Platforma za razvoj protiteles za prikaz fagov

Alpha Lifetech lahko s svojimi obsežnimi projektnimi izkušnjami pri odkrivanju protiteles zagotovi prilagojene storitve monoklonskih in poliklonskih protiteles za več vrst, kot tudi gradnjo knjižnice protiteles in storitve presejanja. Alpha Lifetech lahko strankam zagotovi izdelke z zagotovljeno kakovostjo protiteles in rekombinantnih protiteles ter ustrezne storitve za pripravo učinkovitih, visoko specifičnih in stabilnih protiteles. Z uporabo celovitih platform protiteles in inženiringa protiteles zagotavljamo storitve, ki pokrivajo proizvodnjo protiteles navzgor in navzdol, vključno s tehničnimi storitvami, kot so priprava protiteles, čiščenje, sekvenciranje protiteles in validacija.

Alpha Lifetech ima zrelo platformo za odkrivanje protiteles, ki strankam zagotavlja vrsto storitev, vključno z imunostjo živali, konstrukcijo in presejanjem knjižnice protiteles s prikazom fagov, sekvenciranjem protiteles, izražanjem protiteles, čiščenjem protiteles, validacijo protiteles in označevanjem protiteles na podlagi hibridomske tehnologije, tehnologije ene celice B, tehnologije prikaza fagov in več. Alpha Lifetech ima standardno proizvodno linijo in poleg storitev priprave protiteles je mogoče zagotoviti tudi podporne storitve, kot so humanizacija protiteles, zorenje afinitete protiteles, načrtovanje in razvoj zdravil ADC ter naknadno načrtovanje zaporedja CAR-T. Istočasno je Alpha Lifetech izdelal knjižnico protiteles, ki temelji na tehnoloških platformah za prikaz fagov M13, T4 in T7, s kapaciteto shranjevanja do 10^8-10^9. Pozitivna stopnja, stopnja vstavljanja in raznolikost knjižnice lahko dosežejo več kot 90 %.

Tehnologija prikaza fagov

Proizvodnja monoklonskih protiteles je bila prvotno pripravljena s tehnologijo hibridomskih monoklonskih protiteles za proizvodnjo mišjih hibridomskih monoklonskih protiteles. Natančneje, s spajanjem celic vranice iz imuniziranih miši s celicami mieloma iz ljudi ali miši nastanejo hibridomske celice, ki izločajo specifična hibridomska monoklonska protitelesa. S humanizirano modifikacijo mišjih monoklonskih protiteles in gensko inženirsko modifikacijo protiteles, da dobijo konstantno humano imunoglobulinsko regijo, je mogoče zmanjšati njihovo imunogenost. Inženiring monoklonskih protiteles se pogosto uporablja v biomedicinskih in kliničnih aplikacijah.

Alpha Lifetech lahko zagotovi storitve inženiringa protiteles na enem mestu, od zasnove predkliničnega raziskovalnega protokola do odkrivanja konjugatov protiteles (ADC) in validacije na živalih. Konjugati zdravil protiteles (ADC) lahko dostavijo zdravila za kemoterapijo rakavim celicam. Po vezavi na specifične tarče, izražene na rakavih celicah, ADC sprosti citotoksična zdravila v rakave celice. Alpha Lifetech lahko strankam nudi tudi celovite storitve zorenja afinitete protiteles. Z napredno optimizacijo mutacij in visoko zmogljivo tehnologijo presejanja prikaza fagov se najprej pregledajo protitelesa z določeno afiniteto, nato pa se uvedejo mutacije aminokislin, da se ustvarijo različne različice. Nato so protitelesa z visoko afiniteto ovrednotili in pregledali z uporabo presejalnih tehnik. Po več krogih optimizacije in strukturne analize so bila na koncu pridobljena protitelesa z večjo afiniteto in močnejšo specifičnostjo.

Alpha Lifetech lahko izdela različne vrste knjižnic za prikaz fagov protiteles, vključno z imunskimi knjižnicami, izvornimi knjižnicami, polsintetičnimi knjižnicami in sintetičnimi knjižnicami. Na podlagi velike zmogljivosti knjižnic protiteles je mogoče pridobiti visoko specifična protitelesa. Zagotoviti je mogoče več fagemidnih vektorjev, kot so pMECS, pComb3X in pCANTAB 5E, kot tudi seve, kot so TG1 E. coli, XL1 Blue in ER2738. Poleg zmogljivosti knjižnice do 10^9 je tudi stopnja vstavljanja ciljnih fragmentov knjižnice visoka, kar ustvarja zadostne pogoje za presejanje protiteles, ki zadovoljijo stranke. Diagram poteka storitve priprave protiteles Alpha Lifetech, ki temelji na tehnologiji prikaza fagov, je prikazan na sliki 1.

Slika 1 Diagram postopka za pripravo monoklonskih protiteles na osnovi tehnologije fagnega prikaza.

Potek dela za proizvodnjo protiteles za prikaz faga

Koraki	Vsebina storitve	Časovnica
1. korak: Imunizacija živali	(1) Imunizacija živali 4-krat, poživitvena imunizacija 1 odmerek, skupno 5 cepljenih odmerkov. (2) Zbran je bil negativni serum pred imunizacijo in ELISA je bil opravljen na četrtem odmerku za odkrivanje serumskega titra. (3) Če titer protiteles v serumu četrtega odmerka ustreza zahtevam, se 7 dni pred odvzemom krvi aplicira en dodatni odmerek imunizacije. Če ne izpolnjuje zahtev, se bo nadaljevalo rutinsko cepljenje. (4) Kvalificirana moč, odvzem krvi in ločevanje monocitov	10 tednov
2. korak: Priprava cDNA	(1) Ekstrakcija celotne RNA PBMC (komplet za ekstrakcijo RNA) (2) Visoko zvestoben RT-PCR pripravek cDNA (komplet za reverzno transkripcijo)	1 dan
3. korak: Izdelava knjižnice protiteles	(1) Z uporabo cDNA kot predloge so bili geni pomnoženi z dvema krogoma PCR. (2) Konstrukcija in transformacija faga: fagmidni vektor za spajanje genov, transformacija gostiteljske bakterije TG1 z elektroporacijo, konstrukcija knjižnice protiteles. (3) Identifikacija: Naključno izberite 24 klonov, stopnja pozitivnih identifikacije PCR + stopnja vstavitve. (4) Priprava s pomožnimi fagi: pomnoževanje fagov M13 + čiščenje. (5) Reševanje knjižnice prikaza fagov	3-4 tedne
4. korak: Pregled knjižnice protiteles (3 krogi)	(1) Privzeto 3-krožno presejanje (presejanje v trdni fazi): presejanje pod pritiskom za odstranitev nespecifičnih protiteles v največji možni meri. (2) Izbran bakteriofag za pomnoževanje enega klona+IPTG inducirana ekspresija+ELISA detekcija pozitivnih klonov. (3) Vsi pozitivni kloni so bili izbrani za gensko sekvenciranje.	4-5 tednov

Prednost tehnologije prikaza fagov

Alpha Lifetech ima bogate izkušnje na področju razvoja protiteles. Z leti je Alpha Lifetech vzpostavil celovito platformo za razvoj protiteles.

Podporne storitve

Zagotovimo lahko različne storitve gradnje imunskih knjižnic na živalih in storitve presejanja knjižnic naravnih protiteles glede na potrebe strank

Več tarč

Na voljo so številne storitve odkrivanja tarčnih protiteles: proteini, peptidi, majhne molekule, virusi, membranski proteini, mRNA itd.

Več vektorjev

Prilagojena storitev gradnje knjižnice, nudimo lahko različne vektorje bakteriofagov, vključno s PMECS, pComb3X in pCANTAB 5E, in jih spreminjamo glede na potrebe strank

Zrela platforma

Zmogljivost shranjevanja lahko doseže 10 ^ 8-10 ^ 9, vse stopnje vstavitve so nad 90 %, afiniteta protiteles, pridobljenih s presejanjem, pa je na splošno na ravni nM pM

Povezana STORITEV

Več strategij za razvoj protiteles

Služba za razvoj monoklonskih protiteles

Tehnološka platforma Hybridoma

Platforma za razvrščanje posameznih celic B

Platforma za razvoj protiteles za prikaz fagov

razvoj monoklonskih protiteles-Alpha Lifetech

Služba za razvoj monoklonskih protiteles

Zagotavljamo lahko storitve razvoja visokokakovostnih, visoko čistih in visoko specifičnih monoklonskih protiteles, vključno s proizvodnjo mišjih monoklonskih protiteles in kunčjih monoklonskih protiteles

Tehnološka platforma Hybridoma

Vključno s programom imunizacije, storitvami priprave protiteles, čiščenjem protiteles, visoko zmogljivim sekvenciranjem protiteles, validacijo protiteles itd.

Platforma za razvrščanje posameznih celic B

Alpha Lifetech ima prednosti pri presejalnem času in pridobivanju visokokakovostnih protiteles. Zagotavlja lahko načrtovanje, sintezo in modifikacijo antigena, imunost živali, obogatitev ene celice B, sekvenciranje ene celice.