Platforma e Zhvillimit të Humanizimit të Antitrupave

Antitrupat e humanizuar shkaktojnë përgjigje minimale ose aspak nga sistemi imunitar i njeriut. Sipas Kërkimit të Tregut Kognitiv, madhësia e tregut global të Humanizimit të Antitrupave është 92.5 milionë dollarë amerikanë në vitin 2024 dhe do të zgjerohet me një normë vjetore të rritjes së përbërë (CAGR) prej 13.00% nga viti 2024 deri në vitin 2031. Alpha Lifetech ka një platformë të pjekur të humanizimit të antitrupave, me një shkallë suksesi prej mbi 98% për antitrupat e humanizuar. Ne kemi strategji të shumëfishta humanizimi, duke përfshirë shartimin CDR, shartimin SDR, përzierjen e zinxhirëve, shfaqjen e fagut, etj., të cilat mund të zgjidhen sipas nevojave tuaja eksperimentale. Ne jo vetëm që mund të ofrojmë humanizimin e antitrupave nga specie të shumta, të tilla si minjtë, lepujt, alpakat, devetë, etj., por edhe humanizimin e antitrupave në forma të ndryshme, të tilla si scFv, Fab dhe nano-trupat. Ne kemi personel teknik profesional për të ofruar shërbime të prodhimit, pastrimit dhe validimit të antitrupave, duke përfshirë prodhimin e antitrupave monoklonalë të miut, prodhimin e antitrupave kimerikë, shprehjen dhe pastrimin e antitrupave të humanizuar, dhe karakterizimin dhe analizën e antitrupave të humanizuar. Me një shkallë të lartë suksesi, pastërti të lartë dhe imunogjenitet të ulët, ne garantojmë prodhimin e antitrupave të humanizuar.

Hyrje në Humanizimin e Antitrupave

Terapia me antitrupa monoklonale mund të përdoret për trajtimin e sëmundjeve autoimune, kancerit dhe sëmundjeve të tjera. Antitrupat monoklonale prodhohen duke imunizuar minjtë ose kafshët e tjera. Kur përdoren për të trajtuar sëmundjet në fazën e mëvonshme të prodhimit të antitrupave monoklonale, imunogjeniteti i antitrupave jo-njerëzorë nuk mund të injorohet. Parimi kryesor i humanizimit është integrimi i mbetjeve të strukturës jo-njerëzore, të tilla si rajonet hipervariabile që përcaktojnë komplementaritetin (CDR), në strukturën njerëzore, duke prodhuar sekuenca që ruajnë karakteristikat origjinale të antitrupave duke parandaluar imunogjenitetin. Imunizimi i miut dhe humanizimi pasues i sekuencës së miut mbeten dy nga rrugët kryesore për zbulimin e antitrupave terapeutikë, të cilët kryesisht kalojnë nëpër disa faza: prodhimi i antitrupave të miut, kimerizimi i antitrupave monoklonale, antitrupi monoklonal kimerik murin njerëzor dhe procesi i zhvillimit të antitrupave monoklonale plotësisht të humanizuara. Aktualisht, kërkimet përfshijnë kryesisht minjtë transgjenikë (transferimin e gjeneve të qelizave B njerëzore te minjtë), shqyrtimin me rendiment të lartë duke përdorur teknologjinë e shfaqjes së majasë ose fagut, shartimin CDR (futja e CDR-ve prindërore në sekuencat njerëzore), përcaktimin e mbetjeve specifike të transplantit (SDR), përzierjen e kornizës dhe metoda të tjera.

humanizimi i antitrupave - Alpha Lifetech

Fig. 1: Përmbledhje skematike e humanizimit të antitrupave nga antitrupat miunë (domenet jeshile) në antitrupa plotësisht njerëzorë.

Strategjia e humanizimit të antitrupave

Transplantimi i CDR-së

Shartimi CDR arrihet përmes një sistemi shprehjeje te gjitarët bazuar në teknologjinë e ADN-së rekombinante, dhe hapat kryesorë të tij janë:

(1) Zhvilloni antitrupa përkatës te minjtë (ose burime jo-njerëzore), izoloni antitrupa që kodojnë ADN-në dhe klononi ato në vektorë për sekuencim (ose kryeni direkt sekuencim të një qelize të vetme).

(2) Për të përcaktuar sekuencën e ADN-së që korrespondon me CDR-në e antitrupave dhe për të përcaktuar specifikën e lidhjes së shënjestrës;

(3) Zgjidhni rajonin e strukturës njerëzore (FR) për të transplantuar CDR-të jo-njerëzore dhe për të ndërtuar një gjen të ri antitrupi.

(4) Kryeni një analizë tre-dimensionale të konflikteve midis CDR-ve jo-njerëzore dhe FR-ve njerëzore për të gjeneruar mutacione rikuperimi për të stabilizuar lakun dhe për të parandaluar humbjen e afinitetit ose integritetit strukturor të antitrupit përfundimtar të humanizuar.

Fig. 2: Përmbledhje skematike e shartimit të rajonit përcaktues të komplementaritetit (CDR).

Përzierja e kornizës

Përzierja e strukturës mbështetet në teknologjinë e shfaqjes së fagut dhe teknologjinë e shqyrtimit të bibliotekës së fagut për të marrë antitrupa me afinitet të lartë. Oligonukleotidet që kodojnë strukturat e zinxhirit të rëndë të antitrupave njerëzorë përdoren si shabllone, rajonet CDR kodohen si prajmera dhe kryhet amplifikimi PCR për të denatyruar produktin PCR për të marrë ADN me një fije. ADN-ja me një fije e gjeneve VL dhe VH e pastruar me streptavidinë rindërtohet në vektorë duke përdorur ligazën e ADN-së T4 dhe enzimat e kufizimit, inkubohet me bakteriofagë dhe amplifikohet nga bakteriofagët, dhe ndërtohet një bibliotekë e shfaqjes së fagut. Kryhen tre raunde shqyrtimi me antigjenet përkatëse dhe klonet pozitive verifikohen përfundimisht duke përdorur ELISA dhe metoda të tjera.

Fig. 3: Ilustrim skematik i strategjive të humanizimit të shartimit të rajonit përcaktues të komplementaritetit (CDR) dhe përzierjes së kornizës (FR). (A) Procedura kryesore e shartimit të CDR. (B) Procesi kryesor i përzierjes së FR. (Burimi i referencës: Wang Yongmei, et al., Krahasimi i "përzierjes së kornizës" dhe "shartimit CDR" në humanizimin e një antitrupi murin PD-1.)

Shfaqja e fagut

Prodhimi i antitrupave të humanizuar bazohet në metodën e shfaqjes së antitrupave specifikë në sipërfaqen e bakteriofagëve, kryesisht të ndërtuara përmes bibliotekave të fagëve të antitrupave njerëzorë. Burimi i bibliotekës janë PBMC-të e izoluara nga gjaku periferik i njeriut për të ndërtuar biblioteka të fagëve, nga të cilat shqyrtohen sekuencat përkatëse. Kjo sekuencë ka sekuencën e plotë njerëzore, por antitrupat e prodhuar janë fragmente antitrupash, të tilla si scFv, Fab dhe nanobody.

Fluksi i Punës së Shërbimit të Humanizimit të Antitrupave

Hapat e Shërbimit	Standardi i Kontrollit të Cilësisë	Kronologjia
Izolimi i Antitrupave	Pastërtia >95%	1-2 javë
Analiza e Sekuencës	Identifikimi i saktë i sekuencave jo-njerëzore	1 javë
Shartimi i CDR-së dhe Shartimi i Kornizës	Integrim dhe shprehje e suksesshme	2-3 javë
Shprehje dhe Pastrim	Rendiment dhe pastërti e lartë	2-3 javë
Validimi Funksional	Vlerësimi i afinitetit dhe specifikës	1 javë