Shërbimi i Ndërtimit të Bibliotekës së Shfaqjes së Fagëve

Alpha Lifetech ka një platformë gjithëpërfshirëse të shfaqjes së fagut M13/T7 për të siguruar ndërtimin dhe prodhimin e bibliotekave të antitrupave. Ne gjithashtu mund të ofrojmë shërbime të personalizuara, të tilla si prodhimi i antitrupave scFv, për të përmbushur nevojat tuaja.

NA KONTAKTONI

Shërbimi i Ndërtimit të Bibliotekës së Shfaqjes së Fagëve

Alpha Lifetech është angazhuar thellësisht në teknologjinë e shfaqjes së fagëve (Phage display) për shumë vite. Ajo ka ndërtuar një platformë të përsosur dhe të qëndrueshme të teknologjisë së shfaqjes së fagëve që kursen kohë për kohën e kërkimit shkencor ose kërkimin e projektit dhe lehtëson prodhimin pasues. Alpha Lifetech gjithashtu mund t'u ofrojë klientëve shërbime të tilla si prodhimi i antitrupave vhh, prodhimi i antitrupave scFv, prodhimi i antitrupave Fab.

Hyrje në shfaqjen e fagut

Teknologjia e shfaqjes së fagut është një teknikë që përdor fagët (një virus që infekton bakteret) për të kërkuar molekula funksionale lidhëse të proteinave ose peptideve specifike. Teknikat e ndërtimit të bibliotekës së antitrupave të fagut përfshijnë ndërtimin e bibliotekës së antitrupave Fab, ndërtimin e bibliotekës së antitrupave scFv, ndërtimin e bibliotekës së nano-trupave, etj. Sipas llojeve të bakteriofagëve, ato mund të ndahen në M13, T7, T4, λ dhe sisteme të tjera. Sipas llojit të bibliotekës, ajo mund të ndahet në bibliotekë të peptideve të rastësishme, bibliotekë të ADNc, bibliotekë të antitrupave dhe bibliotekë të proteinave. Teknologjia e shfaqjes së fagut është e thjeshtë për t'u përdorur dhe e lirë për t'u përdorur. Megjithatë, kjo teknikë kufizon diversitetin e gjenetikës molekulare në bibliotekë që nuk mund të shprehë sekuenca shumë të gjata,

Aktualisht, teknologjia e shfaqjes së fagut përdoret gjerësisht. Midis tyre, ka arritje të rëndësishme në kërkimin dhe zhvillimin e vaksinave të reja (vaksina sintetike me kosto të ulët dhe efikase), zhvillimin e barnave me antitrupa (duke shqyrtuar frenuesit e enzimave), transduksionin e sinjalit qelizor (shqyrtimi i epitopeve të simuluara) dhe kërkimin e epitopeve të antigjenit (përgatitja e antitrupave monoklonalë).

Hyrje në Bakteriofagun T7

Bakteriofagu T7 është ADN me dy fije, gjatësia e ADN-së është 40kb dhe është e mbështjellë në një kapsid me diametër prej 60nm. Lidhësi midis kokës dhe bishtit është një strukturë unazore e përbërë nga kopje të shumëfishta të gp8. Koka dhe bërthama e bakteriofagut t7 formojnë një strukturë cilindrike që lidhet me gp8 dhe mund të lidhë kokën dhe bishtin.

Fig. 1 Paraqitje skematike e bakteriofagut T7.(Referencë: Përparimet në sistemin e shfaqjes së fagut T7 (Rishikim))

Hyrje në Bakteriofagun M13

Bakteriofagu M13 i përket një grupi fagësh filamentozë të quajtur kolektivisht fagë Ff. Ai ka një gjatësi prej 900 nm dhe një gjerësi prej 6.5 nm. Ai përmban një gjenom të ADN-së me një fije (ssDNA) me një gjatësi prej 6407 bp që përbëhet nga nëntë gjene që kodojnë 11 proteina të ndryshme. Midis tyre, pesë proteinat janë proteina të mbulesës, dhe gjashtë proteinat janë të përfshira në replikimin dhe montimin e fagut. Përqendrimi më i lartë i proteinave të mbulesës është proteina kapsidike G8P, e cila përbëhet nga rreth 2,700 njësi proteinike dhe formon një mbështjellës rreth kromozomit.

Fig. 2 Paraqitje skematike e bakteriofagut M13.(Referencë: Bazat e Teknologjisë së Shfaqjes së Fagut të Antitrupave)

Hyrje në Bibliotekën e Antitrupave të Shfaqjes së Fagut

Zbulimi i antitrupave është bërë gjithnjë e më i rëndësishëm në mjekësinë moderne. Ekzistojnë qasje të ndryshme për zbulimin e antitrupave, por biblioteka e antitrupave të shfaqjes së fagut përdoret më shumë në shkencën mjekësore.

Që nga viti 1990, janë përdorur formate të ndryshme të antitrupave për të ndërtuar biblioteka të fagëve, duke përfshirë VH, VHH, scFv, diatrupa dhe antitrupa Fab. scFv i përbërë nga domenet strukturore VH dhe VL janë antitrupa me një zinxhir të vetëm që përdoren për të ndërtuar biblioteka të antitrupave scFv. scFv karakterizohet nga një gjysmë-jetë e shkurtër dhe imunogjenitet i ulët. Biblioteka e Antitrupave Fab përbëhet nga VH, VL, CL dhe CH1, të cilat mund të dallojnë me shpejtësi antitrupat idealë me afinitet të lartë. Njësia më e vogël që mund të lidhet me antigjenin e synuar-VHH përbën bibliotekën e nano-trupave aktualisht, VHH ka avantazhet e strukturës së thjeshtë, vëllimit të vogël, tretshmërisë së lartë, stabilitetit të mirë dhe përgatitjes dhe shprehjes së lehtë. Bibliotekat e nano-trupave sintetikë (Nb) po shfaqen si një alternativë tërheqëse ndaj imunizimit të kafshëve për nano-trupat sintetikë të qëndrueshëm me afinitet të lartë. Në përgjithësi, këto fragmente të antitrupave bashkohen me G3P të fagut M13, dhe duke klonuar një numër të madh gjenesh që kodojnë një fragment antitrupi, mund të gjenerohen biblioteka të mëdha të antitrupave të shfaqjes së fagut nga të cilat mund të zgjidhen shumë antitrupa të ndryshëm.

Procesi i Ndërtimit të Bibliotekës së Fagëve

Procesi i ndërtimit të bibliotekës së fagut është si më poshtë: primerët specifikë janë të dizajnuar për amplifikimin PCR që merr produktet, të cilat lidhen me enzimë me vektorin e fagut T7/M13, dhe plazmidi i fagut rekombinant ndërtohet me sukses. Plazmidi i fagut rekombinant u transformua në qeliza të receptorit TG1, pastaj u vesh në një medium që përmbante antibiotikë të përshtatshëm, dhe kultura e zgjeruar u krye pas shqyrtimit të transformatorëve. Pas raundeve të shumta të kulturës, fagu replikon kohët e replikimit në baktere dhe shpreh me sukses proteinën ose polipeptidin e synuar. Pastaj biblioteka e fagut pastrohet për të hequr disa papastërti dhe fagë të palidhur.

Rajonet e ndryshueshme (VH dhe VL) korreluan me diversitetin e antitrupave, dhe VH dhe VL u futën në vektorin e fagut së bashku me një sekuencë që kodon proteinën e fagut PIII. Pas montimit, grimca e fagut ekspozohet dhe bashkohet me N-terminalin e proteinës minore të mbulesës III për të formuar një fragment funksional të antitrupave, duke përftuar një bibliotekë që përmban sekuencën e ADN-së së antitrupave.

Pas përfundimit të imunizimit, u zbulua titri dhe u mor gjaku i kafshëve pasi u kualifikua titri. Limfocitet izolohen nga gjaku, ARN-ja nxirret, RT-PCR amplifikon fragmentin e synuar dhe merret fragmenti i gjenit të rajonit V. Gjeni V amplifikohet duke përdorur një prajmer specifik.

Bibliotekat natyrore të krijuara përfshijnë antitrupa imunogjenikë të dobët te kafshët që mund të synojnë çdo objektiv. Antitrupat e fagut që lidhen posaçërisht me antigjenin mund të mblidhen duke përdorur teknika shqyrtimi që fiksojnë ose etiketojnë antigjenin.

Antigjeni i synuar fiksohet në një bartës të ngurtë, siç është një vrimë mikropllake, ose çiftëzohet me një sferë magnetike. Biblioteka e antitrupave të fagut shtohet më pas për ta lidhur atë me antigjenin. Pas elucioneve të shumëfishta, fagët me afinitet të ulët ose jo-specifikë lahen dhe ato që shfaqin antitrupa specifikë mbahen.

Zbatimi i Fagut të Shfaqjes

Zbulimi i antitrupave është bërë gjithnjë e më i rëndësishëm në mjekësinë moderne. Ekzistojnë qasje të ndryshme për zbulimin e antitrupave, por teknologjia e shfaqjes së fagëve përdoret më shumë në shkencën mjekësore. Që nga viti 1990, formate të ndryshme të antitrupave janë përdorur për të ndërtuar biblioteka të fagëve, duke përfshirë VH, VHH, scFvs, diatrupa dhe antitrupa Fab.
*Bibliotekat e peptideve të fagut lejojnë përcaktimin e shpejtë të sekuencës së epitopeve të proteinave dhe janë bërë një mjet i fuqishëm për të hetuar ndërveprimin midis epitopeve dhe receptorëve të antigjenit.
*Fragmentet e antitrupave bashkohen me G3P të fagut M13, dhe duke klonuar një numër të madh gjenesh që kodojnë një fragment antitrupi, mund të gjenerohen biblioteka të mëdha antitrupash të shfaqjes së fagut nga të cilat mund të zgjidhen shumë antitrupa të ndryshëm.
Sistemi i shfaqjes së fagut T7 ka shumë përparësi, duke përfshirë thjeshtësinë, sigurinë e lartë, stabilitetin, ruajtjen dhe transportin e lehtë, kështu që sistemi përdoret në vaksinat parandaluese dhe terapeutike.
Sistemi i shfaqjes së fagut T7 mund të zbulojë antigjene të ndryshme, siç janë antigjenet sipërfaqësore të mikroorganizmave patogjenë dhe antigjenet kancerogjene.

Fag

PSE TË NA ZGJIDHNI

Alpha Lifetech gjithashtu mund t'u ofrojë klientëve shërbime të tilla si prodhimi i antitrupave vhh, prodhimi i antitrupave scFv, prodhimi i antitrupave Fab.