Protokolli i Teknologjisë së Hibridomës dhe Pyetjet e Shpeshta
Teknologjia e hibridomës është një metodë për përgatitjen e antitrupave monoklonalë. U propozua për herë të parë nga shkencëtarët Cesar Milstein dhe Georges Köhler në vitin 1975, dhe kështu fitoi Çmimin Nobel në Fiziologji ose Mjekësi në vitin 1984. Ideja thelbësore e teknologjisë së hibridomës është bashkimi i qelizave B që prodhojnë antitrupa me qeliza tumorale që nuk prodhojnë antitrupa (siç janë qelizat e mielomës) për të përftuar qeliza hibridome që mund të shumohen pafundësisht dhe të prodhojnë antitrupa në mënyrë specifike.
Parimi i Teknologjisë së Hibridomës
Teknologjia e hibridomës është një teknikë për marrjen e antitrupave monoklonalë me anë të bashkimit të qelizave. Parimi është bashkimi i qelizave B të kafshëve imune (zakonisht minj) me qelizat e mielomës (qeliza tumorale, me përhapje të pakufizuar) për të marrë qeliza hibridome që mund të përhapen pafundësisht dhe të prodhojnë antitrupa specifikë. Këto qeliza hibridome janë të afta të prodhojnë vazhdimisht një numër të madh antitrupash të vetëm, të quajtur antitrupa monoklonalë.
- 1Qelizat B: të nxjerra nga kafshë imune, përgjegjëse për prodhimin e antitrupave.
- 2 Qelizat e mielomës: Qeliza tumorale që kanë aftësinë të shumohen pafundësisht.
- 3 Qelizat hibridome: të përftuara nga bashkimi i qelizave B dhe qelizave të mielomës, kanë si kapacitet prodhimi të antitrupave ashtu edhe aftësi të pakufizuar përhapjeje.
Hapat e Teknologjisë së Hibridomës
Imunizimi
Së pari, antigjeni i synuar (si bakteret, viruset, antigjenet tumorale, etj.) injektohet në trupin e kafshëve eksperimentale (si minjtë), në mënyrë që sistemi imunitar i kafshës të prodhojë antitrupa specifikë kundër antigjenit. Qëllimi i imunizimit është të stimulojë përgjigjen imunitare, në mënyrë që qelizat B te kafshët të prodhojnë një numër të madh antitrupash.
Nxjerrja e qelizave të shpretkës
Limfocitet B (qeliza që prodhojnë antitrupa) u nxorën nga shpretka e kafshëve të imunizuara. Pas imunizimit, numri i qelizave B në shpretkë u rrit ndjeshëm. Përmes teknologjisë së ndarjes së qelizave, një numër i madh i qelizave B mund të izolohet nga shpretka.
Përgatitja e qelizave të mielomës
Zgjidhni një linjë qelizash të mielomës që nuk prodhon antitrupa. Këto qeliza mund të shumohen pafundësisht, por ato nuk mund të prodhojnë vetë antitrupa specifikë.
Bashkimi i qelizave
Qelizat B dhe qelizat e mielomës mund të bashkohen së bashku me anë të metodave kimike ose fizike (siç është polietilen glikoli (PEG) ose bashkimi në fushë elektrike). Qelizat e bashkuara quhen qeliza hibridome dhe kanë dy karakteristikat e mëposhtme:
- 1Aftësia e qelizave B për prodhimin e antitrupave specifikë: Qelizat hibridome mund të prodhojnë të njëjtin antitrup specifik si qelizat B origjinale.
- 2 Aftësia e pakufizuar e përhapjes së qelizave të mielomës: Qelizat e mielomës janë qeliza malinje që mund të shumohen pafundësisht, duke siguruar që qelizat hibridoma të mund të vazhdojnë të shumohen.
Shqyrtimi selektiv
Kur qelizat B dhe qelizat e mielomës bashkohen, qelizat hibridome të përftuara do të kenë disa veti të veçanta, por kjo nuk do të thotë që të gjitha qelizat e bashkuara janë qeliza hibridome. Shumica e qelizave B dhe qelizave të mielomës të bashkuara pa sukses do të vdesin. Për të kontrolluar qelizat e bashkuara me sukses, zakonisht përdoret metoda e shqyrtimit HAT (Hipoksantinë-Aminopterin-Timidinë). Kjo metodë shqyrtimi shfrytëzon defektet metabolike të qelizave të mielomës. Qelizat e mielomës të pabashkuara nuk mund të mbijetojnë në mjedisin HAT për shkak të mungesës së funksioneve specifike enzimatike, ndërsa qelizat B janë të kufizuara në këtë mjedis. Vetëm qelizat e hibridomës së bashkuara mund të mbijetojnë dhe të riprodhohen në mjedisin HAT. Përmes kësaj metode shqyrtimi, mund të zgjidhen qelizat hibridome që mund të shumohen vazhdimisht (karakteristikat e qelizave të mielomës) dhe të sekretojnë antitrupa specifikë (karakteristikat e qelizave B).
Klonimi dhe Amplifikimi
Qelizat hibridome të bashkuara me sukses të skrinuara janë zakonisht qeliza të vetme, të cilat mund të klonohen dhe kultivohen pas ndarjes. Një numër i madh qelizash hibridome me të njëjtin klon u morën duke izoluar qeliza të vetme dhe duke i kultivuar ato hap pas hapi. Këto qeliza hibridome të klonuara mund të sekretojnë vazhdimisht një numër të madh antitrupash specifikë.
Mbledhja dhe pastrimi i antitrupave
Qelizat e amplifikuara të hibridomës u kultivuan në një mjedis të përshtatshëm dhe antitrupi u sekretua në mjedisin e kulturës nëpërmjet sekretimit jashtëqelizor. Pas kësaj, antitrupi u pastrua me anë të kromatografisë së afinitetit dhe kromatografisë së shkëmbimit jonik. Antitrupi i pastruar mund të karakterizohet dhe të kontrollohet më tej cilësia për të siguruar pastërtinë dhe aktivitetin e tij.
Identifikimi dhe Zbatimi i Antitrupave
Antitrupat monoklonalë të përftuar u identifikuan me anë të metodave të ndryshme imunologjike, të tilla si analiza imunosorbentike e lidhur me enzimën (ELISA), imunofluoreshenca, Western blot, etj., për të siguruar specifikën dhe efikasitetin e tyre për antigjenin e synuar. Antitrupat monoklonalë të përftuar me sukses mund të përdoren në aplikime të ndryshme, të tilla si diagnostikimi, trajtimi, zhvillimi i vaksinave dhe kërkimi shkencor.

Figura 1. Një diagramë e gjenerimit të mAb me anë të qasjes së hibridomës. (Burimi i referencës: Teknologjia e Hibridomës për Gjenerimin e Antitrupave Monoklonale.)
Zbatimet e Teknologjisë së Hibridomës
Diagnoza e Sëmundjeve
Zhvillimi i mjeteve të zbulimit duke përdorur antitrupa monoklonalë, siç janë shiritat e testimit imunokromatografik, kitet ELISA, etj.
Antitrupa terapeutikë
Për shembull, ilaçet me antitrupa monoklonalë për trajtimin e kancerit, infeksioneve, sëmundjeve imune, etj.
Zhvillimi i vaksinës
Përdorimi i antitrupave kundër patogjenëve specifikë, zhvillimi i vaksinave.
Hulumtime Bazë
Antitrupat monoklonalë përdoren gjerësisht në imunologji, biologji molekulare, biologji qelizore dhe disiplina të tjera për të studiuar mekanizmin e bashkëveprimit midis antitrupave dhe antigjeneve.
Alpha Lifetech ofron proteina, peptide, molekula të vogla, viruse etj. si imunogjene, shërbime të përgatitjes së antitrupave monoklonalë për minjtë, si dhe përgatitjen e antigjenit në rrjedhën e sipërme dhe ndërtimin e bibliotekës së antitrupave në rrjedhën e poshtme dhe një sërë shërbimesh.
Pyetje të shpeshta
-
1. Efikasitet i ulët i bashkimit të qelizave, duke rezultuar në një numër të vogël qelizash hibridome.
-
2. Shkalla e ulët e mbijetesës së qelizave hibridome.
-
3. Rendiment i ulët i antitrupave monoklonalë.
-
4. Heterogjeniteti mund të ndodhë në klonimin e qelizave hibridoma (domethënë, klone të ndryshme të së njëjtës linjë qelizore hibridoma kanë prodhim dhe afinitet të ndryshëm të antitrupave), duke rezultuar në vështirësi në marrjen e antitrupave me cilësi uniforme.
-
5. Ndonjëherë, antitrupat monoklonalë të prodhuar nga teknologjia e hibridomës mund të kenë afinitet të ulët ose specifikë të ulët ndaj antigjeneve, duke rezultuar në pamundësinë e tyre për të njohur në mënyrë efektive antigjenet e synuara.
referencë
[1] Zhang C. Teknologjia e hibridomës për gjenerimin e antitrupave monoklonalë. Methods Mol Biol. 2012;901:117-135. doi:10.1007/978-1-61779-931-0_7
[2] Hnasko RM, Stanker LH. Teknologjia e Hibridomës. Metodat Mol Biol. 2015;1318:15-28. doi:10.1007/978-1-4939-2742-5_2
[3] Tomita M, Tsumoto K. Teknologjitë e hibridomës për prodhimin e antitrupave. Imunoterapia. 2011;3(3):371-380. doi:10.2217/imt.11.4
[4] Hiatt AC. Antitrupa monoklonalë, teknologjia e hibridomës dhe sistemet heterologe të prodhimit. Curr Opin Immunol. 1991;3(2):229-232. doi:10.1016/0952-7915(91)90056-7
[5] Yagami H, Kato H, Tsumoto K, Tomita M. Antitrupa monoklonalë të bazuar në teknologjinë e hibridomës. Pharm Pat Anal. 2013;2(2):249-263. doi:10.4155/ppa.13.2

