Leave Your Message
rrëshqitje 1

Shërbimi i Shqyrtimit të Bibliotekës së Shfaqjes së Fagëve

Teknologjia e shqyrtimit të shfaqjes së fagut është aplikuar në fusha të tilla si transduksioni i sinjalit qelizor, vendet e njohjes së proteinave dhe zhvillimi i barnave, përveç studimit të epitopeve të antigjeneve.
NA KONTAKTONI
01

Shërbimi i Shqyrtimit të Bibliotekës së Shfaqjes së Fagëve

Alpha Lifetech është angazhuar thellësisht në teknologjinë e shfaqjes së fagëve (Phage display) për shumë vite. Ajo ka ndërtuar një platformë të përsosur dhe të qëndrueshme të teknologjisë së shfaqjes së fagëve që kursen kohë për kohën e kërkimit shkencor ose kërkimin e projektit dhe lehtëson prodhimin pasues. Alpha Lifetech gjithashtu mund t'u ofrojë klientëve shërbime të tilla si prodhimi i antitrupave vhh, prodhimi i antitrupave scFv, prodhimi i antitrupave Fab.
Alpha Lifetech ka një platformë gjithëpërfshirëse të shfaqjes së fagut M13/T7 për të siguruar ndërtimin dhe prodhimin e bibliotekave të antitrupave. Ne gjithashtu mund të ofrojmë shërbime të personalizuara, të tilla si prodhimi i antitrupave scFv dhe shqyrtimi i antitrupave me rendiment të lartë, për të përmbushur nevojat tuaja.

Procesi i Ndërtimit të Bibliotekës së Shfaqjes së Fagëve

Procesi i ndërtimit të bibliotekës së fagut është si më poshtë: primerët specifikë janë të dizajnuar për amplifikimin PCR që merr produktet, të cilat lidhen me enzimë me vektorin e fagut T7/M13, dhe plazmidi i fagut rekombinant ndërtohet me sukses. Plazmidi i fagut rekombinant u transformua në qeliza të receptorit TG1, pastaj u vesh në një medium që përmbante antibiotikë të përshtatshëm, dhe kultura e zgjeruar u krye pas shqyrtimit të transformatorëve. Pas raundeve të shumta të kulturës, fagu replikon kohët e replikimit në baktere dhe shpreh me sukses proteinën ose polipeptidin e synuar. Pastaj biblioteka e fagut pastrohet për të hequr disa papastërti dhe fagë të palidhur.

Metodat e Shqyrtimit të Bibliotekës së Shfaqjes së Fagëve

Suksesi i prodhimit të antitrupave të shfaqjes së fagut varet kryesisht nga bibliotekat e shfaqjes së fagut me antitrupa, dhe metodat e zakonshme të panimit të fagut janë shqyrtimi në fazë të ngurtë dhe në fazë të lëngshme. Shqyrtimi i antigjenit në fazë të ngurtë pasuron antitrupa specifikë përmes 3-4 raundeve të elucionit për të marrë biblioteka të shfaqjes së fagut me antitrupa; Shqyrtimi i antigjenit në fazë të lëngshme kryhet duke inkubuar bibliotekat e shfaqjes së fagut të synuar dhe antitrupave të shënuara me biotinë dhe duke kapur fagët e lidhur duke përdorur sfera magnetike. Shqyrtimi në fazë të ngurtë konsumon më shumë antigjen dhe disa epitope të antigjenit shkatërrohen. Shqyrtimi në fazë të lëngshme karakterizohet nga efikasitet dhe pasurim i lartë, por antitrupat e marrë janë më pak specifikë. Metoda e panimit të fagut varet nga nevojat eksperimentale, të cilat të gjitha do të kenë një ndikim të caktuar në efektin e prodhimit të antitrupave të shfaqjes së fagut.

Shqyrtimi i Antitrupave me Rendiment të Lartë

Zhvillimi i antitrupave është bërë me shpejtësi në mjekësinë moderne. Ekzistojnë metoda të ndryshme të zhvillimit të antitrupave, por shqyrtimi i antitrupave me rendiment të lartë përdoret më shumë në shkencën mjekësore. Procesi mund të arrijë një sasi të madhe diversiteti të repertorit të antitrupave. Kombinimi me metodat tradicionale të shqyrtimit të bibliotekave të antitrupave mund të përmirësojë cilësinë e shqyrtimit të bibliotekave të shfaqjes së fagëve. Pas shqyrtimit biologjik, antitrupat mund të karakterizohen nga shqyrtimi ELISA me rendiment të ulët ose shqyrtimi i antitrupave me rendiment të lartë.
Fotografia 2
Fig. 1 Grafiku rrjedhës që përshkruan sekuencën e ngjarjeve nga ndërtimi i bibliotekave të antitrupave të fagut deri në gjenerimin e antitrupave monoklonalë me afinitet të lartë për antigjenet dhe imunogjenitet të ulët.(Burimi i referencës: Teknologjia e Shfaqjes së Fagut si një Platformë e Fuqishme për Zbulimin e Barnave me Antitrupa - PMC (nih.gov))

Masat paraprake për shqyrtimin e shfaqjes së antitrupave në fagMasa paraprake

Konsideratat e Buferit

Përzgjedhja e tamponëve duhet të marrë në konsideratë stabilitetin e objektivit, mikroambientin lidhës dhe lidhjen minimale jo-specifike në skenarin aktual të aplikimit. Proteinat e palidhura, detergjentët jo-jonikë dhe përqendrimet fiziologjike të kripërave janë të favorshme për reduktimin e sfondit. Ekzistojnë edhe kushte të tjera, të tilla si disa objektiva mund të kërkojnë shtimin e kationeve bivalente ose kofaktorëve të tjerë në tampon, kofaktorët e proteinave mund të bashkë-fiksohen me objektivin, mund të shtohen në tamponin e renditjes dhe madje mund të përdoren si një mjet për kapjen e objektivit.

Konsideratat e Presionit

Konsideratat e zakonshme të presionit të përzgjedhjes përfshijnë përqendrimin e molekulave të synuara, kohën e lidhjes, intensitetin e larjes, etj. Teknika të tjera për rritjen e presionit të përzgjedhjes përfshijnë përdorimin e denaturantëve (si acidet, ureja dhe guanidina), tretësit organikë, rritjen e temperaturës ose rritjen e përqendrimit të ligandëve ose objektivave konkurrues në tamponin e larjes.
Midis tyre, raundi i parë i shqyrtimit është i rëndësishëm. Raundi i parë i shqyrtimit është të kapë sa më shumë klone pozitive të jetë e mundur nga biblioteka e ndërtuar, duke hequr klonet jo-specifike. Duhet të përdoren objektiva të veshura me pore ose një numër i madh objektivash të tretshëm për të siguruar që të kapen një numër i madh fagësh të lidhur për të ruajtur diversitetin e bibliotekës. Në raundet pasuese të shqyrtimit, presioni i përzgjedhjes duhet të rritet me rritjen e pasurimit, larjes së shumëfishtë dhe rritjes së kohës së larjes, klonet me afinitet të lartë mund të shqyrtohen.

Strategjia e Shqyrtimit Negativ

Etiketat e antigjenit dhe materialet bartëse. Procesi i shqyrtimit është shqyrtimi i të gjitha substancave në konjugatet e antigjenit, siç janë etiketat, proteinat e shkrirjes dhe substratet mbështetëse. Shqyrtimi negativ i jo-shënjestrave mund të kufizojë pasurimin e antitrupave të tjerë përveç antigjenit të synuar.
Qelizat e plota, liposomet, disqet nanofosfolipide dhe VLP-të mund të skrinohen negativisht duke përdorur qeliza të simuluara të transfektuara ose qeliza të patransfektuara gjatë skriningut të linjave qelizore të transfektuara.
Largimi i përzierjeve komplekse të antigjeneve. Shqyrtimi i rreptë negativ mund të kryhet për molekula të panjohura ose komplekse të synuara, të tilla si qelizat e plota ose proteinat e papastra.
Strategjia e antitrupave kundër vendeve specifike të antigjeneve, njëra është të eluohet antitrupi që mund të konkurrojë me ligandin duke shtuar një përqendrim të lartë të ligandeve, dhe tjetra është të bllokohet antitrupi.

Zbatimi i Fagut të Shfaqjes

Zbulimi i antitrupave është bërë gjithnjë e më i rëndësishëm në mjekësinë moderne. Ekzistojnë qasje të ndryshme për zbulimin e antitrupave, por teknologjia e shfaqjes së fagëve përdoret më shumë në shkencën mjekësore. Që nga viti 1990, formate të ndryshme të antitrupave janë përdorur për të ndërtuar biblioteka të fagëve, duke përfshirë VH, VHH, scFvs, diatrupa dhe antitrupa Fab.
*Bibliotekat e peptideve të fagut lejojnë përcaktimin e shpejtë të sekuencës së epitopeve të proteinave dhe janë bërë një mjet i fuqishëm për të hetuar ndërveprimin midis epitopeve dhe receptorëve të antigjenit.
*Fragmentet e antitrupave bashkohen me G3P të fagut M13, dhe duke klonuar një numër të madh gjenesh që kodojnë një fragment antitrupi, mund të gjenerohen biblioteka të mëdha antitrupash të shfaqjes së fagut nga të cilat mund të zgjidhen shumë antitrupa të ndryshëm.
Sistemi i shfaqjes së fagut T7 ka shumë përparësi, duke përfshirë thjeshtësinë, sigurinë e lartë, stabilitetin, ruajtjen dhe transportin e lehtë, kështu që sistemi përdoret në vaksinat parandaluese dhe terapeutike.
Sistemi i shfaqjes së fagut T7 mund të zbulojë antigjene të ndryshme, siç janë antigjenet sipërfaqësore të mikroorganizmave patogjenë dhe antigjenet kancerogjene.

Rastet tona të Shërbimit

SHËRBIM

If you have any questions, please feel free to contact us at any time.

Leave Your Message

Shërbim i Sugjeruar