoklonálnych protilátok a králičích monoklonálnych protilátok.

Technologická platforma hybridómov

Vrátane imunizačného programu, služieb prípravy protilátok, purifikácie protilátok, vysokokapacitného sekvenovania protilátok, validácie protilátok atď.

Platforma na triedenie jednotlivých B buniek

Alpha Lifetech má výhody v čase skríningu a získavaní vysokokvalitných protilátok. Dokáže zabezpečiť návrh, syntézu a modifikáciu antigénov, imunitu zvierat, skríning obohatenia jednotlivých B buniek a sekvenovanie jednotlivých buniek.