Shërbimi i Analizës së Karakterizimit të Aptamerit

Alpha Lifetech ka ofruar shërbime të lidhura me aptamerët për shumë vite dhe aktualisht mund të ofrojë skema gjithëpërfshirëse të zhvillimit të aptamerëve, të tilla si sinteza e aptamerëve, shqyrtimi SELEX, sekuencimi me rendiment të lartë dhe optimizimi dhe karakterizimi i aptamerëve. Bazuar në avantazhet e metodës SELEX për shqyrtimin e aptamerëve, Alpha Lifetech ka zgjeruar më shumë metoda për shqyrtimin e aptamerëve.

Hyrje në Analizën e Karakterizimit të Aptamerit

Verifikimi i afinitetit

Afiniteti i optimizuar i aptamerit u verifikua me anë të teknikave përkatëse të analizës së lidhjes së aptamerit. Shembujt përfshijnë Kalorimetrinë Izotermike të Titrimit (ITC), Citometrinë e Fluksit (FCM) dhe Rezonancën Sipërfaqësore të Plazmonit (SPR), Mikrofluidikën, etj. Afiniteti i aptamerit zakonisht shprehet me konstanten e disociimit (KD), një madhësi fizike e përdorur për të përcaktuar shkallën e disociimit molekular në një reaksion të kthyeshëm. Sa më e vogël të jetë vlera e KD, aq më i qëndrueshëm është kompleksi, domethënë, aq më i fortë është afiniteti; Anasjelltas, sa më e madhe të jetë vlera e KD, aq më i paqëndrueshëm është kompleksi dhe aq më i dobët është afiniteti. Ky hap është çelësi për identifikimin e performancës së aptamerit, duke siguruar maturimin e afinitetit të aptamerit dhe mund të lidhet me molekulën e synuar me afinitet dhe selektivitet të lartë në aplikimet praktike.

Fig. 1 Procesi i maturimit të afinitetit të aptamerit. Burimi i referencës:Kinghorn AB, Fraser LA, 2017.

Verifikimi i funksionit

Përveç verifikimit të afinitetit, duhet të verifikohet edhe funksioni i aptamerit. Kjo përfshin verifikimin e stabilitetit, specifikës dhe ndërveprimeve të aptamerit me molekula të tjera në një mjedis të caktuar. Rezultatet e verifikimit funksional do të ndikojnë drejtpërdrejt në vlerën e aptamerëve në kërkimin shkencor dhe aplikimet industriale.

Verifikim specifik

Eksperimenti konkurrues: Aftësia e aptamerit për t'u lidhur me një objektiv specifik vlerësohet në prani të objektivave të tjerë të ngjashëm. Nëse aptameri mund të lidhet posaçërisht me molekulën e synuar pa ndërhyrje nga molekulat e tjera, kjo tregon se ka specifikë të lartë.

Eksperimenti i reaksionit të kryqëzuar: Aptameri lidhet me një seri objektivash të lidhur ose të palidhur për të parë nëse lidhet vetëm me një objektiv specifik, në mënyrë që të verifikohet specifikiteti i tij.

Verifikimi i stabilitetit

Eksperimenti i degradimit të nukleazës: Aptamerët u ekspozuan ndaj përqendrimeve të ndryshme të nukleazave dhe u vu re degradimi i tyre. Duke krahasuar shkallën e degradimit në pika të ndryshme kohore, mund të vlerësohet aftësia e degradimit anti-nukleazë e aptamerit.

Eksperimenti i stabilitetit të temperaturës dhe kohës: Aptameri u vendos në kushte të ndryshme temperature dhe kohe për të vëzhguar stabilitetin e tij strukturor dhe funksional. Kjo ndihmon në përcaktimin e kushteve optimale të ruajtjes dhe përdorimit për aptamerët.

Identifikimi i aktivitetit biologjik

Metoda e përshtatshme zakonisht zgjidhet sipas qëllimit specifik të aplikimit të aptamerit të acidit nukleik.

(1) Testimi i nivelit molekular: Përdorimi i teknikave të biologjisë molekulare, siç janë elektroforeza në xhel, Western blot, etj., për të zbuluar komplekset e formuara pasi aptameri kombinohet me molekulën e synuar, ose për të zbuluar ndryshimet në nivelin e shprehjes së molekulës së synuar të shkaktuara nga aptameri.

(2) Testimi në nivel qelizor: Duke përdorur teknologjinë e kulturës qelizore, aptamerët inkubohen me qelizat e synuara për të vëzhguar ndryshimet biologjike si morfologjia qelizore, përhapja dhe apoptoza, dhe për të vlerësuar aktivitetin biologjik të aptamerëve.

(3) Testimi i modelit shtazor: Në modelet e përshtatshme shtazore, aptamerët e acidit nukleik jepen me injeksion ose administrim të barnave, dhe treguesit fiziologjikë dhe ndryshimet patologjike të kafshëve vëzhgohen për të vlerësuar aktivitetin biologjik dhe sigurinë e aptamerëve in vivo.