Razvojna platforma Aptamer

Aptameri so enoverižni oligonukleotidi (DNA, RNA ali XNA) z lastnostjo visoke afinitete in visoke specifičnosti, ki se specifično vežejo na tarčne molekule, kot so protitelesa, in se v veliki meri uporabljajo za razvoj biosenzorjev, diagnostiko in terapevtiko.

Platforma aptamer, ki jo zagotavlja Alpha Lifetech, vključuje dve kategoriji: platformo za sintezo aptamerjev, ki v glavnem vključuje storitev sinteze knjižnice aptamerjev SELEX in storitev razvoja aptamerjev (DNA, RNA ali XNA) ter platformo za pregledovanje aptamerjev, vključno s storitvami presejalnega pregleda, ki temeljijo na tehnologiji SELEX za proteine, peptide, celice, majhne molekule, kovinske ione in druge ciljne molekule, kot tudi storitve optimizacije in analize identifikacije aptamerjev na nižji stopnji.

Platforma za sintezo aptamerjev

Storitev sinteze knjižnice aptamer SELEX

Storitev sinteze knjižnice aptamerjev SELEX vključuje predvsem izdelavo knjižnice, ki vsebuje veliko število naključnih enoverižnih oligonukleotidnih zaporedij s kemično sintezo in vitro v skladu s ciljnimi molekulami. Konstrukcija knjižnice je izhodišče tehnologije SELEX, ki zagotavlja obilo zaporedij kandidatov za nadaljnji postopek presejanja z izdelavo ogromnih naključnih knjižnic in povečuje možnost pregledovanja aptamerjev z visoko afiniteto.

Sinteza knjižnice je v glavnem razdeljena na naslednje korake:

Koraki	Podrobnosti tehnologije
Identificirajte ciljne molekule	Identificirajte ciljne molekule, ki jih je treba pregledati za aptamerje, ki so lahko proteini, nukleinske kisline, majhne molekule, kovinski ioni itd.
Oblikovanje naključnega zaporedja	Dolžina naključnega zaporedja, osnovna sestava in drugi parametri so bili zasnovani v skladu z značilnostmi ciljnih molekul in zahtevami presejanja. Običajno so naključna zaporedja dolga od deset do sto baz.
Sinteza fiksnih zaporedij	Oblikovani in sintetizirani so oligonukleotidni fragmenti s fiksnimi sekvencami (kot so sekvence začetnih zaporedij PCR) na obeh koncih, ki bodo uporabljeni v nadaljnjem pomnoževanju in presejalnem procesu.

Sintetizirano knjižnico je treba še dodatno obdelati za nadzor kakovosti. Koncentracija knjižnice je bila določena, da se zagotovi njena uporabnost v nadaljnjem procesu presejanja. Raznolikost in točnost naključnih zaporedij v knjižnici sta bili preverjeni s sekvenciranjem in drugimi metodami, da bi zagotovili, da kakovost knjižnice izpolnjuje zahteve presejanja.

Z zgornjimi koraki je mogoče sintetizirati visokokakovostno in zelo raznoliko knjižnico aptamerjev SELEX, ki lahko zagotovi obilo zaporedij kandidatov za nadaljnji postopek presejanja.

Storitve razvoja aptamerjev (DNA, RNA ali XNA)

Aptameri se običajno nanašajo na aptamerje nukleinske kisline. Aptameri nukleinske kisline vključujejo aptamere DNA, aptamere RNA in aptamere XNA, ki so kemično modificirani aptameri nukleinske kisline. Tehnika SELEX se pogosto uporablja za razvoj aptamerjev. Osnovni delovni tok storitev razvoja aptamerja vključuje izdelavo knjižnice, vezavo tarče, izolacijo in čiščenje, pomnoževanje, več krogov presejanja in identifikacijo zaporedja. Že vrsto let se osredotočamo na gradnjo knjižnic in bogate izkušnje pri razvoju aptamerjev. Zavezani smo k zagotavljanju boljših storitev strankam.

Tehnološki proces SELEX

Postopek SELEX je sestavljen iz več krogov, od katerih je vsak sestavljen iz naslednjih ključnih korakov:

Vezava knjižnice in cilja

Konstruirana knjižnica nukleinskih kislin je pomešana s specifičnimi ciljnimi molekulami (kot so proteini, spojine majhnih molekul itd.), tako da imajo zaporedja nukleinskih kislin v knjižnici možnost, da se vežejo na ciljne molekule.

Izolacija nevezanih molekul

Zaporedja nukleinske kisline, ki niso vezana na tarčno molekulo, se iz zmesi ločijo s posebnimi metodami, kot je afinitetna kromatografija, ločevanje z magnetnimi kroglicami itd.

Pomnoževanje vezavnih molekul

Zaporedje nukleinske kisline, vezano na ciljno molekulo, se pomnoži, običajno s tehnologijo verižne reakcije s polimerazo (PCR). Za naslednjo fazo presejanja bodo pomnožene sekvence uporabljene kot začetna knjižnica.

Slika 1: Postopek presejanja SELEX

Aptamer presejalna platforma

Presejalna storitev Aptamer

Alpha Lifetech ponuja raznolik nabor specializiranih storitev presejanja aptamerjev z uporabo različnih metodologij SELEX za različne vrste vaših molekul:

Vrste ciljev	Tehnične podrobnosti
Preverjanje beljakovinskih aptamerjev s strani SELEX	Glavni namen presejanja proteinskih aptamerjev je presejanje aptamerjev, ki se lahko specifično vežejo na ciljne proteinske molekule. Te aptamerje je enostavneje sintetizirati, bolj stabilni in manj dovzetni za okoljske dejavnike.
Preverjanje peptidnih aptamerjev s SELEX-om	Peptidni aptameri so razred kratkih peptidnih zaporedij z visoko specifičnostjo in afiniteto, ki se lahko specifično vežejo na ciljne snovi in kažejo širok spekter možnosti uporabe na biomedicinskem področju. S posebnim postopkom presejanja so peptidni aptameri, ki se lahko specifično vežejo na ciljne molekule, pregledani iz velikega števila knjižnic naključnih peptidnih zaporedij.
Preskušanje aptamerjev, specifičnih za celice (Cell-SELEX)	Kot tarče so pripravljene tarčne celice ali specifične molekule na celični površini. Tarče so lahko cele celice, receptorji na celični membrani, beljakovine ali druge majhne molekule.
Preverjanje majhnih molekulskih aptamerjev s Capture SELEX	Capture SELEX je in vitro presejalna tehnika za presejanje majhnih molekulskih aptamerjev, ki je različica SELEX-a. Capture SELEX je še posebej primeren za pregledovanje aptamerjev majhnih molekulskih tarč, ki imajo običajno manj funkcionalnih skupin in jih je težko imobilizirati neposredno na nosilce trdne faze.
Storitve SELEX na osnovi živih živali	Storitev presejanja na živih živalih je eksperimentalna tehnika, ki se pogosto uporablja na področju bioznanosti, medicine in biotehnologije, ki uporablja žive živali kot poskusne modele za pregledovanje in vrednotenje specifičnih molekul, zdravil, terapevtikov ali bioloških procesov. Storitve so zasnovane tako, da simulirajo fiziološko okolje v človeškem telesu za natančnejšo napoved in ovrednotenje učinkovitosti in varnosti eksperimentalnih rezultatov v človeškem telesu.

Storitev optimizacije Aptamer

Hidrofilnost, velika izguba afinitete med proizvodnjo in hitro izločanje aptamerjev omejujejo njihovo uporabo. Trenutno so bile raziskane različne metode optimizacije za izboljšanje učinkovitosti aptamerjev.

Imamo tudi različne načine za optimizacijo aptamera, ki sestoji iz okrnitve, modifikacij, konjugacije na ustrezno skupino (tiol, karboksi, amin, fluorofor itd.).

Storitev analize karakterizacije aptamerja

Storitev analize karakterizacije aptamerja se nanaša na strokovno storitev ločljivosti strukture vrednotenja delovanja in funkcionalnega preverjanja pridobljenega aptamerja, da se zagotovi, da aptamer izpolnjuje zahteve glede specifične sposobnosti vezave, stabilnosti in specifičnosti. Vključuje predvsem analizo afinitete in specifičnosti, oceno stabilnosti in preverjanje biološke funkcije.