Úvod do syntetizovaných knižníc protilátok

Syntetizovaná protilátková knižnica, známa aj ako De novo knižnica, je syntetická metóda, ktorá využíva techniky ako syntéza DNA alebo fágový displej na návrh a syntézu kompletných variabilných oblastí protilátok vrátane rámcových oblastí a CDR bez toho, aby sa spoliehala na knižnice naivných protilátok.

Knižnica polosyntetických protilátok sa vytvára kombináciou prirodzene sa vyskytujúcich knižníc protilátok so syntetickou diverzitou. Zvyčajne zahŕňa syntézu DNA oligonukleotidov za účelom vytvorenia súboru rôznych komplementárne určujúcich oblastí (CDR), ktoré sa potom kombinujú s konštantnou protilátkovou štruktúrou odvodenou z prírodných zdrojov, ako sú ľudské alebo zvieracie B bunky. Syntetizovaná CDR zavádza do knižnice diverzitu, čo vedie k protilátkam zacieleným na širokú škálu epitopov. Knižnica polosyntetických protilátok poskytuje kompromis medzi prirodzenou diverzitou imunitného systému a kontrolovanou diverzitou dosiahnutou syntetickými metódami.

Rozdiel medzi knižnicami naivných a syntetických protilátok závisí od zdroja imunoglobulínových génov. Rozdiel medzi čiastočne syntetizovanou a syntetizovanou knižnicou protilátok spočíva v tom, že prvá pozostáva z časti segmentov naivných protilátok, ako je ľahký alebo ťažký reťazec, a iba jeden z nich je syntetizovaný in vitro, zatiaľ čo syntetizovaná knižnica je úplne odvodená z umelej syntézy pomocou PCR in vitro.

Alpha Lifetech môže poskytnúť

Spoločnosť Alpha Lifetech Inc.vieme ponúknuť knižnicu čiastočne syntetizovaných/syntetizovaných protilátok zo zvierat a ľudí založenú na našej profesionálnej platforme na objavovanie protilátok. Vďaka dlhoročným skúsenostiam v oblasti genetickej modifikácie a konštrukcie knižníc je možné zostaviť syntetizované knižnice, ktoré sú schopné produkovať syntetické protilátky s afinitou a špecifickosťou presahujúcou kapacitu prirodzených protilátok.Alpha LifetechOdborníci s hrdosťou oznamujú, že môžeme zaručiť vysokú úspešnosť pri konštrukcii knižnice protilátok obsahujúcej 10^8 – 10^10 nezávislých klonov.

Spoločnosť Alpha Lifetech Inc.s hrdosťou ponúka komplexné služby v oblasti tvorby knižníc protilátok, ktoré spĺňajú rozmanité potreby výskumníkov z celého sveta, vrátane knižníc protilátok scFv, Fab, VHH a prispôsobených knižníc. Naším cieľom je pochopiť a uspokojiť požiadavky rôznych zákazníkov a pomôcť im s akýmikoľvek nadchádzajúcimi a vznikajúcimi problémami vo výskumnej práci.

Proces výstavby syntetizovaných protilátkových knižníc

Dizajn
Fáza návrhu zahŕňa výber rámcových štruktúr protilátok a oblastí určujúcich komplementaritu (CDR) na základe existujúcich sekvencií protilátok alebo štrukturálnych údajov. Syntetické protilátky CDR môžu byť tiež navrhnuté tak, aby zaviedli špecifické funkcie alebo zvýšili väzbové vlastnosti.

Syntéza
Syntetická DNA kódujúca navrhnuté sekvencie protilátok, vrátane rámcových oblastí aj CDR, sa syntetizuje chemickými alebo enzymatickými metódami.

Zhromaždenie
Syntetizované fragmenty DNA sa zostavia do expresných vektorov protilátok pomocou techník, ako je PCR, ligácia alebo Gibsonova zostava. Tieto vektory sa potom môžu zaviesť do expresných systémov, ako sú bakteriálne, kvasinkové alebo cicavčie bunky, na produkciu protilátok.

Skríning a výber
Vytvorené knižnice protilátok sa skrínujú a selektujú na protilátky s požadovanými vlastnosťami pomocou vysokovýkonných skríningových metód. To môže zahŕňať techniky, ako je fágový displej, kvasinkový displej alebo ribozómový displej, v závislosti od formátu knižnice a aplikácie.

Výstavba syntetizovaných protilátkových knižníc

Spoločnosť Alpha Lifetech Inc.poskytuje zákazníkom komplexné služby v oblasti návrhu a syntézy knižníc protilátok ligáciou repertoárov V-génov ťažkého a ľahkého reťazca do fágového vektora pomocou systému špecifickej rekombinácie Cre-lox, čím vytvára repertoár Fab zobrazených na fágu, ktorý obsahuje 6,5 × 10^10 klonov. Knižnica poskytla protilátky proti mnohým antigénom, niektoré s nanomolárnou afinitou. Generovanie knižnice ľudských protilátok je založené na technológii fágového displeja M13 (znázornenej na obrázku nižšie).