Antitrupi VHH është një antitrup natyral i zinxhirit të lehtë që mungon (VL) që gjendet në serumin e kafshëve deve. Struktura e antitrupit VHH është e thjeshtë dhe përbëhet vetëm nga dy zinxhirë të rëndë (VH). Nanotrupat përfshijnë rajonin variabël të zinxhirit të rëndë (VHH) me një peshë molekulare prej rreth 15 kDa. Antitrupi VHH ka aftësinë normale për të njohur antigjenet dhe tregon afinitet të shkëlqyer, specifikë të shkëlqyer, stabilitet të shkëlqyer dhe depërtim të shkëlqyer. Antitrupat ndaj strukturës janë gjetur që atëherë në kafshë të tjera, të tilla si alpakat dhe peshkaqenët. Nanotrupat, të cilët përmbajnë vetëm një rajon variabël të zinxhirit të rëndë dhe dy rajone konvencionale CH2 dhe CH3, pavarësisht se nuk kanë domen VL, janë një antitrup shumë i qëndrueshëm me një domen të vetëm dhe njësia më e vogël e njohur lidhëse me aktivitet antitrupash. Alpha Lifetech mund t'u ofrojë klientëve, duke përfshirë përgatitjen e nanotrupave, ndërtimin dhe shqyrtimin e bibliotekës së nanotrupave, shprehjen e nanotrupave VHH dhe një sërë shërbimesh, përmes platformës së zhvillimit të sintezës së nanotrupave dhe shfaqjes së fagëve, mund të ndërtojë dhe shqyrtojë në mënyrë efikase duke përfshirë një shumëllojshmëri të llojeve të ndryshme të bibliotekës së antitrupave të fagëve, duke u ofruar klientëve tanë zgjidhje specifike dhe me specifikë të lartë të antitrupave. Ne gjithashtu mund të zhvillojmë strategji profesionale të humanizimit të antitrupave për klientët tanë, të cilat mund të humanizohen për nano-trupa, dhe kompania jonë është pothuajse ekuivalente me antitrupat njerëzorë.

Së pari, alpaka pa asnjë sëmundje, lejon që imunogjenët të stimulojnë sistemin e saj imunitar për të prodhuar një përgjigje imune, dhe këto kafshë mund të prodhojnë antitrupa me një domen të vetëm. Pastaj, ne izoluam qeliza B të vetme nga PBMC-ja e alpakës, dhe ARN-ja nga qelizat B u nxor dhe u transkriptua në ADNc. Së fundmi, e përdorëm si shabllon dhe shqyrtuam sekuencën tonë të synuar VHH me anë të elektroforezës. Më pas, kryem një analizë sekuencimi të sekuencës së antitrupave VHH të shqyrtuar, e cila mund të përmirësojë stabilitetin dhe afinitetin e antitrupave VHH të përgatitur. Në të njëjtën kohë, ne gjithashtu mund të kryejmë mutagjenezë të drejtuar në vend dhe shqyrtim të stabilitetit të antitrupave VHH. Ne mund të arrijmë stabilitet më të lartë të mutantëve të antitrupave VHH duke futur metoda speciale siç janë disa mutacione specifike për shqyrtim. Inxhinieri më pas futi sekuencën VHH që rezulton në vektorin e duhur të shprehjes (si plazmidet, viruset, etj.) për shprehjen e antitrupave VHH. Së fundmi, nëpërmjet teknologjisë së shfaqjes së fagut ose teknologjisë së shfaqjes së majasë, antitrupat VHH shprehen në sipërfaqen e strehuesit, dhe më pas nanoantitrupat që mund të lidhen posaçërisht me antigjenin e synuar zgjidhen duke përdorur antigjene të veshura dhe ELISA. Alpha Lifetech gjithashtu sekuencoi dhe verifikoi nano-trupat e përzgjedhur për të siguruar saktësinë dhe aktivitetin funksional të sekuencave të nano-trupave të dorëzuara klientëve.

Teknologjia VHH përfiton nga përparime të ndryshme në inxhinierinë gjenetike, në mënyrë që gjeni i synuar të ripërsëritet dhe të riorganizohet së bashku në rrethana normale, gjë që mund të ofrojë një mjet shumë të lidhur për teknologji të tjera, të cilat mund të përmbajnë etiketa të ndryshme, dhe antitrupat e prodhuar nga teknologjia VHH janë të përshtatshëm për pastrim. Duke përdorur teknika të shqyrtimit me rendiment të lartë, Alpha Lifetech mund të shqyrtojë antitrupat VHH me funksione specifike të kërkuara nga klientët nga një numër i madh antitrupash në një periudhë të shkurtër. Ndërkohë, antitrupat VHH mund të prodhohen për një kohë të pacaktuar dhe ekonomikisht, kur antitrupat VHH ekspozohen ndaj temperaturave të larta dhe tretësve të tjerë. Antitrupat VHH mund të manipulohen gjenetikisht për të gjeneruar përdorime të tjera, të tilla si bërja e skelave, etiketimi dhe ndryshimi i aminoacideve specifike. Antitrupat VHH janë të përshtatshëm për çdo platformë të zakonshme duke përdorur antitrupa konvencionalë, të tilla si pllaka mikrotitrimi, biosensorë elektrokimikë dhe pajisje rrjedhjeje anësore. Për shkak të madhësisë më të vogël të antitrupave VHH, antitrupat VHH mund të kenë një dendësi më të lartë në domenin e lidhjes, në mënyrë që antitrupat VHH të kenë një avantazh të jashtëzakonshëm në rritjen e sinjalit dhe për këtë arsye ndjeshmëri më të lartë. Në të njëjtën kohë, antitrupi VHH ka një zbatim shumë të gjerë në diagnostikimin dhe trajtimin e tumoreve, diagnostikimin e inflamacionit, trajtimin e sëmundjeve të sistemit nervor qendror dhe fusha të tjera. Antitrupat VHH janë veçanërisht të dobishëm për monitorimin e mikotoksinave në ushqim dhe kafshë për kafshë sepse ato modifikohen lehtësisht gjenetikisht dhe kanë stabilitet të shkëlqyer.

Në procesin e imunizimit, ne përdorim një sërë imunogjenësh. Sipas vetive të imunogjenëve, ne mund t'i ndajmë ato në antigjene natyrore, antigjene rekombinante, antigjene sintetike dhe antigjene molekulare të vogla. Antigjenet natyrore përfshijnë imunogjenet virale. Procesi i pastrimit të imunogjenëve natyrorë është i ndërlikuar, gjë që është gjithashtu më e vështirë se imunogjenët e tjerë, dhe kostoja e pastrimit është gjithashtu më e lartë. Imunogjeni viral ndahet në vaksinë të inaktivizuar me virus të plotë, vaksinë me nënnjësi, vaksinë vektoriale virale dhe vaksinë me ARNm. Vaksina e inaktivizuar me virus të plotë mund të stimulojë trupin për të prodhuar një përgjigje imune, por virusi duhet të inaktivizohet plotësisht, dhe procesi i përgatitjes është më i ndërlikuar. Për vaksinën me nënnjësi, ne përdorëm vetëm proteinën sipërfaqësore virale si antigjen, kështu që siguria e këtij imunogjeni është e lartë, por duhet të shtohet adjuvant për të rritur efektin imunitar. Pas modifikimit gjenetik, adenovirusi dhe lentivirusi përdoren si vektorë për të nxitur shfaqjen e përgjigjes imune përmes replikimit dhe shprehjes virale. Efekti imunitar është efikas dhe i qëndrueshëm, por procesi i përgatitjes është kompleks, kështu që ne duhet të kontrollojmë rreptësisht biosigurinë. Ndërsa ARNi mund të importohet direkt në qeliza, në mënyrë që qelizat të mund të shprehin antigjenin dhe të stimulojnë shfaqjen e përgjigjes imune, ky proces është më i vështirë, gjë që kërkon që ne të sigurojmë stabilitetin dhe efikasitetin e shpërndarjes së ARNi-së. Edhe pse antigjenet rekombinante ndryshojnë në konformacion nga antigjenet natyrore, ato mund t'i nënshtrohen prodhimit të gjerë industrial. Proteinat e molekulave të vogla ose antigjenet polipeptidike mund të përgatiten me metoda të sintezës in vitro. Struktura e tyre është e kontrollueshme, por mund të jetë e ndërlikuar në dizajn. Antigjenet e molekulave të vogla janë kryesisht komponime të molekulave të vogla si peptidet dhe nukleotidet, sepse ato nuk janë imunogjene më vete, kështu që ato mund të përdoren vetëm si imunogjene pas lidhjes me bartës makromolekularë.

Pesha molekulare e nanotantitrupave është shumë e vogël, zakonisht rreth 12-15 kDa, vetëm një e dhjeta e antitrupave tradicionalë IgG. Struktura kristalore është një top rugbi me diametër rreth 2.5 nm dhe gjatësi rreth 4.2 nm. Struktura unike molekulare lejon depërtim të mirë në inde, gjysmë-jetë më të shkurtër dhe pastrim më të lartë renal, përmes barrierës hemato-tru. Nanotantitrupat përbëhen nga rajone përcaktuese plotësuese dhe të shtyllës kurrizore. Rajonet e vendimmarrjes plotësuese/plotësuese përfshijnë CDR 1, CDR 2 dhe CDR 3. Diapazoni i gjatësisë prej 3 deri në 28 aminoacide në rajonin CDR 3 siguron kapacitetin e ruajtjes së bibliotekës së nanotantitrupave. Krahasuar me rajonin tradicional të antitrupave CDR 3 me vetëm 8 deri në 15 aminoacide, disa nga rajonet CDR 3 me CDR 3 më të gjata na ndihmuan të identifikonim epitopet e fshehura në sipërfaqen e antigjenit. Rajoni i shtyllës kurrizore të nanotrupave përfshin FR 1, FR 2, FR 3 dhe FR 4, me katër mutacione aminoacidesh hidrofile në FR 2, dhe ky mutacion rrit tretshmërinë në ujë të antitrupit. Lidhja speciale disulfide midis CDR 1 dhe CDR 3 rrit stabilitetin e antitrupave nën presion të lartë, temperaturë të lartë, denaturant dhe kushte të tjera, gjë që është e favorshme për prodhimin dhe ruajtjen e nanotrupave, dhe gjithashtu krijon mundësinë e metodave të reja të administrimit.