Në vitin 1960, u propozua koncepti i antitrupave bispecifikë. Antitrupat bispecifikë, të njohur edhe si antitrupa monoklonalë bispecifikë, janë antitrupa të sintetizuara artificialisht duke përdorur teknologjinë e inxhinierisë gjenetike. Si një antitrup artificial i inxhinieruar, antitrupat bispecifikë zakonisht i përkasin nënklasës IgG dhe përmbajnë një fragment lidhës të antigjenit që synon nënnjësinë CD3. Antitrupat bispecifikë kanë dy vende specifike të lidhjes së antigjenit që mund të lidhen dhe njohin njëkohësisht dy antigjene të ndryshme, ose dy epitope të ndryshme të një antigjeni. Krahasuar me antitrupat monoklonalë, antitrupat bispecifikë kanë një vend shtesë specifik të lidhjes së antigjenit, duke poseduar kështu specifikë dhe aftësi synimi më të fortë, të cilat mund të synojnë më saktë qelizat tumorale dhe të zvogëlojnë toksicitetin jashtë objektivit. Antitrupat bispecifikë mund të kryejnë njëkohësisht funksione të shumëfishta biologjike, të tilla si rekrutimi i qelizave imune, bllokimi i shtigjeve të sinjalizimit dhe vrasja direkte e qelizave tumorale. Antitrupat e hershëm bispecifikë u përgatitën kryesisht përmes konjugimit kimik ose bashkimit të qelizave, por kjo metodë mund të ketë përparuar ngadalë për shkak të kombinimit të rastësishëm dhe vështirësisë në izolimin e kombinimit të synuar. Me zhvillimin e vazhdueshëm të teknologjisë së inxhinierisë gjenetike, janë zhvilluar shumë platforma të reja teknologjike, të tilla si nyjet në vrima (KIH), CrossMab, DVD Ig, etj. Këto platforma zgjidhin në mënyrë efektive probleme të tilla si mospërputhjet e zinxhirëve të rëndë dhe të lehtë, dhe përmirësojnë uniformitetin dhe rendimentin e antitrupave bispecifikë.

Metodat kryesore për prodhimin e antitrupave bispecifikë përfshijnë çiftëzimin kimik, hibridomën me katër burime dhe përgatitjen e antitrupave me inxhinieri gjenetike. Midis tyre, metoda e çiftëzimit kimik çiftëzon dy IgG të paprekura ose dy fragmente të antitrupave F (ab') 2 në antitrupa bispecifikë duke përdorur agjentë kimikë çiftëzimi si ftalimidi dhe acidi ditioacilbenzoik. Kjo metodë është e thjeshtë dhe e lehtë për t’u përdorur, por mund të dëmtojë vendin e lidhjes së antigjenit, të zvogëlojë aktivitetin e antitrupave dhe vetë agjenti çiftëzimit gjithashtu ka një shkallë të caktuar kancerogjeniteti. Metoda e hibridomës me katër burime bazohet në bashkimin e qelizave somatike nga dy linja të ndryshme qelizore hibridome për të shprehur IgG përkatëse të miut. Përmes teknologjisë së inxhinierisë gjenetike, antitrupat mund të modifikohen gjenetikisht për të formuar antitrupa bispecifikë. U ndërtuan dy antitrupa të ndryshëm monoklonalë dhe fragmentet Fab ose rajonet variabile të zinxhirit të rëndë dhe zinxhirit të lehtë të dy antitrupave u ndanë veçmas. Përmes reaksionit të lidhjes kryq ose teknologjisë së rekombinimit të zinxhirit, dy fragmentet u kombinuan për të formuar një antitrup bispecifik. Megjithëse kompleksiteti i teknologjisë së inxhinierisë gjenetike është relativisht i lartë, aktualisht është metoda më e përdorur për prodhimin e antitrupave bispecifikë për të rregulluar strukturën dhe funksionin e antitrupave. Gjatë kryerjes së dizajnit të antitrupave bispecifikë, mund të përdoret parimi i reaktivitetit të kryqëzuar të antitrupave, por reaktiviteti i kryqëzuar i antitrupave mund të shkaktojë reaksione jospecifike, prandaj do të merret në konsideratë me kujdes në zbatimin praktik të dizajnit të antitrupave bispecifikë, siç është terapia me antitrupa bispecifikë.

Pastrimi i antitrupave bispecifikë është procesi i izolimit dhe pastrimit të antitrupave të synuar me pastërti të lartë. Dy metoda, centrifugimi dhe filtrimi i thellë, përdoren për të hequr disa papastërti të tretshme. Antitrupi bispecifik i synuar fillimisht kapet nga kromatografia e afinitetit. Për antitrupat bispecifikë të ngjashëm me IgG, përdoret kromatografia e afinitetit të proteinës A, ndërsa për antitrupat bispecifikë jo të ngjashëm me IgG, mund të përdoret kromatografia e afinitetit e bazuar në zinxhirin e lehtë. Më pas, antitrupi inkubohet në kushte me pH të ulët për një periudhë të caktuar kohore, duke shkaktuar prishjen e strukturës së proteinave në sipërfaqen e mbështjellësit të virusit, duke humbur kështu aftësinë për të infektuar qelizat. Filtrimi i ndërmjetëm i thellë kryhet për të hequr më tej papastërtitë siç janë proteinat e qelizës pritëse (HCP). Pastërtia e antitrupave përmirësohet përmes metodave të tilla si kromatografia e shkëmbimit jonik, dhe çdo virus i mbetur hiqet përmes teknikave të nanofiltrimit ose ultrafiltrimit. Së fundmi, mostra përqendrohet dhe zëvendësohet me një tampon formulimi të përshtatshëm.