Struktura bazë e antitrupit me një zinxhir të vetëm (scFv) është të lidhë rajonin variabël të zinxhirit të lehtë (VL) dhe rajonin variabël të zinxhirit të rëndë (VH) të antitrupit për të formuar një molekulë funksionale me një zinxhir të vetëm. VL përmban tre rajone përcaktuese plotësuese (CDR) që bashkëveprojnë drejtpërdrejt me pjesë specifike të antigjenit. VH përmban tre struktura CDR, të cilat së bashku me VL formojnë vendin e lidhjes së antigjenit të antitrupit. Lidhja e VH dhe VL është kritike për specifikën e njohjes së antitrupave. Dy rajonet variabël (VL dhe VH) janë të lidhura nga zinxhirë peptidikë fleksibël, në mënyrë që ato të jenë afër njëra-tjetrës në hapësirë ​​për të formuar një vend të plotë lidhjeje të antigjenit. Përmes teknikave të inxhinierisë gjenetike, sekuenca koduese e scFv mund të klonohet në një vektor të përshtatshëm, të shprehur dhe të prodhuar në pritës të ndryshëm.

Meqenëse antitrupat scFv janë të vegjël, ato mund të depërtojnë në inde më lehtë, gjë që është veçanërisht e rëndësishme për terapinë e synuar të tumorit.

Sekuenca e scFv mund të modifikohet lehtësisht nga inxhinieria gjenetike për të përmirësuar specifikën, afinitetin ose funksione të tjera të saj.

Antitrupi scFv ka stabilitet të mirë termik dhe kimik, dhe mund të ruajë aktivitetin në kushte të ndryshme.

Antitrupi scFv mund të shprehet në baktere, maja ose qeliza gjitarësh, duke ulur kostot e prodhimit.

Antitrupat scFv zakonisht kanë imunogjenitet të ulët për shkak të dizajnit të tyre të humanizuar, duke zvogëluar efektet anësore në përdorimin klinik.

Sekuenca e rajonit variabël të antitrupit scFv u përcaktua. Ky hap përfshin përzgjedhjen e sekuencës optimale të antitrupave për të siguruar specifikë të lartë dhe afinitet lidhës për antigjenin e synuar. Aspekti kryesor i fazës së projektimit të sekuencës së klonimit është të krijohet një peptid lidhës me fleksibilitet dhe stabilitet, duke lidhur rajonin variabël të zinxhirit të lehtë (VL) dhe domenet e rajonit variabël të zinxhirit të rëndë (VH), në mënyrë që molekula scFv të mund të paloset dhe shprehet saktë. Hapi tjetër është të sintetizohen fragmente të ADN-së që korrespondojnë me rajonet e aminoacideve VL dhe VH. Në mënyrë tipike, kjo përfshin përdorimin e PCR (reaksion zinxhir polimerazë) ​​për të amplifikuar këto fragmente gjenesh. Gjenet e amplifikuara u lidhën më pas me PCR të zgjatjes së mbivendosjes për të formuar një sekuencë të vetme koduese scFv. Gjeni i plotë u fut në një vektor shprehjeje si pET ose pGEX, i cili është i dobishëm për shprehjen pasuese të proteinës scFv në qelizat pritëse.

Proteina në përgjithësi kryhet nga etiketat e afinitetit në vektorin e klonimit scFv, siç është etiketa His ose etiketa FLAG, të cilat kombinohen me nikel ose rrëshirë specifike dhe pastrohen me kromatografi afiniteti. Hapa të tjerë, siç është kromatografia e filtrimit me xhel, ndihmojnë në ndarjen e monomerit scFv të palosur saktë nga agregatet dhe papastërtitë sipas parimit të përjashtimit të madhësisë.

Suksesi i shprehjes dhe pastrimit u vlerësua fillimisht duke përdorur SDS-PAGE, e cila dha informacion mbi peshën molekulare dhe pastërtinë e scFv. Specifikiteti dhe efikasiteti i shprehjes u konfirmuan më tej nga analiza Western Blot. Për të vlerësuar aktivitetin e lidhjes dhe afinitetin, u përdorën teknika të tilla si ELISA, rezonanca sipërfaqësore e plazmoneve (SPR) ose ndërhyrja bioshtresore (BLI) për të ofruar njohuri të hollësishme mbi ndërveprimin midis scFv dhe antigjenit të tij të synuar.

Figura 1: Modeli i antitrupave që tregon përbërjen e nënnjësive dhe shpërndarjen e domenit kryesor përgjatë zinxhirëve polipeptidikë. Antitrupi variabël i fragmentit të vetëm të zinxhirit (scFv) i gjeneruar nga teknologjia e antitrupave rekombinantë shfaqet në zonën e hijezuar. (Burimi i referencës: Antitrupi scFv: parimet dhe zbatimi klinik.）

Figura 2: Struktura e një fagu filamentoz që shfaq fragmente scFv në sipërfaqen e tij. (Burimi i referencës: Antitrupi scFv: parimet dhe zbatimi klinik.）

Antitrupat scFv mund të kombinohen me ilaçe ose radioizotope për të synuar qelizat specifike të kancerit, duke përmirësuar kështu saktësinë dhe efektivitetin e trajtimit.

Si reagent zbulues, scFv mund të përdoret në ELISA dhe teknika të tjera imunoanalize për të ndihmuar në identifikimin e proteinave ose patogjenëve specifikë.

Në kërkimin bazë, antitrupat scFv përdoren shpesh për zbulimin dhe pastrimin e proteinave, si dhe për të studiuar ndërveprimet proteinë-proteinë.

Antitrupat scFv mund të zhvillohen për të bllokuar hyrjen e virusit në qelizat pritëse, potencialisht për terapi antivirale.

Duke bllokuar citokina ose molekula imune specifike, antitrupat scFv mund të përdoren për të trajtuar sëmundjet autoimune.

Alpha Lifetech ofron shërbime të Prodhimit të Antitrupave scFv, duke mbuluar të gjithë procesin, nga projektimi i sekuencës së gjeneve deri te pastrimi i antitrupave, për të siguruar produkte të shkëlqyera për klientët tanë. Ne kemi përvojë të gjerë në fushën e inxhinierisë së antitrupave dhe mund të mbështesim projekte të ndryshme, duke filluar nga prodhimi në shkallë të vogël i nivelit të kërkimit deri te aplikimet industriale në shkallë të gjerë. Alpha Lifetech gjithashtu ofron shërbime të personalizuara të përshtatjes për të optimizuar vetitë e antitrupave, të tilla si stabiliteti dhe efikasiteti, bazuar në nevojat specifike të klientit.