Shërbimi i Maturimit të Afinitetit të Antitrupave

Alpha Lifetech Inc.mund të ofrojë shërbimin e maturimit të afinitetit të antitrupave duke përdorur teknologjitë e mutacionit dhe përzgjedhjes. Ne zakonisht përdorim scFv si format të antitrupave në proceset e shërbimit të maturimit të afinitetit dhe një sistem fagemid të shfaqjes monovalente i cili është përdorur për të zvogëluar efektet e aviditetit gjatë shqyrtimit të lidhjes së antigjenit. Ekipi ynë profesional mund të ofrojë shërbime të maturimit të afinitetit edhe për antitrupat me një domen të vetëm.

Alpha Lifetech Inc.është krenare që ofron shërbime gjithëpërfshirëse për të përmbushur nevojat e larmishme të klientëve globalë. Qëllimi ynë është të kuptojmë dhe të përmbushim kërkesat e klientëve të ndryshëm dhe të ndihmojmë me çdo problem të ardhshëm dhe në zhvillim në punën kërkimore.

Çfarë është maturimi i afinitetit?

Pjekuria e afinitetit është procesi me anë të të cilit antitrupat i nënshtrohen mutacioneve dhe përzgjedhjes së përsëritur për të rritur afinitetin e tyre për antigjene specifike. Kryesisht ndodh në qendrën germinale të organeve limfoide sekondare, qelizat B i nënshtrohen hipermutacionit dhe përzgjedhjes somatike nën ndikimin e qelizave T dhe qelizave dendritike folikulare.
Gjatë procesit të maturimit të afinitetit, qelizat B me receptorë sipërfaqësorë të imunoglobulinës me afinitet të ulët aktivizohen nga takimet me antigjenin dhe i nënshtrohen përhapjes dhe diferencimit. Përmes maturimit të afinitetit të hipermutacionit somatik, zëvendësimet e rastësishme të nukleotideve ndodhin në rajonin variabël të gjeneve të imunoglobulinës, duke çuar në prodhimin e varianteve të ndryshme të antitrupave. Pas hipermutacionit somatik, përzgjedhja e drejtuar nga antigjeni kryhet në qelizat B me receptorë të imunoglobulinës të mutuar. Qelizat B që prodhojnë antitrupa me afinitet të rritur antigjenik mbahen në mënyrë preferenciale dhe lejohen të shumohen, ndërsa qelizat B me afinitet të zvogëluar ose të pandryshuar i nënshtrohen apoptozës. Ky proces përsëritës i mutacionit dhe përzgjedhjes çon në prodhimin e kloneve të qelizave B, duke prodhuar antitrupa me afinitet gradualisht më të lartë për antigjenin.

Shërbimi i Maturimit të Afinitetit të Antitrupave

Përparësitë kryesore të metodave të bazuara në PCR janë se mutacionet synojnë saktësisht fragmentin e amplifikuar; shkalla e gabimit është e lehtë për t'u kontrolluar dhe metoda është e shpejtë dhe e lehtë për t'u instaluar dhe nuk përdor kimikate të rrezikshme. Dihet mirë se polimeraza e ADN-së Taq e dyfishon ADN-në me besueshmëri të ulët, kryesisht për shkak të mungesës së aktivitetit të korrigjimit 3' deri në 5'.Alpha Lifetech'sPlatforma e inxhinierisë së antitrupave zbaton një qasje PCR të prirur ndaj gabimeve për të mutuar kryesisht rajonet CDR gjatë ndërtimit të nën-bibliotekës. Dhe shpesh ne krijojmë mutacione në pozicione krejtësisht të rastësishme në të gjithë fragmentet VH dhe VL, në mënyrë që të rrisim diversitetin gjenetik të nën-bibliotekës. Pas ndërtimit të një biblioteke gjenesh të antitrupave të mutuara nga PCR e prirur ndaj gabimeve, përzgjedhja e varianteve me afinitet të lartë (afiniteti i antitrupave scFv mund të arrijë 10^8 - 10^10 M) kryhet ose duke u zhvendosur në tretësirë ​​ose në antigjen të imobilizuar me kushte larjeje të optimizuara për përzgjedhje të varur nga shpejtësia e zhvendosjes.
  
Shkencëtarët nëAlpha Lifetech Inc.Përdorni llojet mutatore të Escherichia coli mutAD5TM si një nga disa strategji mutacioni për të futur mutacione të rastësishme, dhe në këtë mënyrë të modifikoni afinitetin dhe shprehjen e fragmenteve të antitrupave rekombinantë. Kushtet e përzgjedhjes mund të modifikohen për fragmentet e antitrupave me nivele të rritura prodhimi. Kushtet e rritjes në qelizat mutatore të Escherichia coli mund të rregullohen për të futur një mutacion të vetëm të rastësishëm pikësor për kilobazë të ADN-së, pothuajse ekuivalent me një ndryshim kodoni për fragment scFv. Pas disa cikleve të mutacionit, shfaqjes dhe përzgjedhjes, ne mund të përmirësojmë konstanten e afinitetit nga 10^5 - 10^6 M në 10^8 - 10^10 M.

Përmirësoni Strategjitë e Pjekurisë së Afinitetit

Disa pozicione të antitrupave mund të randomizohen në një diversitet të përcaktuar (si randomizimi i plotë me të 20 aminoacidet ose randomizimi i paragjykuar me aminoacide të zgjedhura në përqindje fikse) për të përmirësuar afinitetin. Ne kemi dy strategji për të përmirësuar afinitetin e antitrupave: së pari, mutacionet futen në pozicione të kufizuara në rajonet përcaktuese të komplementaritetit (CDR) me anë të mutaogjenezës së drejtuar nga vendi; së dyti, mutacionet futen në të gjitha rajonet koduese V me anë të mutaogjenezës së rastësishme. Duke përdorur këto dy metoda, sekuencat e konservuara të aminoacideve ose i gjithë rajoni kornizë i antitrupit do të zëvendësohen nga aminoacide të tjera, të cilat të kombinuara me teknologjitë tona të skanimit të bibliotekës së peptideve, mund ta rrisin jashtëzakonisht afinitetin e antitrupave me interes në një nivel shumë të lartë.

Afiniteti i shfaqjes së fagut me antitrupat

Pasi të jetë ndërtuar biblioteka e mutantëve scFv, janë të disponueshme dy strategji shqyrtimi: biopanifikimi dhe renditja e antigjenit të ngurtë. Në të parën, një përqendrim zbritës i substratit përdoret për të izoluar antitrupin me afinitet të lartë, pasi mutantët me afinitet të ulët do të laheshin, duke lënë grimcat e fagut me aviditet të lartë. Strategjia e dytë përdor një antigjen të etiketuar në tretësirë, përzgjedhjen bazuar në konstanten e ekuilibrit (Kd) dhe përzgjedhjen bazuar në kinetikën e lidhjes, kjo qasje përzgjedhjeje veçon variantet e antitrupave me Kd të përmirësuar.

Nëse keni ndonjë pyetje, ju lutemi të na kontaktoni në çdo kohë.