Së pari, veshja e antigjenit ishte në fazë të ngurtë, dhe antigjeni që do të testohej u vesh në vrimën e pllakës ELISA, dhe antigjeni u inkubua për t'u adsorbuar në murin e vrimës. Një tretësirë ​​bllokuese përdoret për të mbyllur hapësirën në pore që nuk është e zënë nga antigjeni për të parandaluar lidhjen jospecifike. Shtoni mostrën që do të testohet, e cila mund të përmbajë antitrupa. Nëse mostra përmban antitrupin e synuar, ai do të lidhet me antigjenin. Pastroni substancat lidhëse jospecifike në pus dhe hiqni antitrupat e palidhur. Shtohen antitrupa sekondarë të shënuar me enzimë (zakonisht antitrupa sekondarë kundër specieve ose llojit të antitrupave në mostër), dhe antitrupat sekondarë lidhen me antitrupat në mostër për të formuar një kompleks imunitar. Pastroni përsëri për të hequr antitrupat sekondarë të palidhur të shënuar me enzimë. Kur shtohet tretësira e substratit, antitrupi sekondar i shënuar me enzimë katalizon reagimin e substratit për të prodhuar një ndryshim ngjyre ose sinjal tjetër. Rezultatet Intensiteti i sinjalit u lexua nga lexuesi i mikropllakës, dhe përqendrimi i antitrupit u llogarit sipas kurbës standarde.

Veshja e antitrupit u imobilizua fillimisht dhe një antitrup specifik kapës u vesh në vrimën e pllakës ELISA. Antitrupi zakonisht ruan specifikitetin me vendin e lidhjes së antigjenit. Pastaj inkubohet për një periudhë të caktuar kohore për të fiksuar antitrupin në murin e poreve. Një tretësirë ​​bllokuese (siç është albumina e serumit të gjedhit, BSA) përdoret për të mbyllur boshllëkun në pore që nuk është i zënë nga antitrupi për të shmangur lidhjen jo-specifike. Shtoni një mostër që përmban antigjenin e synuar në pllakën e pusit dhe antigjeni do të lidhet me antitrupin e kapjes në pllakën e pusit. Lani pllakën e pusit me tampon larës për të hequr substancat e palidhura. Një antitrup tjetër i shënuar me enzimë (zakonisht një antitrup i ndryshëm nga antigjeni i synuar) shtohet për të zbuluar antitrupin, i cili formon një lidhje të dyfishtë me antigjenin për të formuar një strukturë sanduiç. Lani përsëri për të hequr antitrupat e palidhur të shënuar me enzimë. Tretësira e substratit shtohet dhe antitrupi i shënuar me enzimë katalizon reagimin e substratit për të prodhuar një sinjal të matshëm (siç është ndryshimi i ngjyrës). Dendësia optike (vlera OD) u mat duke përdorur një lexues mikropllakash (siç është një lexues mikropllakash) dhe përqendrimi i antigjenit u përcaktua sipas kurbës standarde.

Së pari, veshja e antitrupit në fazë të ngurtë vishet me një antitrup specifik kapës në vrimën e pllakës ELISA, dhe antitrupi do të lidhet me antigjenin e molekulës së vogël të synuar. Tretësira bllokuese u përdor për të bllokuar hapësirën që nuk ishte zënë nga antitrupi për të shmangur lidhjen jo-specifike. Mostra që përmbante antigjenin e synuar dhe antitrupi i shënuar me enzimë u shtuan, dhe antigjeni në mostër konkurroi me antitrupin e shënuar me enzimë për të kapur antitrupin. Pastroni substancat lidhëse jo-specifike në pus, duke lënë kompleksin e kombinuar antigjen-antitrup. Substrati shtohet, dhe enzima katalizon reagimin e substratit për të prodhuar një sinjal të matshëm. Rezultatet treguan se intensiteti i sinjalit ishte negativisht i korreluar me përqendrimin e antigjenit në mostër. Sa më i dobët të jetë sinjali, aq më i lartë është përqendrimi i antigjenit në mostër. Përqendrimi i antigjenit në mostër u përcaktua duke matur dendësinë optike (vlera OD).