Auaunaga Atina'e Antibody Monoclonal

Alpha Lifetech Inc.e mafai ona tu'uina atu ai le vavalo o epitope, fa'aputuga o peptide, fa'aalia o porotini, gaosiga o antibody polyclonal, po'o le monoclonal fa'apea fo'i ma le fa'amamāina o antibody mai le fa'ato'aga o sela, vai ascites po'o le serum atoa.

Alpha Lifetech Inc.e iai le poto masani i le tuʻuina atu i tagata faʻatau o auaunaga eseese o le laina o sela e mautu e aofia ai sela hybridoma, laina o sela e faʻasaʻo ai genome, laina o sela knockdown, ma laina o sela overexpression. Matou te taumafai e ofoina atu auaunaga faʻapitoa o laina o sela i tagata faʻatau uma ma o a matou auaunaga ua faʻamaonia ma faʻatuatuaina.

Fuafuaga mo le Atina'eina o Antibody

1. Fuafuaga ma sauniuniga o le antigen
O nei antigens e mafai ona avea ma porotini, peptides, po'o isi molecules. O le mamanuina o immunogens e mana'omia ai se auala atoatoa e tu'ufa'atasia ai le malamalama i le fausaga o antigen, immunology, ma faiga e tu'uina atu ai. O lo'o iai i le Alpha Lifetech le tekinolosi o le mamanuina o antigen e mafai ona mamanuina immunogens mo tagata fa'atau e mana'omia.
E tu'uina atu e le Alpha Lifetech ni oloa porotini toe fa'afouina mo tagata fa'atau e filifili mai ai. E tele a matou faiga fa'aalia o porotini, e pei o le faiga fa'aalia o le E. coli, faiga fa'aalia o le yeast, faiga fa'aalia o le baculovirus-insect, faiga fa'aalia o mammalian, ma isi mea fa'apena, e gaosia ai porotini toe fa'afouina e te mana'omia mo su'esu'ega.

2. Puipuiga o manu
E mafai e le Alpha Lifetech ona tuʻuina atu ni vailaʻau e puipuia ai le tino o tagata faʻatau, ma o manu e puipuia ai le tino e pei o isumu, lapiti, mamoe, alpacas, guinea pig, hamsters, ma isi mea faapena e maua mo oe e filifili mai ai.

3. Metotia o le gaosiga o le antibody monoclonal

●Gaosiga o Mabs e ala i le tekinolosi Hybridoma
O le Hybridoma o se sela fa'afefiloi e gaosia e ala i le tu'ufa'atasia o ituaiga sela e lua, o le laina sela myeloma o isumu ma sela plasma (lymphocyte B), lea e mafai ai e le sela heterozygous ona gaosia pea ni antibodies e faasaga i le antigen e fiafia i ai i totonu o le vitro. O le gaosiga o se laina sela hybridoma e aofia ai vaega e tolu: mamanu antigen (haptens, mole mole laiti, ma peptides), tui puipuia o manu, tu'ufa'atasiga o sela, ma le siakiina lelei o le clone. Fa'aaogaina auala tulaga ese o tui puipuia, matou te maua ai le maualuga tele o le lelei o le tu'ufa'atasiga o sela (1-10 hybridomas i le afe sela B) ma le maualuga o le titers o le antibody, fa'ateleina ai lo matou fua faatatau o le manuia i su'ega fa'ata'ita'i mulimuli ane e aofia ai le siakiina o meaola, su'ega fa'avae i totonu o sela, ma su'esu'ega i manu.

●Gaosiga o Mabs e ala i le tekinolosi fa'aaliga phage
O le Phage display e ofoina atu ai se isi metotia mo le gaosia o monoclonal antibodies. O le B-lymphocytes e vavae ese mai le toto o manu ma aveese a latou mRNA. E ala i le PCR, o lenei mRNA e liua i le cDNA, lea e faʻateleina ai vaega uma o le VH ma le VL. Ona faʻapipiʻiina lea o nei vaega i totonu o se vector, e masani lava o ni fasi fesuiaʻi e tasi le filifili (scFv), faʻatasi ai ma le porotini PIII o se bacteriophage. Mulimuli ane, o lenei fausaga e faʻaaogaina e faʻamaʻi ai le E. coli, ma iu ai ina faia se faletusi o loʻo i ai pe tusa ma le 10^10 sela e ala i le faʻamaʻiina i se phage fesoasoani. Ona mafai lea e le E. coli ona faʻasaʻoloto le bacteriophage o loʻo i ai vaega o le VH ma le VL o se vaega o lona ufi. A maeʻa lenei mea, o vaega faʻapitoa o le VH ma le VL e faʻatatau i le antigen e fiafia i ai e mafai ona filifilia ma faʻaaoga e toe faʻafoʻisia ai le E. coli i le bacteriophage. Ona vavae ese lea o sela o loʻo i ai le plasmid ma faʻasologaina.

4. Su'esu'ega o le Fusion

●Fa'atasiga ma Filifiliga o Sela
Ona fa'apipi'i lea o sela B ua seleseleina ma sela myeloma, o sela ia o le kanesa e mafai ona fa'ateleina pea i totonu o le totoina o siama. O le fa'apipi'iina e masani ona fa'atinoina e fa'aaoga ai se metotia e pei o le fa'apipi'iina o le polyethylene glycol (PEG).
A maeʻa ona tuʻufaʻatasia, ona totoina lea o sela hybridoma i totonu o se auala filifilia e naʻo hybridoma e mafai ona ola ai. E masani ona iai le aminopterin i le auala, lea e taofia ai le tuputupu aʻe o sela myeloma e leʻi tuʻufaʻatasia.

●Su'esu'ega ma le Fa'apipi'iina
O sela hybridoma e maua mai ai e su'esu'eina mo le gaosiga o antibodies e patino i le antigen fa'amoemoeina. E masani ona faia lenei mea e fa'aaoga ai metotia e pei o le enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blot, immunoprecipitation, ma le flow cytometry.

O le taimi lava e iloa ai sela hybridoma o loʻo gaosia le antibody, ona kopiina lea e faʻatupuina ai se faitau aofaʻi o sela tutusa. O lenei mea e faʻamautinoa ai o le antibody o loʻo gaosia e sela hybridoma taʻitasi e tutusa.

5. Fa'amaoniga o le Galuega a le Antibody
E tu'uina atu e le Alpha Lifetech le fa'amaoniga o le galuega a le antibody, e pei o le Western blotting, immunohistochemistry, po'o le functional assays, e fa'ailoa ai monoclonal antibodies ma fa'amaonia ai le patino o le antibody, le vavalalata, ma le aoga.

6. Fa'aleleia atili o le Antibody
O le fa'amamāina o antibodies mai le supernatant o le culture e fa'aaoga ai metotia e pei o le protein A po'o le protein G affinity chromatography, ma e mafai fo'i e le Alpha Lifetech ona tu'uina atu ni metotia e fa'asa'o ai antibody e fa'aleleia atili ai le antibody affinity.

7. Gaosiga o le antibody
E mafai e le Alpha Lifetech ona iloilo ni sui tauva mo ni fa'aoga e su'e ai siama maualuluga ma ni gaosiga tetele.

fesili masanifesili masani

Fesili e Masani Ona Fesiligia e uiga i le atina'eina o le monoclonal antibody

1

Auala e filifili ai le hybridoma fusion sa'o?

I le taimi o le faagasologa o le fusion, e 10-15 96-well microtiter plates e totoina i le fusion hybrid mixture. O plates taitasi e fafagaina i le HAT-IMDM selection media ma tausia i totonu o se incubator carbon dioxide i le 37 tikeri Celsius. 9 - 14 aso talu ona maeʻa le fusion, e tofotofoina ai hybrid supernatants mo le i ai o le antibody faapitoa e fiafia i ai.
2

Auala e faʻaleleia atili ai le lelei o le filifiliga?

O le tu'ufa'atasia o sela plasma ma o latou pa'aga myeloma e le o se mea e 100% le aoga. E tusa lava pe i lalo o tulaga sili ona lelei ma le fa'aosofia sili ona aoga, o le tu'ufa'atasia o sela e maua ai lava se fa'afefiloi o sela e le'i tu'ufa'atasia ma sela e tu'ufa'atasia e mana'omia ona vavae'ese. Ina ia fa'aleleia atili le lelei o le faiga o le filifiliga, o sela myeloma e fa'aaogaina mo le tu'ufa'atasia e leai se HGPRT, o se enzyme autu i le auala o le salvage nucleotide. Ona fa'ato'aga lea o le fa'afefiloi i totonu o se HAT medium, lea e na'o sela e iai le enzyme HGPRT, o hybridomas na mautofi mai le HGPRT mai sela plasma, na ola.
3

E fa'apefea ona su'esu'eina laina o sela hybridoma mo gaioiga o le antibody?

O le iloiloga o ituaiga hybrid o se laasaga taua tele. E masani lava, o le hybridoma, clone, ma le subclone supernatant screening e faia e ala i le enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), Western blot assay, ma le fluorescence activated cell sorting (FACS). Matou te filifili e faia uma le su'esu'ega o le supernatant i totonu o la matou lava fale su'esu'e.
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Tu'uina atu ni fa'atonuga auiliili i le auala e fa'atino ai le su'esu'ega o gaioiga o le antibody?

O fa'ata'ita'iga o le Hybridoma supernates e ono amata mai i le 500 i le 1,440 ma o le a sauni e faia le su'ega i aso 9-14. E mafai ona matou tula'i mai i totonu o le tolu i le lima aso pe atonu fo'i ua sauni uma i le aso e tasi, o lea e taua ai mo le fale su'esu'e a le tagata fa'atau ona sauniuni i ni vaiaso a'o le'i o'o i le taimi e fa'aaoga ai ni su'ega fa'apitoa lona lua e filifili mai ai.
5

Aiseā e manaʻomia ai ona faʻapipiʻi ni hybridomas lelei (subcloned)?

Ina ua maeʻa ona iloa lelei Wells i le taimi o le faiga muamua o le suʻesuʻega ELISA, ona faʻaliliuina lea o hybridomas i se voluma tele, e pei o le 24-well plates, e sauniuni ai mo le faiga o le subcloning. O le subcloning o hybridomas e masani ona faia i se metotia faʻatapulaʻaina o le faʻaitiitia ...ateleina o le faʻaitiitia o le faʻaitiitia o le faʻaitiitia o le faʻateleina o le faʻaitiitia o le faʻaitiitia o le faʻaaogaina o le hybridoma.
6

O a ni aogā o le faʻaaogaina o le tekinolosi hybridoma mo le sailia o antibody?

Ua viia laina sela fa'afefiloi ona o lo latou gafatia e gaosia ai antibodies e maualuga le vavalalata, mautu, ma le fa'apitoa i le auala e sili ona taugofie.