Platforma e Imunizimit të Kafshëve

Burimet shtazore të Alpha Lifetech janë të qarta, me leje inspektimi dhe karantine, prejardhje të qarta gjenetike, frekuencë të qartë imunizimi dhe të dhëna të hollësishme të intervaleve të imunizimit, duke ofruar shërbime të përshtatshme për prodhimin e antitrupave. Kryesisht imunizon kafshët Camelidae (Alpaca Liama dhe Deve), duke hedhur themelet për prodhimin e nano-trupave. Përveç kësaj, ajo mund të imunizojë edhe kafshë të zakonshme (si lepujt e bardhë të Zelandës së Re, minjtë dhe kafshë të tjera) sipas frekuencës së kërkuar të imunizimit dhe kërkesave të imunogjenitetit të klientëve, t'i nxjerrë dhe izolojë ato në PBMC dhe t'i përdorë ato për eksperimente të mëvonshme (si antitrupat monoklonalë, zhvillimi i antitrupave poliklonalë, etj.). Klientët mund të ofrojnë imunogjenët e tyre dhe ne do të kryejmë kontroll të rreptë të cilësisë mbi to. Nëse klientët ofrojnë imunogjenë viralë, ata duhet të çaktivizohen dhe ne do të kryejmë testime të çaktivizimit për të siguruar sigurinë. Në të njëjtën kohë, ne gjithashtu mund të personalizojmë imunogjenët përkatës sipas nevojave të klientëve.

Hyrje në Imunizimin e Kafshëve

Kur prodhohen antitrupa me origjinë shtazore, siç janë antitrupat monoklonalë, antitrupat poliklonalë dhe nanotrupat, hapi i parë është imunizimi i kafshëve dhe marrja e qelizave B, antitrupave ose PBMC-ve përkatëse për t'u përgatitur për prodhim të mëtejshëm të antitrupave, për të promovuar kërkimin shkencor bazë, për të zhvilluar mjete diagnostikuese klinike dhe për të lehtësuar zbulimin dhe zhvillimin e barnave të reja. Devetë, alpakat, Liama dhe deve të tjera në Camelidae mund të prodhojnë biblioteka nanotrupash (antitrupash me një domen të vetëm) përmes mbledhjes së gjakut imunitar dhe nxjerrjes së PBMC-ve. Lepujt dhe kafshët e tjera mund të imunizohen dhe antitrupat mund të nxirren nga trupat e tyre. Pas pastrimit, ato mund të përdoren për të prodhuar antitrupa poliklonalë. Minjtë, minjtë, etj., mund të përdoren për të prodhuar antitrupa monoklonalë duke bashkuar qelizat B të nxjerra imunitare me qelizat e mielomës. Para imunizimit, duhet t'i kushtohet vëmendje parimeve 3R (zëvendësimi, zvogëlimi, rafinimi), të cilat mund të zvogëlojnë ndjeshëm numrin e kafshëve të përdorura në minimumin e nevojshëm, të përmirësojnë procedurat eksperimentale dhe të minimizojnë vuajtjet e kafshëve. Duhet të ndiqet edhe dizajni i duhur eksperimental, përzgjedhja e antitrupave të përshtatshëm dhe procedurat e rrepta të validimit.

Klasifikimi i imunogjeneve - prodhimi i nano-trupave

Llojet e imunogjenëve	Shembull	Përgatitja e imunogjenit	Shënime
Imunogjenët e proteinave	Enzimat, proteinat, toksinat bakteriale dhe substancat e tjera	Zgjidhni sisteme të ndryshme të shprehjes së proteinave: E. coli, maja, qeliza insektesh, qeliza gjitarësh dhe sistem pa qeliza	Kushtojini vëmendje faktorëve të tillë si temperatura, koha, pH dhe trupat përfshirës që ndikojnë në shprehjen e proteinave.
Imunogjenët e acidit nukleik	ADN, ARN	Imunogjeni i ADN-së: Ndërtoni ADN plazmidike, klononi vektorë të përshtatshëm shprehjeje për gjenet e synuara, kultivoni qeliza për të amplifikuar ADN plazmidike dhe nxirrni ADN plazmidike me pastërti të lartë. Imunogjeni i ARN-së: Nevoja për të shtuar strukturën e kapelës dhe bishtin PolyA për të parandaluar degradimin	Gjatë përgatitjes së imunogjenëve të ADN-së, duhet t'i kushtohet vëmendje qelizave pritëse përkatëse, dhe gjatë përgatitjes së imunogjenëve të ARN-së, duhet t'i kushtohet vëmendje parandalimit të degradimit të ARN-së.
Imunogjenët viralë	Vaksina e inaktivizuar me virus të plotë, vaksina e nënnjësive, vaksina e vektorit viral (adenovirus, lentivirus, etj.), vaksina mRAN.	Kur përgatitet një vaksinë e çaktivizuar me virus të tërë, virusi së pari çaktivizohet për të rritur sigurinë. Testimi i toksicitetit përdoret për të përcaktuar nëse çaktivizimi është i plotë. Vaksinat e nënnjësive kërkojnë vetëm proteina sipërfaqësore të virusit si antigjene dhe duhet të marrin në konsideratë efikasitetin imunitar.	Për të siguruar efekte imune, duhet të shtohen adjuvantë, duhet t'i kushtohet vëmendje virusit që duhet të inaktivizohet, kërkohen titra të përshtatshëm të virusit për të siguruar efektet imune dhe siguria e procesit të përgatitjes duhet të kontrollohet rreptësisht.

Procesi ose Afati Kohor i Imunizimit të Kafshëve

Përzgjedhja e Kafshëve dhe Përgatitja e Antigjenit

Përzgjedhja e kafshëve: Zgjidhni alpaka të moshës së duhur dhe fizikut të shëndetshëm nga grupet e shëndetshme dhe kryeni analiza gjaku dhe teste për sëmundje për t'u siguruar që nuk ka sëmundje infektive ose probleme të tjera shëndetësore.

Përgatitja e imunogjenit: Imunogjenët janë çelësi për të nxitur përgjigje imune dhe kërkojnë përzgjedhjen e proteinave, peptideve ose substancave të tjera të përshtatshme bazuar në kërkesat e antitrupit të synuar.

Një alpakë mund të imunizohet me 1-3 antigjene njëkohësisht, me një sasi totale antigjeni prej 1-2 mg për imunizim dhe një vëllim më të vogël se 2 mL. Para imunizimit, antigjeni dhe ndihmësi emulsifikohen në një raport 1:1 për të formuar një përzierje uniforme, e cila ruhet në 4 ℃.

Alpaka imunologjike

Regjistroni numrin e veshit bosh të alpakës dhe filloni eksperimentin e imunizimit. Injektoni në nyjet limfatike pranë qafës së alpakës në të dyja anët, me 2 pika në secilën anë dhe afërsisht 0.4 mL antigjen të emulsifikuar të injektuar në secilën pikë. Pas imunizimit, vëzhgojeni për gjysmë ore për të konfirmuar që alpaka nuk ka simptoma shqetësimi. Imunizimi duhet të administrohet çdo 2 javë, me të paktën 4 imunizime.

Mbledhja e gjakut

Pas 4 imunizimeve për 5-7 ditë, mblidhni 50 ml gjak nga vena e qafës së alpakës.

Ndarja e serumit

Mostrat e gjakut mblidhen për vlerësim imunitar para çdo imunizimi me antigjen, duke marrë 5 ml gjak çdo herë; Po atë ditë, gjaku u centrifugua në 400 xg për 30 minuta duke përdorur një centrifugë të paraftohur në 25 ℃. Shtresa e sipërme e serumit u nda dhe u ruajt për testimin pasues të titrit të antitrupave.

Limfocitet e ndara

Së pari shtoni 15 ml tretësirë për ndarjen e qelizave, pastaj shtoni ngadalë 15 ml gjak në një tub centrifuge prej 50 ml. Kini kujdes dhe jini të ngadaltë kur shtoni gjak për të parandaluar përzierjen e gjakut dhe tretësirës së ndarjes. Centrifugojeni paraprakisht në 25 ℃, centrifugojeni në 400 xg për 30 minuta dhe ruajeni serumin e sipërm në një tub centrifuge të ri në -80 ℃; Përdorni një pipetë për të aspiruar qelizat imune të shtresës së sipërme të mesme në formë pambuku në një tub centrifuge të ri 50 ml. Shtoni 10 ml tampon PBS në temperaturë ambienti në secilin tub, centrifugojeni në 25 ℃ dhe 400 xg për 20 minuta. Hiqni supernatantin, shtoni 5 ml tampon PBS në temperaturë ambienti në secilin tub, përzieni mirë butësisht, llogaritni numrin e qelizave duke përdorur një hemocitometër dhe pastaj centrifugojeni në 25 ℃ dhe 400 xg për 20 minuta. Hiqni supernatantin dhe tretin limfocitet e përftuara nga RNAiso Plus bazuar në numrin e qelizave për të përftuar 10^7/mL lizat qelizor, i cili ruhet në -80 ℃.

Fig. 1: Paraqitje skematike e strategjive të ndryshme të zbulimit të antitrupave dhe fazave eksperimentale që përfshihen. (Burimi i figurës: Laustsen, Andreas H. etj.)

Klientët ofrojnë kontroll të rreptë të cilësisë së imunogjenëve

Llojet e imunogjenëve	Kërkesë	Metoda e Kontrollit të Cilësisë
Mostrat e Peptideve / Molekulave të Vogla	Kushtet e tretjes (kryesisht në varësi të faktit nëse ato do të inaktivizojnë fagët), struktura molekulare/sekuenca e peptideve, raporti i sintezës (HPLC/MS/HNMR)	Zbulimi i HPLC/MS
Mostrat e proteinave	SDS-PAGE/WB, kushtet e rikonstituimit, tamponi, informacioni i etiketës, sasia totale (20-50ug), përqendrimi, pastërtia, etj.	SDS-FAQE/WB
Mostrat e qelizave	Lloji i qelizës (qeliza primare/qeliza të modifikuara me gjen), forma e qelizës (e freskët/e ngrirë e shkrirë), lloji i rritjes (ngjitëse/e pezulluar), kërkesat e mjedisit të kulturës, numri i qelizave të ofruara, numri i qelizave të ofruara, qeliza të modifikuara me gjen për të siguruar shprehje të qëndrueshme të objektivave të shqyrtimit (antitrupi primar përkatës i klientit), qeliza të ngrira të shkrira për të përcaktuar shkallën e rikuperimit	Kryesisht duke synuar qelizat e modifikuara gjenetikisht, duke përdorur antitrupa primarë të furnizuar nga klienti për identifikimin ELISA të shprehjes së synuar (kompania jonë ofron antitrupa sekondarë HRP), zbulimin e citometrisë me rrjedhë (kompania jonë mund të ofrojë antitrupa sekondarë fluoreshente).

Cilat janë zbatimet e imunitetit të kafshëve?

+

Antitrupat poliklonalë mund të prodhohen me anë të imunizimit të kafshëve, antitrupat monoklonalë mund të prodhohen duke bashkuar qelizat B me qelizat e mielomës, dhe PBMC-të mund të nxirren nga burime deveje (alpaka, deve, alpaka, etj.) për të prodhuar forma të ndryshme fragmentesh antitrupash si nano-trupa, fragmente Fab, fragmente antitrupash scFv, etj.
Cilat janë masat paraprake për imunitetin e kafshëve?

+

Për të prodhuar nanotantitrupa për kafshët me origjinë nga deveja, kërkohen 5-6 imunizime. Mostrat e gjakut duhet të mblidhen si kontroll para imunizimit, me një interval prej 2 javësh midis çdo imunizimi. Pas imunizimit të katërt, duhet të mblidhet gjak pozitiv dhe gjak negativ i paimunizuar për ELISA për të përcaktuar titrin. Nëse titri është nën 10^6, numri i imunizimeve duhet të rritet derisa titri të arrijë një nivel të përshtatshëm. Për imunizimet e tjera të kafshëve, siç është imunizimi i lepurit (niveli optimal ose i antigjenit të proteinave të zakonshme për imunizimin e lepurit është 50-1000μg), imunizimi i miut (niveli optimal ose i antigjenit të proteinave të zakonshme për imunizimin e miut është 5-50μg, i cili kërkon 10^6 qeliza nëse është një qelizë, dhe 10-50μg për acid nukleik ose karbohidrate), imunizimi i dhisë (niveli optimal ose i antigjenit të proteinave të zakonshme për imunizimin e dhisë është 250-5000μg), etj., duhet t'i kushtohet vëmendje dozës, sigurisë dhe efikasitetit të imunogjenëve.
Si të zgjidhni kafshët imune?

+

Në varësi të llojit të antitrupave të kërkuar nga klienti, nëse keni nevojë të prodhoni nano-trupa ose fragmente të tjera antitrupash, mund të zgjidhni kafshë me origjinë nga deveja (deve, alpaka, alpaka) për imunizim. Nëse keni nevojë të prodhoni antitrupa monoklonalë ose poliklonalë, duhet të zgjidhni speciet përkatëse bazuar në sasinë e serumit, antigjenit dhe burimit të antigjenit. Sasia maksimale e serumit për lepujt është 500 ml, e cila kërkon një sasi të ulët antigjeni dhe është zgjedhja kryesore për prodhimin e antitrupave poliklonalë. Sasia maksimale e serumit për minjtë është 2 ml, dhe sasia maksimale e serumit për minjtë është 20 ml, e cila zakonisht është zgjedhja optimale për antitrupat monoklonalë. Antitrupat e prodhuar nga dhitë kanë afinitet të lartë, dhe Alpha Lifetech mund të personalizojë një plan ekskluziv imunizimi për ju sipas kërkesave tuaja.
A duhet të përdoren antigjenet së bashku me adjuvantët? Si të zgjidhen?

+

Ekzistojnë dy lloje adjuvantësh: me bazë vaji dhe me bazë uji. Përdorimi i arsyeshëm i adjuvantëve është thelbësor për të nxitur përgjigje të forta të antitrupave ndaj antigjeneve të tretshme. Çlirimi i zgjatur i adjuvantëve do të thotë që mund të përdoren më pak doza të antigjeneve dhe përgjigjet e antitrupave janë më afatgjata. Injeksioni i parë duhet të përdoret në kombinim me një adjuvant. Në përgjithësi rekomandohet të përdoret adjuvanti i Freundit kur sasia e imunogjenit është e vogël.
Masat paraprake për imunizimin e alpakave?

+

(1) Përzgjedhja e alpakës dhe antigjenit të imunitetit janë çelësi i imunizimit të suksesshëm. Zgjedhja e një deveje me përmasa të mira nuk këshillohet. Pastërtia dhe konformimi i saktë i antigjeneve imune janë thelbësore për shqyrtimin e antitrupave të përshtatshëm për aplikimet pasuese pas imunizimit me alpaka. Pastërtia e antigjeneve proteinike në përgjithësi nuk është më pak se 90%.

(2) Ndarja e limfociteve: Ndarja në kohë e qelizave mund të parandalojë në mënyrë efektive hemolizën pas mbledhjes së gjakut për të arritur efektin më të mirë të ndarjes.

(3) Cikli imunitar mund të ndikojë në përgjigjen imunitare: një interval imunitar prej 1-2 javësh u lejon alpakave të kenë një përgjigje të mirë imunitare ndaj shumicës së antigjeneve.

ndihmës i zhvilluar në mënyrë të pavarur

Formula jonë unike e ndihmësit është optimizuar për sistemin imunitar të alpakës, duke ofruar potencë dhe specifikë më të lartë sesa ndihmësit tradicionalë.

Ofrimi i imunizimit
standard

Ne premtojmë të përfundojmë imunizimin brenda kohës së caktuar, të ofrojmë serum me titër të lartë dhe të regjistrojmë çdo hap përmes raporteve të detajuara.

Kontrolli i cilësisë së projektit

Çdo projekt i nënshtrohet proceseve të rrepta të kontrollit të cilësisë për të siguruar ofrimin e antitrupave që përmbushin standardet e larta për klientët.

qartëAlpakaSfondi

Ne kemi një popullatë të shëndetshme alpakash që ofron mbështetje për programe të ndryshme imunizimi.

Nëse keni ndonjë pyetje, ju lutemi të na kontaktoni në çdo kohë.

Leave Your Message

Shërbim i Sugjeruar

0102