Shërbimi i Zhvillimit të Antitrupave Monoklonalë

Alpha Lifetech Inc.Mund të ofrojë parashikim të epitopeve, sintezë të peptideve, shprehje të proteinave, prodhim të antitrupave poliklonalë ose monoklonalë, si dhe pastrim të antitrupave nga kultura qelizore, lëngu i ascitit ose serumi i plotë.

Alpha Lifetech Inc.ka përvojë në ofrimin e shërbimeve të ndryshme për linjat qelizore të qëndrueshme për klientët, duke përfshirë qelizat hibridoma, linjat qelizore të redaktimit të gjenomit, linjat qelizore të rrëzimit dhe linjat qelizore të mbishprehjes. Ne përpiqemi t'u ofrojmë shërbime të avancuara të personalizuara të linjave qelizore për çdo klient dhe shërbimet tona janë të provuara dhe të besueshme.

Strategjia e Zhvillimit të Antitrupave

1. Dizajni dhe përgatitja e antigjenit
Këto antigjene mund të jenë proteina, peptide ose molekula të tjera. Projektimi i imunogjeneve kërkon një qasje gjithëpërfshirëse që integron njohuritë e strukturës së antigjenit, imunologjisë dhe sistemeve të shpërndarjes. Alpha Lifetech ka teknologji të projektimit të antigjenit që mund të projektojë imunogjene për klientët në nevojë.
Alpha Lifetech ofron produkte proteinike rekombinante për klientët që mund të zgjedhin. Ne kemi një sërë sistemesh shprehjeje proteinash, të tilla si sistemi i shprehjes së E. coli, sistemi i shprehjes së majasë, sistemi i shprehjes së bakulovirusit-insektit, sistemi i shprehjes së gjitarëve, etj., për të prodhuar proteinat rekombinante që ju nevojiten për kërkime.

2. Imunizimi i kafshëve
Alpha Lifetech mund t'u ofrojë klientëve imunogjenë, dhe kafshë imune si minjtë, lepujt, delet, alpakat, derrat e Guinesë, hamsterët etj., janë në dispozicionin tuaj për të zgjedhur.

3. Metodat e prodhimit të antitrupave monoklonalë

●Prodhimi i Mabs me anë të teknologjisë Hybridoma
Hibridoma është një qelizë hibride e prodhuar nga bashkimi i dy llojeve të qelizave, përkatësisht linjës qelizore të mielomës së miut dhe qelizave plazmatike (limfociti B), në të cilat qeliza heterozigote mund të prodhojë antitrupa të vazhdueshëm kundër antigjenit me interes in vitro. Prodhimi i një linje qelizore hibridome përbëhet nga tre pjesë: dizajni i antigjenit (haptenet, molekulat e vogla dhe peptidet), imunizimi i kafshëve, bashkimi i qelizave dhe shqyrtimi pozitiv i kloneve. Duke përdorur metodologji unike të imunizimit, ne arrijmë efikasitet jashtëzakonisht të lartë të bashkimit të qelizave (1-10 hibridome për një mijë qeliza B) dhe titre të larta të antitrupave, duke maksimizuar shkallën tonë të suksesit në testet pasuese analitike që përfshijnë shqyrtimin biokimik, analizat in vitro të bazuara në qeliza dhe studimet në kafshë.

●Prodhimi i Mabs me anë të teknologjisë së shfaqjes së fagut
Shfaqja e fagut ofron një metodë tjetër për gjenerimin e antitrupave monoklonalë. Limfocitet B izolohen nga gjaku i kafshëve dhe ARNi e tyre nxirret. Përmes PCR, kjo ARNi shndërrohet në ADNc, e cila amplifikon të gjitha segmentet VH dhe VL. Këto segmente më pas klonohen në një vektor, zakonisht si fragmente variabile me një zinxhir të vetëm (scFv), së bashku me proteinën PIII të një bakteriofagu. Më pas, ky konstrukt përdoret për të infektuar E. coli, duke rezultuar në krijimin e një biblioteke që përmban afërsisht 10^10 qeliza përmes inokulimit me një fag ndihmës. E. coli është më pas në gjendje të sekretojë bakteriofagun që strehon segmentet VH dhe VL si pjesë të mbulesës së tij. Pas kësaj, segmente specifike VH dhe VL që synojnë antigjenin me interes mund të zgjidhen dhe përdoren për të rinokoluar E. coli me bakteriofagun. Qelizat që përmbajnë plazmidin më pas izolohen dhe sekuencohen.

4. Shqyrtimi i bashkimit

●Bashkimi dhe Përzgjedhja e Qelizave
Limfocitet B të mbledhura më pas bashkohen me qelizat e mielomës, të cilat janë qeliza kancerogjene që mund të shumohen pafundësisht në kulturë. Bashkimi zakonisht arrihet duke përdorur një teknikë të tillë si bashkimi i polietilenglikolit (PEG).
Pas bashkimit, qelizat hibridome kultivohen në një mjedis selektiv që lejon vetëm hibridomat të mbijetojnë. Mjedisi zakonisht përmban aminopterinë, e cila parandalon rritjen e qelizave të mielomës së pabashkuar.

●Shqyrtimi dhe bllokimi
Qelizat hibridome që rezultojnë kontrollohen për prodhimin e antitrupave specifikë ndaj antigjenit të synuar. Kjo zakonisht bëhet duke përdorur teknika të tilla si analiza imunosorbente e lidhur me enzimën (ELISA), Western blot, imunoprecipitimi dhe citometria me rrjedhje.

Pasi identifikohen qelizat hibridome që prodhojnë antitrupin, ato klonohen për të gjeneruar një popullatë qelizash identike. Kjo siguron që antitrupi i prodhuar nga secila qelizë hibridome të jetë identik.

5. Verifikimi Funksional i Antitrupave
Alpha Lifetech ofron validim funksional të antitrupave, siç është Western blotting, imunohistokimia ose analizat funksionale, për të karakterizuar antitrupat monoklonalë dhe për të konfirmuar specifikën, afinitetin dhe funksionalitetin e antitrupave.

6. Optimizimi i antitrupave
Pastrimi i antitrupave nga supernatanti i kulturës duke përdorur teknika të tilla si kromatografia e afinitetit të proteinës A ose proteinës G, dhe Alpha Lifetech gjithashtu mund të ofrojë metoda të modifikimit të antitrupave për të përmirësuar afinitetin e antitrupave.

7. Prodhimi i antitrupave
Alpha Lifetech mund të vlerësojë antitrupat kandidatë për aplikime shqyrtimi me rendiment të lartë dhe prodhim në shkallë të gjerë.

pyetje të shpeshtapyetje të shpeshta

Pyetje të shpeshta rreth zhvillimit të antitrupave monoklonalë

1

Si të zgjidhni hibridomën e duhur të shkrirjes?

Gjatë procesit të bashkimit, 10-15 pllaka mikrotitrimi me 96 puseta mbillen me përzierjen hibride të bashkimit. Çdo pllakë ushqehet me media përzgjedhjeje HAT-IMDM dhe mbahet në një inkubator dioksidi karboni në 37 gradë Celsius. 9-14 ditë pas bashkimit, supernatantet hibride testohen për praninë e antitrupit specifik me interes.
2

Si të përmirësohet efikasiteti i përzgjedhjes?

Bashkimi i qelizave plazmatike me homologët e tyre të mielomës nuk është 100% efektiv. Edhe në kushte optimale dhe stimulimin më efektiv, bashkimi i qelizave prodhon ende një përzierje qelizash të paqarta dhe të bashkuara që duhet të ndahen. Për të përmirësuar efikasitetin e procesit të përzgjedhjes, qelizat e mielomës të përdorura për bashkim nuk kanë HGPRT, një enzimë kyçe në rrugën e shpëtimit të nukleotideve. Përzierja u kultivua më pas në një mjedis HAT, ku vetëm qelizat me enzimën HGPRT, hibridomat që trashëguan HGPRT nga qelizat plazmatike, ishin të qëndrueshme.
3

Si të shqyrtohen linjat qelizore hibridome për aktivitetin e antitrupave?

Vlerësimi i varieteteve hibride është një hap thelbësor. Zakonisht, shqyrtimi i supernatantit të hibridomës, klonit dhe nënklonit kryhet nëpërmjet analizës imunosorbent të lidhur me enzimën (ELISA), analizës Western blot dhe klasifikimit të qelizave të aktivizuara me fluoreshencë (FACS). Ne do të zgjedhim të kryejmë të gjithë shqyrtimin e supernatantit në laboratorin tonë.
4

Jepni udhëzime të hollësishme se si të kryhet testimi i aktivitetit të antitrupave?

Supernatet e hibridomave që do të testohen mund të variojnë nga 500 deri në 1,440 mostra dhe do të jenë gati për t'u testuar brenda ditëve 9-14. Ne mund të krijojmë gjatë një periudhe tre deri në pesë ditore ose të gjitha mund të jenë gati në të njëjtën ditë, kështu që është e rëndësishme që laboratori i klientit të jetë i përgatitur javë më parë me analizat specifike të shqyrtimit sekondar të zgjedhura.
5

Pse hibridomat pozitive duhet të subklonohen?

Pasi u identifikuan Puse pozitive gjatë procedurës fillestare të shqyrtimit ELISA, hibridomat u transferuan në një vëllim më të madh, d.m.th., pllaka me 24 puseta, në përgatitje për procedurën e nënklonimit. Nënklonimi i hibridomave zakonisht kryhet me një metodë hollimi të kufizuar për të siguruar izolimin e monokloneve të qëndrueshme. Teknika përfshin hollimin e kulturave të hibridomave dhe shpërndarjen e tyre në pllaka me 96 puseta për të arritur monoklonalitetin (një qelizë për pus). Duhet të kryhen të paktën dy hollime të kufizuara për të zvogëluar rrezikun e zhvillimit të popullatave të përziera të hibridomave.
6

Cilat janë përfitimet e përdorimit të teknologjisë së hibridomës për zbulimin e antitrupave?

Linjat qelizore hibride janë lavdëruar për aftësinë e tyre për të prodhuar antitrupa me afinitet, stabilitet dhe specifikë të lartë në mënyrën më efektive nga ana e kostos.