Platforma za razvoj protiteles s fagnim prikazom

Alpha Lifetech z bogatimi izkušnjami na projektih odkrivanja protiteles lahko nudi prilagojene storitve monoklonskih in poliklonskih protiteles za več vrst, kot tudi storitve izdelave in presejanja knjižnic protiteles. Alpha Lifetech lahko strankam zagotovi kakovostne protitelesa in rekombinantna protitelesa ter ustrezne storitve za pripravo učinkovitih, visoko specifičnih in stabilnih protiteles. Z uporabo celovitih platform protiteles in inženiringa protiteles nudimo storitve, ki zajemajo pred in po proizvodnji protiteles, vključno s tehničnimi storitvami, kot so priprava protiteles, čiščenje, sekvenciranje protiteles in validacija.

Alpha Lifetech ima zrelo platformo za odkrivanje protiteles, ki strankam ponuja vrsto storitev, vključno z imunostjo živali, izdelavo in presejanjem knjižnic protiteles za fagni prikaz, sekvenciranjem protiteles, izražanjem protiteles, čiščenjem protiteles, validacijo protiteles in označevanjem protiteles na podlagi hibridomske tehnologije, tehnologije posameznih celic B, tehnologije fagnega prikaza in še več. Alpha Lifetech ima standardno proizvodno linijo, poleg storitev priprave protiteles pa lahko nudi tudi podporne storitve, kot so humanizacija protiteles, zorenje afinitete protiteles, načrtovanje in razvoj zdravil ADC ter načrtovanje nadaljnjega zaporedja CAR-T. Hkrati je Alpha Lifetech zgradil knjižnico protiteles, ki temelji na platformah tehnologije fagnega prikaza M13, T4 in T7, z zmogljivostjo shranjevanja do 10^8-10^9. Stopnja pozitivnega, stopnja vstavljanja in raznolikost knjižnice lahko dosežejo več kot 90 %.

Tehnologija fagnega prikaza

Proizvodnja monoklonskih protiteles je bila prvotno pripravljena z uporabo tehnologije hibridomskih monoklonskih protiteles za proizvodnjo mišjih hibridomskih monoklonskih protiteles. Natančneje, z zlitjem celic vranice imuniziranih miši z mielomskimi celicami ljudi ali miši nastanejo hibridomske celice, ki izločajo specifična hibridomska monoklonska protitelesa. S humanizirano modifikacijo mišjih monoklonskih protiteles in gensko inženirsko modifikacijo protiteles, da se jim da konstantna humana imunoglobulinska regija, se lahko zmanjša njihova imunogenost. Inženiring monoklonskih protiteles se pogosto uporablja v biomedicinskih in kliničnih aplikacijah.

Alpha Lifetech lahko nudi celovite storitve inženiringa protiteles, od načrtovanja predkliničnih raziskovalnih protokolov do odkrivanja konjugatov protiteles in zdravil (ADC) in validacije na živalih. Konjugati protiteles in zdravil (ADC) lahko dostavijo kemoterapevtska zdravila v rakave celice. Po vezavi na specifične tarče, izražene na rakavih celicah, ADC sprosti citotoksična zdravila v rakave celice. Alpha Lifetech lahko strankam zagotovi tudi celovite storitve zorenja afinitete protiteles. Z napredno optimizacijo mutacij in visokozmogljivo tehnologijo presejanja fagov se najprej pregledajo protitelesa z določeno afiniteto, nato pa se uvedejo mutacije aminokislin za ustvarjanje različnih variant. Nato so bila z uporabo presejalnih tehnik ovrednotena in pregledana protitelesa z visoko afiniteto. Po več krogih optimizacije in strukturne analize so bila končno pridobljena protitelesa z višjo afiniteto in močnejšo specifičnostjo.

Alpha Lifetech lahko konstruira različne vrste knjižnic protitelesnih fagnih prikazov, vključno z imunskimi knjižnicami, nativnimi knjižnicami, polsintetičnimi knjižnicami in sintetičnimi knjižnicami. Zaradi visoke zmogljivosti knjižnic protiteles je mogoče pridobiti visoko specifična protitelesa. Zagotoviti je mogoče več fagemidnih vektorjev, kot so pMECS, pComb3X in pCANTAB 5E, ter seve, kot so TG1 E. coli, XL1 Blue in ER2738. Poleg zmogljivosti knjižnice do 10^9 je visoka tudi stopnja vstavljanja ciljnih fragmentov v knjižnico, kar ustvarja zadostne pogoje za presejanje protiteles, ki zadovoljujejo stranke. Diagram poteka storitve priprave protiteles podjetja Alpha Lifetech, ki temelji na tehnologiji fagnega prikaza, je prikazan na sliki 1.

Slika 1 Diagram postopka za pripravo monoklonskih protiteles na osnovi tehnologije fagnega prikaza.

Delovni potek proizvodnje protiteles s fagnim prikazom

Koraki	Vsebina storitve	Časovnica
1. korak: Imunizacija živali	(1) Imunizacija živali 4-krat, poživitvena imunizacija 1 odmerek, skupno 5 odmerkov imunizacije. (2) Pred imunizacijo je bil zbran negativen serum, pri četrtem odmerku pa je bil opravljen test ELISA za ugotavljanje titra seruma. (3) Če titer serumskih protiteles po četrtem odmerku izpolnjuje zahteve, se 7 dni pred odvzemom krvi da še en odmerek imunizacije. Če ne izpolnjuje zahtev, se nadaljuje rutinska imunizacija. (4) Kvalificirana potenca, odvzem krvi in ločevanje monocitov	10 tednov
2. korak: Priprava cDNA	(1) Ekstrakcija celotne RNA PBMC (komplet za ekstrakcijo RNA) (2) Priprava cDNA z visoko natančnostjo RT-PCR (komplet za reverzno transkripcijo)	1 dan
3. korak: Izdelava knjižnice protiteles	(1) Z uporabo cDNA kot predloge smo gene pomnožili z dvema krogoma PCR. (2) Konstrukcija in transformacija faga: spajanje genov s fagemidnim vektorjem, elektroporacijska transformacija gostiteljskih bakterij TG1, konstrukcija knjižnice protiteles. (3) Identifikacija: Naključno izberite 24 klonov, stopnja pozitivne PCR identifikacije + stopnja vstavitve. (4) Priprava faga s pomočjo: amplifikacija + čiščenje faga M13. (5) Reševanje knjižnice fagnega prikaza	3–4 tedne
4. korak: Pregled knjižnice protiteles (3 krogi)	(1) Privzeti 3-krožni presejalni test (presejalni test na trdni fazi): presejalni test pod pritiskom za čim večjo odstranitev nespecifičnih protiteles. (2) Amplifikacija posameznega klona, izbran bakteriofag + IPTG-inducirana ekspresija + ELISA detekcija pozitivnih klonov. (3) Vsi pozitivni kloni so bili izbrani za sekvenciranje genov.	4–5 tednov

Prednost tehnologije fagnega prikaza

Alpha Lifetech ima bogate izkušnje na področju razvoja protiteles. Skozi leta je Alpha Lifetech vzpostavil celovito platformo za razvoj protiteles.

Podporne storitve

V skladu s potrebami strank lahko nudimo različne storitve gradnje imunskih knjižnic na osnovi živali in storitve presejanja knjižnic naravnih protiteles.

Več ciljev

Na voljo so storitve odkrivanja več ciljnih protiteles: beljakovine, peptidi, majhne molekule, virusi, membranske beljakovine, mRNA itd.

Več vektorjev

Prilagojena storitev gradnje knjižnic, nudimo lahko različne bakteriofagne vektorje, vključno s PMECS, pComb3X in pCANTAB 5E, in jih prilagodimo potrebam strank.

Zrela platforma

Zmogljivost shranjevanja lahko doseže 10^8-10^9, stopnje vstavljanja so nad 90%, afiniteta protiteles, pridobljenih s presejanjem, pa je običajno na ravni nM pM.

Sorodna STORITEV

Strategije za razvoj več protiteles

Storitev za razvoj monoklonskih protiteles

Hibridomska tehnološka platforma

Platforma za sortiranje posameznih celic B

Platforma za razvoj protiteles s fagnim prikazom

razvoj monoklonskih protiteles - Alpha Lifetech

Storitev za razvoj monoklonskih protiteles

Nudimo vam visokokakovostne, visoko čiste in zelo specifične storitve razvoja monoklonskih protiteles, vključno s proizvodnjo mišjih in kunčjih monoklonskih protiteles.

Hibridomska tehnološka platforma

Vključno s programom imunizacije, storitvami priprave protiteles, čiščenjem protiteles, visokozmogljivim sekvenciranjem protiteles, validacijo protiteles itd.

presejalni testi B-celic - Alpha Lifetech

Platforma za sortiranje posameznih celic B

Alpha Lifetech ima prednosti pri času presejanja in pridobivanju visokokakovostnih protiteles. Omogoča lahko načrtovanje, sintezo in modifikacijo antigenov, določanje imunosti pri živalih, presejanje obogatitve posameznih celic B in sekvenciranje posameznih celic.