Teknologjia e shfaqjes së fagut është futja e gjenit të huaj cak në pozicionin specifik të proteinës kapsidë të fagut dhe shprehja e gjenit të huaj në sipërfaqen e fagut pa ndikuar në funksionin normal të fagut. Pas disa raundeve të shqyrtimit, më në fund u mor proteina cak me specifikë të fortë dhe aktivitet të lartë biologjik.

Biblioteka antitrupash me kapacitet të lartë mund të gjenerohen duke përdorur këtë teknologji. Cikli i shqyrtimit është i shkurtër, procesi operativ është i drejtpërdrejtë dhe gama e aplikimeve është e gjerë, duke lejuar identifikimin e sekuencave optimale për peptidet ose proteinat e synuara. Në aplikimet që lidhen me virusin, studiuesit mund të zbulojnë antitrupa që lidhen me epitope kritike virale duke shqyrtuar biblioteka të mëdha antitrupash. Ky proces mund të pengojë mekanizmat e hyrjes, replikimit ose shmangies imunitare të viruseve, duke krijuar kështu një bazë për trajtimin e sëmundjeve.

Teknologjia e shfaqjes së fagut përdoret më gjerësisht sesa teknologjia e hibridomës, e cila është e kufizuar në prodhimin e një sasie të vogël antitrupash kundër imunogjenëve specifikë. Në të kundërt, teknologjia e shfaqjes së fagut mund të paraqesë një bibliotekë të tërë antitrupash të derivuara nga lloje të ndryshme imune.

Teknologjia e shfaqjes së fagut ka një gamë të gjerë aplikimesh, duke përfshirë shqyrtimin e receptorëve të mikroorganizmave patogjenë, studimin e ndërveprimeve të proteinave, gjurmimin e transmetimit të sinjalit midis qelizave, diagnostikimin e sëmundjeve të kafshëve dhe zhvillimin e vaksinave, ndër të tjera.

Teknologjia e shfaqjes së fagut ofron përparësi të shumta dhe mund të aplikohet në fusha të ndryshme. Megjithatë, sfida kryesore në zhvillimin e antitrupave rekombinantë duke përdorur metodën e shfaqjes së fagut është kompleksiteti dhe kostoja që lidhet me procesin. Kjo qasje kërkon integrimin e teknikave të biologjisë molekulare, duke përfshirë mutacionin, klonimin dhe shprehjen, së bashku me analizat imunologjike, biokimike dhe biofizike për të identifikuar dhe karakterizuar antitrupat e dëshiruar.

Prezantimi i antigjenit është një lidhje shumë e rëndësishme. Metodat e prezantimit të antigjenit përfshijnë kryesisht prezantimin direkt të antigjenit të veshur, prezantimin indirekt të antigjenit të veshur, prezantimin e antigjenit përmes shqyrtimit të të gjithë qelizës, prezantimin e antigjenit përmes lipozomeve, disqeve nanofosfolipide dhe VLP-ve.

Metoda e veshjes direkte është relativisht e thjeshtë, por konformacioni i antigjenit është i lehtë për t'u ndryshuar, dhe operacioni i veshjes indirekte është i ndërlikuar, por mund të ruajë konformacionin e antigjenit dhe të përmirësojë efikasitetin e prezantimit. Shqyrtimi i qelizave mund të simulojë skenën reale in vivo, por ekziston një problem i lidhjes jospecifike. Disku nanofosfolipid ka madhësi të vogël, efikasitet të lartë të shpërndarjes dhe stabilitet të mirë; VLP-të janë të bashkuara me antigjenin ose të mbështjella me antigjen, i cili ka imunogjenitet të lartë dhe siguri të mirë, dhe mund të shkaktojë një përgjigje të fortë imune.

Nëse përqendrimi është shumë i ulët, gjasat e lidhjes me fagun do të ulen, duke rezultuar në uljen e efikasitetit të shqyrtimit. Anasjelltas, një përqendrim tepër i lartë mund të rrisë probabilitetin e lidhjes jospecifike, të rrisë sinjalin e sfondit dhe të pengojë identifikimin e kloneve pozitive.

Metoda e fiksimit të butë mund të përdoret për të shmangur temperaturën e lartë, acidin e fortë dhe alkalin. Metoda e veshjes indirekte dhe sistemi biotinë-streptavidinë u përdorën për të zvogëluar dëmtimin e strukturës së antigjenit. Nëse antigjeni është një proteinë membranore, ai mund të shfaqet në sipërfaqen e qelizave të paprekura ose të përdoret për të simuluar mjedisin e membranës, siç është nano-disku, për të ruajtur konformacionin e tij natyror të proteinës së membranës.

Përveç eksperimenteve rutinë si ELISA, Western Blotting (WB) dhe Imunofluoreshenca (IF), teknikat e zbulimit të Rezonancës së Plazmoneve Sipërfaqësore (SPR) dhe Interferometrisë Bio-Layer (BLI) mund të përdoren për të monitoruar proceset e lidhjes dhe disociimit të antitrupave dhe antigjeneve në kohë reale, duke lejuar përcaktimin e parametrave të afinitetit dhe kinetikës.

Shfaqja e fagut mund të përdoret për të gjeneruar antitrupa monoklonalë me afinitet të lartë për një gamë të gjerë speciesh që prodhojnë antitrupa, duke përfshirë, por pa u kufizuar në, njerëzit, minjtë, lepujt, pulat, devetë, alpakat, lopët, qentë, delet, majmunët dhe peshkaqenët.

Teknologjia e ndërtimit të bibliotekave të antitrupave të miut është e mirë-vendosur, me kosto efektive dhe ka një kohëzgjatje të shkurtër eksperimentale, duke e bërë atë të përshtatshme për shqyrtimin paraprak të antitrupave dhe kërkimin bazë. Antitrupat e lepurit shfaqin afinitet dhe specifikë të fortë, me një gamë më të gjerë njohjeje të epitopeve krahasuar me antitrupat e miut. Antitrupat njerëzorë mund të merren direkt nga bibliotekat e antitrupave njerëzorë, duke shmangur kështu reaksionet e mundshme imune që mund të ndodhin kur antitrupat heterologë administrohen në trupin e njeriut. Kjo qasje ka vlerë të konsiderueshme në kërkimin dhe zhvillimin e barnave, veçanërisht në krijimin e antitrupave terapeutikë.

Imunogjenët shtazorë ndahen përgjithësisht në antigjen proteinik, antigjen polipeptidik, antigjen acidi nukleik dhe antigjen të lidhur me patogjenin, ndër të cilët antigjeni i lidhur me patogjenin përfshin antigjenin viral (grimcë të plotë virale, proteinë virale, proteinë jostrukturore të virusit, etj.), antigjenin bakterial (ekstrakt i plotë bakterial, përbërës i murit qelizor, proteinë e sekretuar, toksinë, etj.) dhe antigjenin parazit.

Rregulloni imunogjenët duke zëvendësuar antigjenet imune me proteina rekombinante dhe duke zëvendësuar grimcat e virusit që luftojnë zjarrin me proteinat strukturore të viruseve. Rregulloni modelin eksperimental dhe modifikoni dozën imune.

Imunogjeniteti mund të rritet duke çiftëzuar antigjenet me proteina bartëse, siç është albumina e serumit të gjedhit. Përveç kësaj, ndihmësit imunitarë, duke përfshirë ndihmësin e Freundit dhe ndihmësin e aluminit, mund të përdoren për të zgjatur kohën e qëndrimit in vivo dhe për të stimuluar aktivizimin dhe përhapjen e qelizave imune, duke përmirësuar kështu imunogjenitetin.

Një bibliotekë e antitrupave të fagut është një koleksion i antitrupave të ndryshëm të fagut të krijuar duke mbledhur një grup të plotë të gjeneve të rajonit të ndryshueshëm nga antitrupat në vektorët e fagut dhe duke i shprehur ato në sipërfaqet e fagëve. Ky proces rezulton në formimin e një biblioteke të antitrupave të fagut.

Procesi i përgjithshëm i shfaqjes së fagut përfshin disa hapa kyç: nxjerrjen e qelizave mononukleare të gjakut periferik (PBMC) nga kafshët e imunizuara, izolimin e ARN-së totale dhe transkriptimin e saj në ADN plotësuese (ADNc), amplifikimin e gjenit të synuar duke përdorur teknologjinë e reaksionit zinxhir të polimerazës (PCR), klonimin e gjenit të synuar në një vektor të fagut dhe transformimin e vektorit në një qelizë pritëse për shprehje. Ky proces rezulton në ndërtimin e një biblioteke shfaqjeje të fagut, e cila mund të identifikojë me shpejtësi antitrupat me afinitet të lartë. Më pas, kjo bibliotekë mund të shërbejë si një burim i vlefshëm për zhvillimin e vaksinave, barnave terapeutike dhe reagentëve diagnostikues.

Sipas burimit të bibliotekës së antitrupave, bibliotekat e antitrupave të fagëve mund të kategorizohen në biblioteka të antitrupave të fagëve imunitarë dhe biblioteka të antitrupave të fagëve native. Dallimi kryesor midis këtyre dy llojeve qëndron në faktin nëse kafshët janë vaksinuar. Përveç kësaj, bibliotekat e antitrupave native mund të gjenerohen përmes gjysmë-sintezës ose sintezës.

Ekzistojnë dy indekse kryesore për vlerësimin e cilësisë së një biblioteke antitrupash: kapaciteti i ruajtjes dhe diversiteti. Një kapacitet i madh ruajtjeje, i kombinuar me diversitet të lartë, siguron shqyrtimin efektiv të antitrupave me afinitet dhe specifikë të lartë.

Në procesin e elutriimit biologjik, biblioteka e ekspozimit inkubohet me objektiva të fiksuar dhe më pas lahet gjerësisht për të hequr fagët jo-reaktivë. Konjugatet zakonisht eluohen duke përdorur një tretësirë ​​acidike ose me përmbajtje të lartë kripe dhe më pas amplifikohen në qeliza pritëse të përshtatshme për pasurim. Pas 3 deri në 5 raundeve të shqyrtimit, merren antitrupa me afinitet të lartë.

Metodat e shqyrtimit të fagëve përfshijnë kryesisht shqyrtimin në fazë të ngurtë, shqyrtimin në fazë të lëngshme dhe shqyrtimin me bazë qelizore. Përzgjedhja e një metode të përshtatshme shqyrtimi duhet të marrë në konsideratë karakteristikat e molekulave të synuara, objektivat e procesit të shqyrtimit dhe mjedisin laboratorik.

Shqyrtimi pozitiv është metoda më themelore për shqyrtimin e antitrupave të fagut që lidhen me proteinat e synuara. Shqyrtimi negativ shërben për të eliminuar antitrupat jospecifikë. Gjatë procesit të shqyrtimit të antitrupave të fagut, antitrupat jospecifikë mund të identifikohen për shkak të ndërhyrjes nga etiketa e antigjenit të synuar, materialet ose antigjenet e tjera me ngjashmëri strukturore me antigjenin e synuar. Në raste të tilla, shqyrtimi negativ mund të rrisë efikasitetin e procesit të shqyrtimit.

Metodat për verifikimin e antitrupave zakonisht përfshijnë ELISA, Western Blotting (WB), citometrinë me rrjedhje, imunoprecipitimin (IP), imunofluoreshencën (IF), imunohistokiminë dhe teknika të tjera të ndryshme eksperimentale. Alpha Lifetech zotëron përvojë të gjerë në zbulimin e antitrupave dhe ka një ekip profesional eksperimental, duke siguruar efektivitetin e antitrupave në eksperimentet pasuese.